宁夏某医院225例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测结果分析

目的分析宁夏某医院非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果。方法选择2014年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院住院的NSCLC患者225例进行回顾性分析,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测EGFR基因突变情况。结果 EGFR基因总突变率50.22%(113/225),最常见突变位点为19外显子19-del及21外显子L858R,突变率分别为21.33%及17.78%,20外显子T790M耐药突变率及20-Ins插入突变(非敏感突变)的突变率分别为3.56%及1.33%;EGFR各外显子双突变共10例;EGFR基因突变率在性别、年龄、民族、季节、标本类型之间差异无统计学意义(P>0.05),在年份、病理类型之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARMS-PCR可有效应用于临床病理石蜡标本基因突变检测,EGFR基因在19和21外显子存在较高的突变率,其突变亚型能指导小分子表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)的肿瘤靶向治疗。     

云南昆明地区非小细胞肺癌EGFR突变情况研究

目的 研究昆明地区非小细胞肺癌(non-small cell lung canncers,NSCLCs)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变特点及与临床特征(性别、年龄、吸烟、组织学分型)的相关性. 方法 采用突变扩增阻滞系统(amplification refractory mutation system,ARMS)检测昆明地区173例非小细胞肺癌EGFR基因第18～21号外显子基因突变情况,并分析其突变与临床特征的关系. 结果 173例NSCLCs共检测EGFR突变38.7％(67/173),其中外显子19和21突变分别占突变总数的58.2％ (39/67)和25.4％ (17/67);腺癌和腺鳞癌基因突变率分别为44.1％ (64/145)和60％(3/5);无吸烟史EGFR突变率51.1％(48/94)显著高于有吸烟史患者24.1％(19/79),P＜0.05;女性EGFR突变率分别为49.4％ (44/89)显著高于男性27.4％ (23/84),P＜0.05. 结论 云南昆明地区NSCLCs患者EGFR基因突变主要以19号外显子缺失突变和21号外显子点突变为主,多见于女性、无吸烟史、腺癌和腺鳞癌患者.     

Super-ARMS PCR和ddPCR检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤DNA EGFR基因T790M突变的临床价值研究

目的 探讨超级扩增阻滞突变系统PCR(Super-ARMS PCR)和微滴式数字PCR(ddPCR)检测晚期肺腺癌患者经表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)治疗后血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变情况和应用价值.方法 经EGFR-TKI治疗后耐药的124例患者分别应用S...     

表皮生长因子受体基因突变与肺腺癌亚型关系的研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型与肺腺癌亚型的相关性。方法收集2011~2015年该院3 028例非小细胞肺腺癌(NSCLC)患者的肿瘤组织,提取DNA后采用突变阻滞扩增系统(ARMS)检测EGFR基因突变。结果 3 028例NSCLC患者标本中,EGFR基因突变率为39.7%,其中第19号外显子缺失突变543例,第21号外显子L858R点突变535例,共占89.8%;新分类中浸润前病变与微浸润性腺癌、浸润性腺癌的EGFR基因突变比较,差异有统计学意义(P0.05);中分化肺腺癌有较高的EGFR突变率,不同分化程度的EGFR突变率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论新分类表现出与分子诊断的相关性,不同亚型EGFR突变率有差异,EGFR基因突变与腺癌组织分化程度存在一定的相关性。     

PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变

目的分析PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变的敏感性。方法应用PCR-SSCP检测36例肺癌标本的突变情况并与其它文献进行比较。结果在36例肺癌标本中，有11例存在突变，突变率为30.6％（11／36），其中男性2例，女性9例。结论PCR-SSCP检测肺癌EGFR基因突变具有较高的敏感性，与其它文献报道一致。     

