苦豆碱对肾癌A498细胞的体外杀伤作用研究

目的 体外实验研究苦豆碱对肾癌A498细胞的杀伤作用。方法 将不同浓度的苦豆碱(0mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)作用于肾癌A498细胞48h,通过CCK8检测各组细胞存活率,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,通过流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量的变化。结果 CCK8检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L对肾癌A498细胞增殖表现出抑制作用,苦豆碱0.4mmol/L对A498细胞增殖抑制作用更加明显。倒置显微镜观察结果显示,苦豆碱0.2mmol/L可诱导肾癌A498细胞凋亡,漂浮细胞数量增加;苦豆碱0.4mmol/L组细胞凋亡更加显著,漂浮细胞数量大大增加。流式细胞术检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L和0.4mmol/L使肾癌A498细胞凋亡率明显增加,且呈剂量效应。Western blot法检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L和0.4mmol/L可使肾癌A498细胞Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量明显增加,呈剂量效应。结论 苦豆碱可有效抑A498细胞增殖并促进其凋亡,将来有望成为新的抗肾癌药物。     

血根碱与顺铂联用对膀胱癌EJ细胞凋亡的影响

探讨血根碱与顺铂联用对膀胱癌EJ细胞凋亡的影响。应用CCK-8法检测不同浓度血根碱处理膀胱癌EJ细胞并计算IC₅₀;应用Annexin V FITC/PI法检测空白对照组、血根碱组、顺铂组及联合用药组对细胞凋亡的影响应用;流式仪检测细胞周期阻滞情况;Western blot检测联合用药组对Bcl-2表达的影响;构建裸鼠皮下成瘤模型,进一步验证联合用药组对膀胱癌EJ细胞凋亡以及对荷瘤小鼠减毒作用的影响;同时,通过对小鼠重要脏器的HE染色评估血根碱的安全性。结果表明,血根碱能明显抑制EJ细胞增殖,与空白对照组相比,联合用药组EJ细胞凋亡显著（P < 0.05）,且更多的EJ细胞被阻滞在G₂/M期,联合用药组显著下调Bcl-2的表达（P < 0.001）。裸鼠皮下成瘤模型中,同空白对照组相比,联合用药组中小鼠肿瘤生长明显变缓,细胞凋亡明显增加（P < 0.05）。联合用药对荷瘤小鼠有减轻顺铂副作用的效果,血根碱的生物安全性高,副作用小。实验结果表明,血根碱与顺铂联合用药可通过引起细胞G₂/M阻滞,下调Bcl-2的表达,促进细胞凋亡,进而抑制肿瘤生长。     

苦豆碱对小鼠免疫细胞功能的影响

苦豆碱（ａｌｏｐｅｒｉｎｅ）为苦豆子中的生物碱。对多种致炎剂引起的急性炎症和Ⅲ，Ⅳ型变态反应有显著的抑制作用。为了探讨其作用机理，应用淋巴细胞增殖反应及细胞因子测定法，从免疫学角度对其进行了研究。苦豆碱有抑制巨噬细胞产生白细胞介素１（ＩＬ－１）的作用（Ｐ＜０．０１）。并能直接抑制小鼠脾细胞增殖反应，同时也抑制脾细胞对刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的Ｔ细胞增殖反应（Ｐ＜０．０１），也明显降低脾细胞产生白细胞介素２（ＩＬ－２）的能力（Ｐ＜０．０１）。对细菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导的Ｂ淋巴细胞增殖反应也同样有抑制作用（Ｐ＜０．００１）。初步实验结果证明苦豆碱是一种以抑制方式起主要作用的中草药。     

茶多酚诱导体外培养膀胱癌EJ细胞的凋亡

目的：研究茶多酚对体外培养的膀胱癌EJ细胞的抑制和诱导凋亡的作用。方法：用琼脂糖凝胶电泳,光学显微镜的方法,观察EJ细胞经过不同剂量茶多酚处理后在生理,生化和细胞 态学等指标的改变来检测细胞凋亡,结果：琼脂糖终胶电泳呈典型的“梯状电泳带”,光学显微镜镜观察见EJ细胞在形态学上凋亡细胞的形态学改变。结论：茶多酚对EJ细胞有明显的诱导细胞凋亡作用。     

蝙蝠葛碱对人膀胱癌T-24细胞株生长增殖的抑制作用

目的 探讨中药北豆根提取物蝙蝠葛碱(dauricine,Dau)对人膀胱癌T-24细胞株的增殖抑制作用及其作用机制.方法 应用MTT法测定了蝙蝠葛碱对泌尿系肿瘤细胞增殖反应的影响;采用流式细胞技术、荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳等技术测定和观察了蝙蝠葛碱对诱导肿瘤细胞凋亡的影响.结果 蝙蝠葛碱对膀胱癌T-24细胞株的增殖有较强的抑制作用,具有浓度依赖性特点.T-24细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带.流式细胞分析,浓度为5～30μg/ml的蝙蝠葛碱具有诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用,且随着药物作用时间延长凋亡率逐渐增加,随药物浓度的增高细胞周期被阻滞在G0/G1期.T-24细胞的bcl-2基因表达受抑,而bax基因的表达上调.结论 蝙蝠葛碱可有效抑制人膀胱癌T-24细胞株的生长增殖,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起重要作用.     

