鲤鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

通过测定鲤鱼肉酶解物对Fenton体系产生的·OH的清除效果,从木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶和复合风味蛋白酶中,筛选出复合蛋白酶作为酶解鲤鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的水解酶.用响应面分析法(RSM)对该酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:温度55℃、酶解时间1.5 h、pH=6.5、酶加量为250 U/g底物、底物质量分数为25%,在此条件下酶解物的水解度为4.5%.利用Sephadex G-15凝胶层析测定酶解物分子量分布,结果显示,活性肤分子量为477 u～1 058 u.     

泥鳅肉酶解物对羟自由基的清除作用

为了探讨深度开发泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用比色法研究泥鳅肉酶解物对Fenton 体系产生的羟自由基的清除效果,从复合风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶5 种酶中,筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适宜水解酶。用响应面分析法(RSM)对该酶的酶解条件进行优化,并采用Sephadex G-15 凝胶层析测定最佳酶解条件下制得的酶解液中活性肽的相对分子质量分布。结果表明,菠萝蛋白酶的最佳酶解条件为：固液比1:4、加酶量0.2%、pH6.47、温度54.48℃、酶解时间59.97min,酶解物对羟自由基的清除率为99.03 %,IC50 值为0.57mg/mL。酶解液中活性肽的相对分子质量范围为1129～2344。     

鳙鱼肉酶解工艺及其产物清除羟自由基活性的研究

以高产低值的鳙鱼肉为原料,通过测定水解度及酶解产物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从胃蛋白酶、Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、胰酶4种常用蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为酶解鳙鱼肉制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交试验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行高效液相色谱分离,测定分子量分布。结果表明:木瓜蛋白酶在温度45℃、p H7.0、酶加量2%、底物浓度20%、时间3 h的水解条件下,酶解产物对羟自由基清除率达76.13%。木瓜蛋白酶酶解物利用高效体积排阻色谱测定其主要分子量范围是2 691~32 u。     

贻贝酶解物对羟自由基清除作用的试验研究

通过测定贻贝酶解物对离体实验系统（Fenton体系）产生的羟自由基的清除效果，从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶3种酶中筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解贻贝制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶；并通过正交实验L9（3^4）对2种酶的水解条件进行优化。结果表明木瓜蛋白酶在温度60℃、酶解时间15min、DH7．5、酶质量分数1．00％的水解条件下，酶解物对羟自由基的清除效果最佳；胰蛋白酶在温度45℃、酶解时间35min,pH8，5、酶质量分数0．75％的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果最佳。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟基自由基清除率峰，清除率为76．15％，在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为1．4kDa；胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟基自由基清除率峰，其清除率为69．13％，该峰处活性肽的分子量也为1．4kDa。     

鳙鱼肉可溶性蛋白酶解工艺优化的研究

运用响应面（RSM）分析法优化了鳙鱼肉制备可溶性蛋白的酶解工艺。结果表明：木瓜蛋白酶用量、水解温度、料水比、pH值和酶解时间对蛋白质回收率和水解度有显著的影响。当木瓜蛋白酶用量为0,2％,温度为50℃,料水比为1：1,pH值为6．5,酶解时间为5.0h时,蛋白质回收率和水解度分别为77．60％和14．85％。所得蛋白酶解物在酸性和中性条件下有良好的溶解性和稳定性,且酶解蛋白基本没有苦味,可作为蛋白营养强化基料广泛应用于各种食品中,为质优价廉的鳙鱼肉深度开发利用提供了一条新途径和方法。     