肺腺癌中表皮生长因子受体基因突变及表皮生长因子受体2、血管内皮生长因子的表达及与临床的关系

目的 探讨肺腺癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变及人表皮生长因子受体2(HER-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与临床病理因素间的关系。方法 采用ARMS-PCR法检测10例正常肺组织及49例肺腺癌组织的EGFR基因突变的情况,同时应用免疫组织化学方法检测HER-2和VEGF蛋白表达水平。结果 (1)肺腺癌组织标本EGFR基因突变率及HER-2、VEGF蛋白表达率均比正常肺组织高(χ2=10.875 6,P=0.001;χ2=12.456 0,P=0.000;χ2=6.775 2,P=0.009)。(2)EGFR突变的发生与患者性别、是否吸烟有关(P0.05),与年龄、肿块大小、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期、有无胸膜浸润无关(P0.05)。HER-2与VEGF蛋白表达均与肿瘤的分化程度、肿块大小、TNM分期、有无淋巴结转移、有无胸膜浸润相关(P0.05),与患者性别、年龄、有无吸烟史无关(P0.05)。(3)肺腺癌中HER-2与VEGF的表达呈正相关(r=0.376 4,P=0.007 7)。结论 EGFR突变与肺腺癌的发生密切相关,其在女性、非吸烟者的高表达有重要的临床意义。HER-2和VEGF在肺癌的发生、发展、转移中起协同作用,有助于临床评估预后,并为肺腺癌的新分子靶向治疗提供理论依据。     

两种方法治疗EGFR19del阳性肺腺癌患者的疗效和生存期比较

目的探讨对表皮生长因子受体基因19外显子突变(EGFR 19del阳性)肺腺癌患者采用化疗与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)靶向治疗的临床效果及患者生存期的差异。方法回顾性分析安康市中医医院2016年1月至2017年1月收治的EGFR19del阳性肺腺癌患者86例,将这些患者按照治疗方法分为靶向组42例与化疗组44例。化疗组患者采用铂类联合第三代细胞毒性药物的双药联合化疗方案进行治疗,靶向组患者采用EGFR-TKIs进行靶向治疗,比较两组患者的临床疗效、生存率以及不良反应发生情况。结果化疗组患者部分缓解12例、稳定18例、进展14例,靶向组患者部分缓解25例、稳定15例、进展2例,化疗组与靶向组均无患者完全缓解,两组患者的客观缓解率分别为27.27%、59.52%(P<0.05),两组患者的疾病控制率分别为68.18%、95.24%(P<0.05)。靶向组患者1、2年生存率分别为76.19%、42.86%,明显优于化疗组患者的50.0%和25.0%(P<0.05)。在治疗期间,化疗组共有8例患者发生不良反应,而靶向组共有6例患者发生不良反应,不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于EGFR19del阳性肺腺癌患者,采用EGFR-TKIs靶向治疗对控制患者的癌症进展具有良好的效果,同时有助于延长患者的生存期,且不增加治疗过程中的不良反应。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系

目的 比较分析非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增的关系,并探讨其与血清癌胚抗原(CEA)水平有无相关性. 方法 对270例确诊非小细胞肺癌的肺组织标本(包括手术切除及经纤支镜活检取得)用实时荧光定量PCR法技术检测EGFR基因突变状态,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因的扩增情况.治疗前抽取患者静脉血,用化学发光法检测血清CEA水平. 结果 270例NSCLC中EGFR基因突变率为31.11％,EGFR基因扩增率为20％,基因突变并扩增的占10.74％.基因突变组、基因扩增组、基因突变并扩增组和基因无突变无扩增组血清CEA平均水平分别为[3.03(1.68-6.22)] ng/mL、[3.19(1.8-17.17)]ng/mL、[3.39(1.85-20.87)] ng/mL和[2.54(1.5-4.62)] ng/mL.基因突变组与基因扩增组、基因突变组与基因无突变无扩增组血清CEA比较无显著性差异(P＞0.05).基因扩增组与基因无突变无扩增组、基因突变并扩增组与基因无突变无扩增组血清CEA比较有显著性差异(P＜0.05).EGFR基因突变、基因扩增及基因突变并扩增与血清CEA水平有明显相关性. 结论 在NSCLC中EGFR基因突变率大于扩增率,其机制有待进一步阐明.EGFR基因与血清CEA水平有明显相关性.血清CEA水平有可能成为指导非小细胞肺癌EGFR靶向治疗的指标.     