粉防己碱对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察粉防己碱对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响,探讨粉防己碱对宫颈癌的体外抗肿瘤效应.方法 采用MTT比色法观察粉防己碱对Hela细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax表达水平的影响.结果 粉防己碱对Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点.粉防己碱可诱导Hela细胞凋亡,可上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达.结论 粉防己碱对Hela细胞增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关.     

苦豆碱对小鼠免疫细胞功能的影响

苦豆碱（ａｌｏｐｅｒｉｎｅ）为苦豆子中的生物碱。对多种致炎剂引起的急性性炎症和Ⅲ，Ⅳ型变态反应有显著的抑制作用。为了探讨其作用机理，应用淋巴细胞增殖反应及细胞因子测定法，从免疫学角度对其进行了研究。苦束碱有抑制巨噬细胞产生白细胞介素１（ＩＬ－１）的作用（Ｐ〈０．０１）。并痛直接抑制小鼠脾细胞增殖反应，同时也抑制脾细胞对刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的Ｔ细胞增殖反应（Ｐ〈０．０１），也明显降低脾细胞产生     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

青藤碱调节EC109细胞增殖与凋亡的COX-2信号通路研究

目的研究青藤碱对食管癌EC109细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制。方法以不同浓度青藤碱分别处理体外培养的食管癌EC109细胞,72h后用CCK8法检测细胞增殖,用AnnexinV/PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡,用Westernblot检测COX-2和Survivin蛋白的表达。结果采用0.2、0.4mmol/L青藤碱处理EC109细胞72h后,细胞增殖显著被抑制;细胞凋亡检测结果显示,与对照组相比,中、高剂量组细胞凋亡率显著升高;Westernblot检测结果显示COX-2和Survivin蛋白在中、高剂量组中表达水平显著下降。结论青藤碱在体外能抑制EC109细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与抑制COX-2和Survivin蛋白表达相关。     

盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的观察盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞增殖与凋亡的作用,以探讨盐酸小檗碱促进内皮细胞凋亡的机制。方法 25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L浓度小檗碱分别干预大鼠主动脉内皮细胞1 h、2 h、4h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h。MTT法检测细胞增殖活性,Western Blot方法检测促凋亡蛋白BAX的表达。结果不同浓度盐酸小檗碱作用于大鼠主动脉内皮细胞可显著抑制其增殖(P<0.001);盐酸小檗碱与大鼠主动脉内皮细胞作用24 h,促凋亡蛋白BAX随浓度增加而上调(P<0.001)。结论盐酸小檗碱可抑制大鼠主动脉内皮细胞增殖,并上调促凋亡蛋白BAX水平。     

miR-216a-5p靶向作用于PAK2对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 探讨miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中表达及调控p21活化蛋白激酶2（PAK2）基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-216a-5p在正常膀胱细胞系SV-HUC-1及膀胱癌细胞系5637、J82、T24和EJ中的表达,选取其中两种表达miR-216a-5p最少的5637和J82为对象,实验分两组：对照组（转染miR-NC）、实验组（转染miR-216a-5p）。利用qRT-PCR法检测PAK2 mRNA的表达。Western blot法检测PAK2、p-Akt和p-ERK蛋白的表达。Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验和克隆形成实验检测膀胱癌细胞活力和增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-216a-5p在膀胱癌细胞系中的表达量均低。实验组PAK2基因mRNA及其蛋自的表达明显降低,PAK2 mRNA在5637细胞中对照组和实验组表达量分别为1.01±0.15和0.40±0.11（P<0.01）,在J82细胞中对照组和实验组表达量分别为1.00±0.09和0.56±0.14（P<0.01）。p-Akt和p-ERK蛋白表达显著降低。实验组细胞活力明显被抑制,增殖能力明显降低。实验组细胞凋亡显著增加（P<0.01）。结论 miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中呈低表达,可在体外靶向抑制PAK2基因,抑制膀胱癌细胞系5637和J82的增殖能力,促进细胞凋亡,可能成为具有膀胱癌生物治疗意义的靶标分子。     

唾液酸酶对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨唾液酸酶与子宫内膜癌细胞Ishikawa浸润、增殖和凋亡的关系。 方法 培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,并分成对照组和处理组,处理组给予唾液酸酶活性抑制剂(DANA)处理,比对两组细胞上清液的唾液酸酶活性后通过免疫荧光检测、流式细胞学或MTT实验检测对照组和处理组细胞基质金属蛋白酶（MMPs）表达水平、细胞增殖核抗原（PCNA）水平、凋亡和增殖情况。 结果 处理组上清液唾液酸酶活性减弱且细胞MMPs的表达降低,处理组的细胞凋亡率明显降低,各组细胞的增殖能力无差异。 结论 唾液酸酶可影响Ishikawa细胞的侵袭性和凋亡率,但对细胞的增殖能力无明显影响。     