鲨鱼肉酶解物清除自由基能力的研究

目的:获得高抗氧化活性的鲨鱼肉酶解物,以期为鲨鱼肉的深加工利用提供依据。方法:以酶解液的DPPH.清除率为指标,采用4种蛋白酶酶解鲨鱼肉,筛选出最佳用酶;利用响应面法对其酶解条件进行优化,并对最佳条件下得到的酶解产物进行氨基酸分析。结果:1)采用响应面分析法,建立了鲨鱼肉酶解条件与酶解物DPPH.清除率的回归方程:Y=66.18667-0.8475X1-5.3375X2-4.3375X3+0.812917X12-1.4375X1X2+1.5875X1X3-3.757083X22+1.3375X2X3-5.552083-X32,其中酶解温度和pH对酶解物的DPPH.清除率影响极显著;2)优化后的酶解条件是:加酶量1300U/g,酶解温度33℃,pH6.30,此时酶解液的DPPH.清除率为68.33%;3)氨基酸分析显示鲨鱼肉酶解产物是质量较好的蛋白质。结论:鲨鱼肉酶解物具有较高的清除DPPH自由基的能力,有望用于抗氧化功能的开发。     

大豆分离蛋白酶解物清除羟自由基作用的研究

用比色法测定了大豆分离蛋白(SPI)酶解物对羟自由基的清除作用。结果表明,SPI酶解物对Fenton体系产生的·OH自由基有清除活性。SPI经木瓜蛋白酶水解15min,其酶解物清除能力已达最大值,为56.5%;经SephadexG-50凝胶柱分离,所得肽段各组分间的清除活性存在明显差异;用SDS-PAGE凝胶电泳测定各组分的分子量,结果显示分子量在11.355KD～5.154KD的肽段清除能力最强,达60.4%。     

鳙鱼酶解物体外抗氧化的研究

利用碱性蛋白酶Alcalase对鳙鱼进行控制酶解,制备出具有清除自由基活性的酶解物并比较其还原能力和对脂肪氧合酶活性的影响,并考察其对红细胞溶血、肝线粒体肿胀的影响,结合不同处理后肝脑组织中MDA浓度的测定以对鳙鱼酶解物在模拟体系中的抗氧化活性进行综合评价。结果表明三种鳙鱼酶解物的肽提取率均在70%以上且主要由寡肽(含5～6个氨基酸残基)组成,三种酶解物均具有一定的还原能力,在较高浓度时能抑制脂肪氧合酶的活性并可在体外抑制因H2O2引发的新西兰家兔红细胞溶血和由FeSO4和Vc诱导的肝线粒体肿胀,同时降低肝脑组织中MDA的产生。说明鳙鱼酶解物在一定浓度范围内具有抗氧化作用,比较三种酶解物的抗氧化特性可知酶解物C具有较强的综合抗氧化能力,可作为后续研究的材料。     

酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性产物的研究

研究以高产低值的中国毛虾为原料,通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从风味酶、复合酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L等10种常用蛋白酶中筛选出Alcalase2.4L作为酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交实验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行SephadexG-15凝胶色谱分离(1.6cm×68cm),测定分子量分布并收集各吸收峰。结果表明:Alcalase2.4L在温度55℃、pH9.0、酶底物浓度比[E/S]为12.0AU/g、时间3h的水解条件下,酶解物对羟自由基清除率为84.6%,水解度为26.28%,平均肽链长为3.81。Alcalase2.4L酶解物凝胶色谱分离得到一个较强羟自由基清除活性的组分分子量范围是2259～869,IC50为0.385mg/mL,肽链长度在22.4～7.7之间。     

连续串联超滤对鳙鱼酶解物抗氧化活性的影响

采用连续串联超滤技术对鳙鱼蛋白酶解物进行分离,比较各组分清除DPPH·自由基的能力.通过扫描电镜观察5 kDa滤过物对受到·OH攻击的红细胞的保护作用.结果表明:鳙鱼酶解物中大多是分子质量小于5 kDa的短肤,采用串联连续超滤技术分级后,56.7%的肽段留在此滤过液中.滤过物的抗氧化活性强于原酶解物,且清除DPPH·的EC50从2.739mg/mL变为1.556mg/mL.通过电镜观察经·OH诱变的红细胞,结果发现经5 kDa滤过物保护后的红细胞畸变率较低,鳙鱼酶解物具有抗氧化功能.对鳙鱼酶解物络合金属离子能力的研究表明,其抗氧化活性与其络合过渡态金属离子的能力呈显著正相关.     

