白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达研究

目的：研究IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达水平的变化，为细胞因子网络调控牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法：采用原代培养的人牙周膜成纤维细胞，取5-8代细胞以IL-1β梯度浓度干预，采用RT-PCR法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果：在正常的人牙周膜成纤维细胞中未见TRAF6基因表达，IL-1β干预后，TRAF6呈阳性表达，并且随着IL-1β干预的浓度增高，其表达水平上调。结论：IL-1β干预后TRAF6在HPLFs中的表达水平的变化提示TRAF6可能是参与牙周膜成纤维细胞功能调控的重要信号分子。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究

目的通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料。方法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定。取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强。结论IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子．晶和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养，对照组采用含小牛血清的DMEM培养液，实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入，通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后，人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖，而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显（P〈0．05）。结论转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,对照组采用含小牛血清的DMEM培养液,实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入,通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后,人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖,而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显(P<0.05)。结论转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂对IL-1β所介导生物学功能的影响,为进一步临床应用提供理论依据.方法:采用细胞培养技术和ELISA夹心法.结果:经IL-1β单独作用,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL-6含量明显增高,当一定浓度的IL-lra与1ug/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后,培养上清液中IL-6的含量比单独IL-1β作用组低.结论:IL-lra能够抑制IL-l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL-6.     

转化生长因子-β1对口腔癌相关成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究外源性转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle-actin,α-SMA)表达的影响,探讨TGF-β1对CAFs生物学性能的影响。方法以口腔正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)和未经处理的CAFs为对照组,采用蛋白印迹法观察10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12、24 h后对CAFs细胞中α-SMA表达的影响。结果未经处理的NFs组中未见明显α-SMA的表达,蛋白相对表达量为0.005;未经处理的CAFs组中可见明显α-SMA表达,蛋白相对表达量为0.355;10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞12 h后,α-SMA表达较未刺激CAFs明显升高,蛋白相对表达量为0.900(P<0.001);10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞24 h后,α-SMA表达持续升高,蛋白相对表达量为1.905(P<0.001)。与NFs组和CAFs组相比,10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12 h和24 h时能够明显上调CAFs细胞中α-SMA的表达(P<0.05),且作用24 h时更明显。结论 TGF-β1能够明显上调CAFs中α-SMA的表达,对CAFs的生物学性能具有重要影响。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响

目的:观察rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响.方法:酶消化法获取大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色鉴定.细胞培养液中分别加入10 μg/L、20μg/L rhTGF-β1后,不同时间点应用RT-PCR和ELISA法检测SZP mRNA和蛋白的表达.结果:加入10μg/L、20μg/L rhTGF-...     

小型猪一侧失牙及义齿修复后TMJ关节液中IL-1β、TNF-α、TGF—β1含量的变化

目的：检测小型猪一侧失牙及义齿修复后颞下颌关节（temporomandibularjoint，TMJ）关节液中IL-1β、TNF-α、TGF-β1含量，探讨其在颞下颌关节紊乱病中的作用及相互关系。方法：11头小型猪随机分为空白组2头、拔牙组4头和修复组5头，拔牙组和修复组左侧后牙全部拔除，修复组于拔牙后3个月义齿修复；每月采集双侧TMJ关节液，ELISA法测定IL-1β、TNF-α、TGF-β1含量（共6个月）。结果：拔牙组和修复组关节液中IL-1p浓度于第1个月达到最大值，拔牙组于第3个月、修复组于第5个月IL-1β浓度达到最小值；拔牙组于第4个月、修复组于第3个月TNF-α达到最大值；拔牙组和修复组于第3个月TGF-β1浓度达到最大值。结论：IL-1β启动并与TNF—α协同破坏TMJ；TGF-β1在TMJ损伤的修复中发挥重要作用。     

TGF-β1对钛表面成骨相关蛋白基因表达的影响

目的:通过观测特定浓度的转化生长因子β1(transforming growth factorsβ1,TGF-β1)对钛表面成骨细胞中骨钙素(osteocalcin,OC)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和I型胶原蛋白(collagen-I,COL-I)基因表达的影响,以探讨其对钛表面成骨细胞分化的作用。方法:体外培养成骨细胞接种于钛片表面,将其分为实验组和对照组,实验组加入0.5ng/ml的TGF-β1刺激细胞增殖和分化,收集第1d、3d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间OCmRNA、BSPmRNA和Col-ImRNA表达情况,对照组不加TGF-β1。结果:浓度为0.5ng/ml的外源性TGF-β1加入到接种于钛片表面的成骨细胞中后,均可显著增加几种细胞因子(OC、BSP和Col-I)基因的表达(P<0.05)。结论:浓度为0.5ng/ml的外源性TGF-β1对钛片表面的成骨细胞成骨相关因子表达有一定的促进作用。     

压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.     