实时荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的总结分析

目的:采用实时荧光定量PCR法检测临床送检的非小细胞肺癌(NSCLC)标本中表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变情况,分析其突变率、突变特征及其与临床病理间的相关性。方法:将101例石蜡包埋NSCLC标本行显微切割后抽提DNA,采用实时荧光定量PCR法检测EGFR基因酪氨酸激酶编码区第19和21号外显子的突变。结果:101例NSCLC标本中共检出EGFR基因第19号、第21号外显子突变21例(20.8%),突变率分别为61.9%(13/21)和38.1%(8/21),其又以19 del-E746-A750和21 L858R为主要突变类型,发生率分别为42.9%(9/21)和38.1%(8/21)。EGFR基因总突变率与年龄无关(P>0.05);但女性患者中EGFR基因突变率(27.3%,12/44)高于男性患者(15.8%,9/57;P     

表皮生长因子受体基因突变状态对晚期肺腺癌一线化疗效果的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态对晚期肺腺癌一线化疗疗效的影响。方法收集晚期肺腺癌且一线接受了以铂类为基础双药化疗患者的临床资料,分析EGFR基因状态与化疗疗效、无进展生存时间之间的关系。结果一线接受含铂双药化疗的患者271例,EGFR基因野生型患者192例(70.8%),EGFR基因敏感突变79例(29.2%)。EGFR野生型和突变型一线化疗的客观有效率(RR)分别为30.2%和35.4%(P=0.524)。疾病控制率(DCR)分别为71.9%和81.0%(P=0.292)。EGFR突变型和野生型肺腺癌患者一线化疗的RR、DCR相比,差异无统计学意义。EGFR野生型中位无疾病进展生存时间(PFS)为4.6个月,EGFR突变型为5.3个月,两组数据差异无统计学意义(P=0.299)。结论晚期肺腺癌EGFR基因突变状态对一线化疗的近期疗效及无进展生存期无明显影响。     

恶性血液病FLT3基因突变的检测及临床意义

为了探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复（ITD）突变与恶性血液病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病（AML）、18例急性淋巴细胞白血病（ALL）、2例急性杂合性白血病（AHL）、12例骨髓增生异常综合征（MDS）、10例慢性粒细胞白血病（CML）、3例非何杰金淋巴瘤（NHL）及9例多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效。结果表明：在32例AML患者中5例FLT3/ITD（15.6%）阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例;而在18例ALL、2例AHL、12例MDS和10例CML患者中未检测到FLT3/ITD突变;在3例非何杰金淋巴瘤（NHL）、9例多发性骨髓瘤（MM）患者中亦未检测到FLT3基因。对2例特征性突变进行了测序,其结果显示,ITD位于外显子14,长度为27-63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括有2个SH2-结合结构域（YEYV与YEYDLK）,其中1例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明,FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高（p〈0.01）,骨髓原始细胞比例高（p〈0.01）,化疗后有低缓解率趋势。结论：FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变。FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞比例高,伴低缓解率趋势。FLT3/ITD基因突变可作为预测AML预后的一个指标。     

205例急性髓系白血病患者IDH1基因突变的检测及其临床意义分析

本研究检测205例急性髓系白血病(AML)患者IDH1基因R132突变并探讨其临床特征。提取205例成人AML患者初发时外周血或骨髓单个核细胞基因组DNA,通过PCR的方法分别扩增IDH1基因的第4号外显子后进行测序比对。结果发现,205例AML患者中9例有IDH1基因R132突变,突变率4.39%,R132H型突变6例,R132L,R132G,R132S突变各1例,其中5例为AML-M2型白血病,与其他类型比较有统计学意义(P=0.002);9例患者血小板中位数45.5×109/L,低于IDH1为野生型患者(P=0.003);IDH1突变患者在性别、年龄、初发白细胞计数、血红蛋白水平及骨髓幼稚细胞比例上与IDH1为野生型的患者相比无明显差异(P>0.05)。9例患者中4例为正常核型,在71例CN-AML中的突变率为5.63%;合并FLT3/ITD突变5例,与IDH1为野生型患者比较有明显差异(P=0.017);合并c-kit突变的1例;合并NPM1突变2例;无合并CEBPA突变者,与野生型比较有明显差异(P=0.031);无合并WT1突变者。结论:IDH1基因R132突变在中国人AML中发生率为4.39%,以R132H突变为主,易在AML-M2型中发生,具有低血小板计数,易合并FLT3/ITD突变,不易合并CEBPA突变等特征。     

急性白血病FLT3基因突变的检测及临床意义

为探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复(internal tandemduplication ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病(AML),18例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效。结果表明:32例AML患者中5例FLT3/ITD(15.6%)阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例。而18例ALL患者中未检测到FLT3/ITD突变。对其中2例特征性突变测序结果显示,ITD位于外显子14,长度为27~63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括2个SH2-结合结构域(YEYV与YEY-DLK),其中一例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高(P<0.01),骨髓原始细胞比例高(P<0.01),化疗后有低缓解率趋势。结论:FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变。FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞...     