鳙鱼鱼肉蛋白的酶解及其对功能性质的影响

为了改善鳙鱼鱼肉蛋白(BCMP)的功能性质以扩大其在食品工业中的应用,以鳙鱼为原料制备了鳙鱼鱼肉蛋白,并利用碱性蛋白酶Alcalase2.4L对其进行水解,得到了3种不同水解度(DH4.5%、DH9.0%、DH13.5%)的酶解物。研究了BCMP及其酶解物的功能性质,包括溶解性、持水性、持油性、乳化性、起泡性。结果表明,与原鳙鱼鱼肉蛋白相比,酶解物的功能性质除持油性以外均有不同程度的提高。此外,DH4.5%的酶解物乳化性和起泡性最高,过度水解(DH9.0%、DH13.5%)反而造成乳化性和起泡性下降。     

Purification and characterization of pyrophosphatase from bighead carp (Aristichthys nobilis)

Pyrophosphatase (PPase, EC 3.6.1.1) responsible to the hydrolysis of pyrophosphate (PPi) in muscle was purified from bighead carp (Aristichthys nobilis), and characterized in detail herein for the first time. PPase was extracted with 20 mmol/L Tris-HCl buffer (pH 7.0) containing 0.05 mol/L KCl, followed by heat treatment and ammonium sulfate precipitation. Then it was purified by deithylaminoethyl-cellulose (DE52) and Sephacryl S-300 chromatography, subsequently resulted in a 114.5-fold purification. The molecular mass of the PPase was defined to be 50 kDa with two subunits. The optimum pH of the purified PPase was around 8.0, and its optimum temperature was confirmed to be 50 °C. Magnesium ion was necessary to the activity of PPase. An excess of PPi over Mg²⁺ resulted in inhibition of PPase. When the Mg²⁺/PPi molar ratio was 1:1, the maximal enzyme activity was obtained. In addition, PPase converted PPi to orthophosphate (Pi) stoichiometrically with a K_m of 1.98 mmol/L under the condition of 5 mmol/L Mg²⁺. Ethylene diamine tetraacetate (EDTA) activated the activity of PPase at low concentration, however, it consumingly did inhibit the enzyme activity at high concentration.     

Free radical scavenging activity of porcine plasma protein hydrolysates determined by electron spin resonance spectrometer

A study was conducted to investigate the antioxidant capacity of porcine plasma protein before and after enzymatic hydrolysis. Porcine plasma protein was hydrolyzed by using Alcalase with degree of hydrolysis (DH) ranged from 0 to 17.8%. The free radical scavenging effects of porcine plasma protein hydrolysates (PPH) were evaluated by electron spin resonance (ESR) spectrometer. The reducing power of PPH increased with increasing of DH (P < 0.05). The 5-h PPH exhibited the strongest inhibition of lipid oxidation, as indicated by lowest thiobarbituric acid-reactive substance values in a liposome-oxidizing system, and the strongest free radical scavenging ability on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicals (DPPH), hydroxyl (OH) and superoxide (O₂-) radicals. The increase of protein concentration enhanced (P < 0.05) free radical scavenging effect of PPH. Although non-hydrolyzed plasma protein displayed an antioxidative effect, it was far less potent than PPH. The results indicated that the antioxidant capacity of porcine plasma protein could be enhanced by enzymatic hydrolysis of Alcalase.     