缓释人富血小板血浆生长因子壳聚糖微球的制备

目的：制备载人富血小板血浆（hPRP）生长因子壳聚糖微球,观察其体外缓释效果。方法：选用离子凝胶法制备壳聚糖微球,利用微球吸附hPRP生长因子;以微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1的吸附率作为评价指标,优化微球制备配方,并观察优化配方微球体外缓释TGF-β1效果;以hPRP中PDGF-AB为对象考察优化配方微球对其吸附率、载生长因子率,验证微球吸附效果。结果：当壳聚糖溶液浓度为2.5mg/ml、10mg/ml多聚磷酸钠溶液滴加量为2.5ml时可获得优化的壳聚糖微球制备配方。优化配方微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1、PDGF-AB吸附率分别为78.02%、58.28%,载生长因子率分别为3.70ng/mg、1.31ng/mg;载hPRP生长因子的微球体外21天缓释TGF-β1累计35.80ng,占吸附总量的85.52%。结论：本实验制备的壳聚糖微球可初步实现吸附hPRP复合生长因子,并初步达到体外缓释效果。     

����ĥ��������������������ֱ�Ӹ�������������֯��ת����������-β1���仯�о�

目的观察大鼠磨牙应用矿物三氧化物凝聚体（MTA）直接盖髓术后牙髓组织中转化生长因子-β1（TGF—β）的表达变化及其在牙髓损伤修复中的作用。方法本研究于2012年10月至2013年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。28只雌性Wistar大鼠第一磨牙机械穿髓后用MTA直接盖髓,并以对侧第一磨牙为对照,分别于术后1、3、5、7、14、21、28d处死动物并取材（每次处死4只）,进行免疫组化染色,观察TGF-β1在牙髓组织的动态表达和定位情况,用图像分析软件测定各组标本中TGF—β1阳性染色的光密度值。结果在正常牙髓组织中TGF—β1基本无表达,MTA直接盖髓后TGF—β1表达强度呈先升高后降低的基本变化,其中盖髓后5d的TGF—β1表达最强,21d时接近正常水平。表达主要位于盖髓剂下方中性粒细胞、成牙本质细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞。结论MTA直接盖髓后,TGF—β1可能参与牙髓的损伤修复过程。     

转化生长因子β3对脂多糖诱导的成骨细胞中IL-6表达的影响

目的:探讨转化生长因子β3 (transforming growth factor β3,TGF-β3)对成骨细胞内炎性细胞因子IL-6表达的影响,及其发挥抗炎作用的机制.方法:20 μg/mL牙髓卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide of Porphyromonas endodontalis,Pe-LPS)刺激人成骨肉瘤细胞系MG63,构建成骨细胞炎症模型.取不同浓度(5～20 ng/mL)的人重组蛋白生长因子TGF-β3和TGF-β1,分别与20 μg/mL P.e-LPS共同作用于MG63细胞24 h后,利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测培养液上清中IL-6的表达水平.以10 ng/mL TGF-β3预处理细胞30 ain后,再与20 μg/mL P.e-LPS共同作用20 min,Western印迹法检测细胞内ERK1/2蛋白磷酸化的表达.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实时荧光定量PCR结果显示,单独20 μg/mL P.e-LPS作用下,MG63细胞内IL-6的表达显著增高(P＜0.01);TGF-β1在低浓度条件下(5～10 ng/mL)对IL-6的表达无显著作用,仅在20 ng/mL时可显著抑制IL-6的表达(P＜0.05).不同浓度的TGF-β3与Re-LPS共同作用均可显著抑制IL-6的表达(P＜0.01).ELISA结果显示,10～20 ng/mL TGF-β3可在蛋白水平上对IL-6有显著抑制作用(P＜0.05).单独P.e-LPS作用时,可使MG63细胞内ERK1/2蛋白的磷酸化水平升高(P＜0.01);而当TGF-β3与P.e-LPS共同作用时,ERK1/2的磷酸化被抑制(P＜0.05).结论:相同浓度条件下,TGF-β3比TGF-β1对成骨细胞炎症的抑制作用更为显著,ERK1/2信号机制参与了TGF-β3的抗炎过程.