Assessment of EGFR Mutation Status in Lung Adenocarcinoma by Immunohistochemistry Using Antibodies Specific to the Two Major Forms of Mutant EGFR

EGFR mutations are the best predictors of response to EGFR kinase inhibitors in lung adenocarcinoma. We evaluated two mutation-specific monoclonal antibodies for the detection of EGFR mutations by immunohistochemistry (IHC), generated respectively against the L858R mutant and the exon 19 mutant with the common 15bp/5AA deletion. These two mutations account for approximately 90% of all EGFR mutations. IHC staining performed on 218 paraffin-embedded lung adenocarcinomas was assessed on a 0 to 3+ scale, and positivity cutoffs of 1+ and 2+ were compared. All cases were studied by standard molecular methods for these two mutations, and selected cases were also studied using higher sensitivity molecular assays. The EGFR L858R mutant antibody showed a sensitivity of 95% and a positive predictive value (PPV) of 99% with a positivity cutoff of 1+ and a sensitivity of 76% and a PPV of 100% with a positivity cutoff of 2+. The EGFR exon 19 mutant–specific antibody showed reduced sensitivity for exon 19 deletions other than 15bp. A positivity cutoff of 1+ resulted in a sensitivity of 85% and a PPV of 99%, whereas a 2+ cutoff gave a sensitivity of 67% and a PPV of 100%. IHC with EGFR mutant–specific antibodies could be used as a screen to identify most candidates for EGFR inhibitors.Somatic mutations within the tyrosine kinase domain of EGFR are found in approximately 20% of lung adenocarcinomas and are the most reliable predictors of response to EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKIs) such as erlotinib and gefitinib (Sharma et al, 2007).¹ Multiple studies support that, in addition to their predictive value in treatment selection, EGFR mutations are also prognostic for survival benefit.^2,3 Specifically, patients with these tumors survive significantly longer on EGFR TKIs than with conventional cytotoxic chemotherapy.⁴ EGFR-mutant lung adenocarcinomas also form a distinct clinically favorable biological subset, regardless of EGFR TKI therapy.² Mutated EGFR is more often found in better differentiated adenocarcinomas with or without a bronchioloalveolar component.^5,6 It is virtually absent in other lung cancer subtypes except for adenosquamous carcinoma.^7,8In-frame deletions in exon 19 and the exon 21 L858R substitution are the most common EGFR mutations and, combined, represent approximately 90% of all mutants.⁹ Analysis for common EGFR mutations is now performed in many institutions to help direct treatment decisions. Direct DNA sequencing is a common detection method but has well-known sensitivity limitations depending on the proportion of tumor cells present in the material available for DNA extraction. Other DNA-based methods have been developed to address issues of sensitivity and turnaround time associated with direct sequencing.¹⁰ However, the cost and complexity of molecular methods has slowed their widespread implementation outside of major academic centers and commercial laboratories and drives the continued interest in less robust predictors of response such EGFR copy number and conventional immunohistochemistry (IHC) for total EGFR. IHC for total EGFR is an especially poor substitute as it correlates poorly or not at all with the presence of mutations.^11,12Another more challenging IHC strategy is to develop antibodies that react only with the mutant form of a given oncoprotein. Interest in this approach is driven by the fact that IHC is a technology available to essentially all pathology departments, can be automated, and can be performed on samples where the number or proportion of tumor cells poses challenges for molecular tests based on bulk DNA extraction from tissue. Cell Signaling Technology has recently developed two mutant-specific antibodies for IHC directed against the most common mutant forms of EGFR: the 15-bp/5-aa deletion (E746_A750del) in exon 19 and the L858R point mutation in exon 21.¹³ In the present study, we performed an independent evaluation of these two antibodies on a large series of lung adenocarcinomas with molecular data available for EGFR mutation status. We provide a careful assessment of putative false-positive and false-negative results, including a detailed analysis of how they relate to the molecular heterogeneity in EGFR exon 19 deletions and we propose an algorithm for their possible clinical implementation.     