油炸鳙鱼头加工及其保藏性的研究

研究了油炸鳙鱼头的加工工艺,对保藏期间鳙鱼头的感官指标、菌落总数和挥发性盐基氮数值的变化进行了观察和检测,评价了不同保藏条件对油炸鳙鱼头货架期的影响。实验结果表明:采用油炸工艺、真空包装并结合适当低温贮藏能使产品的货架期达到90d。      

Optimising the free radical scavenging activity of shrimp protein hydrolysate produced with alcalase using response surface methodology

Response surface methodology (RSM) was used to optimise the hydrolysis parameters of Acetes chinensis by Alcalase 2.4L in order to obtain a hydrolysate with potent radical scavenging activity. The parameters were temperature, pH and enzyme concentration/substrate concentration (E/S) ratio with degree of hydrolysis (DH) being the response. The results showed that the optimum condition was: temperature at 57 °C, pH at 8.0, E/S ratio at 2.6AU 100 g⁻¹ shrimp, hydrolysis time 3 h. The DH was 26.32%, the hydroxyl radical scavenging activity was up to 88.12% and the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was 35.61%. The gel column filtration chromatography by a Sephadex G-25 column yielded five fractions. The molecular weight of the most potent free radical scavenging activity fraction ranged from 915 to 207 Da, its IC₅₀ for hydroxyl radical was 0.03 mg mL⁻¹, and IC₅₀ for DPPH radical was 8.86 mg mL⁻¹.     

大米草黄酮的提取工艺及清除羟自由基作用的研究

通过单因素实验及正交实验对大米草黄酮提取工艺条件进行探讨.结果表明,大米草黄酮提取的最佳工艺条件是料液比 1:10、温度 80℃、乙醇浓度 70%、提取时间 3 h、提取3次,此条件下黄酮的提取率为 0.478%.此外.还研究了对羟自由基的清除作用,发现大米草提取物对羟自由基清除能力低于抗坏血酸.略高于芦丁.     

Optimization of antioxidant peptide production from grass carp sarcoplasmic protein using response surface methodology

The sarcoplasmic protein was extracted from the muscle of grass carp, a Chinese freshwater carp, and was hydrolyzed with five proteases to produce antioxidant peptides. Papain hydrolysate was found to have the greatest activity against lipid peroxidation. Response surface methodology (RSM) was applied to optimize the hydrolysis conditions (including enzyme to substrate ratio, time and temperature). The minimum EC₅₀ value (317.25 μg/mL) which signified the maximum antioxidant activity was obtained at an enzyme to substrate ratio of 0.79%, an incubation time of 5.69 h and an incubation temperature of 52.15 °C, which was in agreement with the predicted value (313.99 μg/mL) estimated by RSM within a 95% confidence interval. Also, it was found that moderate denaturation of the sarcoplasmic protein and a modest increase in the degree of hydrolysis promoted the antioxidant activities of the hydrolysates. Oligopeptides (< 3 kDa) contributed more to the antioxidant activity than polypeptides.     

草鱼肉蛋白酶解物功能特性及质量控制的研究

采用Neutrase对草鱼鱼肉蛋白进行了酶解,得到了水解度(DH)为4.72%、9.80%、13.32%的酶解产物(NH),并分析了pH与水解度对酶解产物功能特性的影响。结果表明,酶解产物的溶解性、乳化性、起泡性在pH为4时达到最低,而后随pH的增大而增加。在pH为3～8的范围内随水解度的增加,酶解产物的溶解性增加,起泡性降低。pH为4时,水解度为4.72%、9.80%、13.32%的酶解产物的热稳定性之间存在显著性差异(P<0.05),且随水解度升高而增大。在pH为3～5的范围内酶解产物的乳化性随水解度升高而降低。酶解产物的溶解性、乳化性、起泡性间存在相关性(P<0.05)。     

糖基化反应条件对鲢鱼鱼肉木瓜蛋白酶酶解产物清除DPPH自由基影响

为提高鲢鱼鱼肉蛋白酶酶解产物抗氧化活性,将葡萄糖和低聚异麦芽糖通过糖基化反应分别引入到鲢鱼鱼肉木瓜蛋白酶酶解产物中,利用分光光度计测定其清除DPPH自由基能力。研究结果表明,木瓜蛋白酶酶解物与葡萄糖以1:4的比例、在60℃下进行糖基化反应,可以得到清除DPPH自由基能力较强的产物,其清除能力可达78.12%。