突变型p53在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究突变型ｐ５３基因在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法 分别应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及原位分子杂交技术,检测４１例胃癌组织和２６例癌旁非病变粘膜ｐ５３基因点突变及ｍＲＮＡ过表达情况。结果 人胃癌组织存在ｐ５３基因突变和ｍＲＮＡ过表达率明显高于癌旁非病变粘膜（Ｐ〈０．０５）。肿瘤组织分化越差,ｐ５３突变率越高,ｍＲＮＡ过表达的分布越广泛（Ｐ〈０．０５）。发生ｐ５３基因突变的胃癌病人较未发生者更易发生淋巴结转移（Ｐ〈０．０５）。结论 胃癌的发生、发展与ｐ５３基因突变有关,检测胃癌组织中ｐ５３突变情况可为胃癌的诊断、分期及预后评估提供可靠依据。     

基因突变的检测技术及进展

基因突变检测技术在临床诊断治疗领域和遗传学领域均有着很大的价值。现今常用的检测基因突变的方式是通过简便操作初步确定突变基因位置再结合准确测序最终找出突变点。本文对直接测序法、错配的化学切割分析、单链构象多态分析、核糖核酸酶切法、变性梯度凝胶电泳等检测技术的发展作出简单评价。     

应用FISH技术检测原发性肺癌P^53抑癌基因异常及其临床意义

目的　探讨原发性肺癌 P53缺失 /异常表达及临床意义。方法　应用 FISH和免疫组化技术检测 6 5例肺癌间期核中 P53基因异常。结果　 P53缺失率为 18.4 % (12 / 6 5 ) ,分化好比分化差者缺失率增高 (P=0 .0 0 7)。 P53蛋白阳性率随着肺癌临床分期增高呈上升趋势 (P=0 .0 4 6 ) ,与年龄、性别、肿瘤大小及分化程度等无相关性 (P>0 .0 5 )。结论　 P53基因缺失和蛋白表达与肺癌分化程度、临床分期密切相关 ,检测 P53基因缺失和蛋白表达可作为肺癌病理分级和判断预后的重要指标     

TARDBP在胃腺癌组织中的表达及其临床意义

目的　检测 TAR DNA结合蛋白（transactive response DNA-binding protein,TARDBP）在胃腺癌组织中的表达 ,分析其表达与胃腺癌患者临床病理特征之间的关系。方法　选取 2017年 1月～ 2018年 1月陕西省人民医院确诊的 49例胃腺癌、 19例癌旁组织及 19例正常胃组织作为研究对象,采用免疫组织化学（ SP）法检测 TARDBP的表达,并探讨 TARDBP表达与胃腺癌患者临床病理特征之间的关系。结果　TARDBP的着色部位在细胞核,其在胃腺癌组织中的表达率为 89.80%（44/49）,在胃腺癌癌旁组织中的表达率为 68.42%（13/19）,在胃正常黏膜组织中的表达率为 26.32%（5/19）。TARDBP蛋白在胃腺癌及癌旁组织中的表达均显著高于胃正常黏膜组织,其差异均具有统计学意义 (χ2=6.756～ 27.400,均 P＜ 0.05);TARDBP在胃腺癌中的表达高于癌旁组织,但其差异无统计学意义 (χ2=3.171,P＞ 0.05);TARDBP在胃腺癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤的分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期均无相关性 (χ2=0.000～ 0.762,均 P＞ 0.05)。结论　TARDBP在胃腺癌组织和癌旁组织中可高表达, TARDBP表达失调可能与胃腺癌的发生、进展存在一定的相关性。     

PCR-SSCP检测肺癌PTEN基因的点突变

与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶(phos鄄phataseandtensinhomologydeletedonchromosometen,PTEN)是继p53、pRb后的又一重要抑癌基因,由3个实验室同时发现,又称MMAC1及TEP1[1～3]。PTEN是一呈双专一性磷酸酶活性的抑癌基因,现已发现多种肿瘤如胶质母细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、内膜样癌、甲状腺癌、肺癌和消化道肿瘤等中,均存在PTEN基因突变。PTEN基因突变导致其磷酸酶活性下降,从而使细胞恶性增殖能力增强使细胞游走性增加并抑制细胞凋亡[3,4]。为探讨PTEN基因突变在肺癌发病机制中的作用,本研究应用聚合酶链反应鄄单链…