膀胱癌细胞凋亡与多药耐药的实验研究

目的 研究膀胱癌细胞凋亡与膀胱癌多药耐药的关系。方法 用电镜观察几种临床常用的化疗药物阿霉素、顺铂和丝裂霉素在体外诱导膀胱癌细胞的凋亡的形态学特征，免疫组化测定pgp糖蛋白的表达，应用MTT法检测阿霉素、顺铂和丝裂霉素的杀伤率。结果 16例患者中9例有效地诱导出细胞凋亡，7例未诱导出凋亡。电镜观察显示，患者的膀胱癌细胞对化疗药物阿霉素、顺铂和丝裂霉素敏感时，其细胞呈特异性的凋亡形态学特征改变：染色质聚集于核膜呈块状，扩张的线粒体，嵴移位膨胀，凋亡细胞被周围细胞吸收。体外检测显示耐药患者肿瘤细胞抑制率低于30％。结论 研究结果提示多药耐药的产生与膀胱癌细胞凋亡受到抑制有关。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

不同浓度雌激素对大鼠膀胱颈平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)对大鼠膀胱颈平滑肌细胞(BSMC)增殖与凋亡的影响。方法:无菌切取大鼠膀胱颈,应用酶消化法行原代细胞培养。取3-4代传代细胞,用α-平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学法鉴定细胞成分,选取平滑肌成分大于85%者,分别加入不同浓度E2(0.1-100 nmol/L)。于处理72 h后收获细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及其相关蛋白CyclinD1,应用Western blotting法检测Bcl-2和Bax表达。结果:E2(0.1-10 nmol/L)促进BSMC从G1期向S过渡(G0/G1期比率显著低于对照组细胞,而S期和G2/M期比率显著高于对照组细胞,P<0.05),并伴随Cyclin D1蛋白表达显著增高。而大剂量E2(100 nmol/L)则使细胞凋亡率显著升高,并伴随Bax表达显著增加。结论:小剂量E2能够促进合成型BSMC增殖,其机制是影响Cyclin D1表达,加速G1期向S过渡;大剂量E2则通过增加Bax促进细胞凋亡。     

黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:用浓度分别为0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L的黄连素与人胰腺癌Panc-1细胞共同培养,MTT法检测胰腺癌细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测细胞中的Caspase-3蛋白的表达。结果:黄连素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增强;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而升高;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞的Caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连素能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,而且可能通过增加Caspase-3蛋白的表达来增强胰腺癌细胞的凋亡。     

番茄红素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素（lycopene,LP）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞随机分为5组：正常对照组、LP（20、10、5μg/ml）组和顺铂（40μg/ml）组（阳性对照组）,每组10个复孔。给药干预48h后,观察比较各组细胞生长状况并采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率;通过流式细胞术（flow cytometry）分析细胞周期的改变、检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,反转录PCR（RT-PCR）技术检测Bax mRNA和bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果 与正常对照组比较,LP各组SKOV3细胞呈现不同程度的细胞脱壁、细胞间松散等病理性状态,以LP 20μg/ml组最为显著;LP（20、10μg/ml）组细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率显著升高,caspase-3蛋白表达量显著增高,bcl-2 mRNA表达显著下调、Bax mRNA表达显著上调,Bax/bcl-2表达比值显著升高,上述差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 LP具有抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并促进其凋亡的作用,作用机制可能与LP能够有效提高caspase-3蛋白表达并下调bcl-2 mRNA表达、上调Bax mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值有关。     

华蟾素抑制人结肠癌SW-480细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的：观察华蟾素（Cinobufacini）抑制人结肠癌（SW-480）细胞系增殖及诱导凋亡的生物学效应。方法：以人结肠癌SW-480细胞为研究对象,采用MTT法观察细胞增殖抑制的影响;采用吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）荧光染色法观察细胞凋亡形态,并计算凋亡率。结果：在20~120μg/mL,华蟾素能明显的抑制SW-480细胞的增殖;AO/EB荧光染色法显示：随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加。结论：华蟾素具有抑制人结肠癌（SW-480）细胞生长增殖,促进凋亡的作用。     

RNA沉默Pin1表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的应用RNA干扰技术沉默Pinl表达后,观察其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法采用脂质体介导法将Pinl干扰片段PinlsiRNA和对照片段controlsiRNA转染入乳腺癌细胞系MDA—MB一23l后,利用RT—PCR和Westernblot法检测Pinl基因在mRNA和蛋白水平的表达情况,并应用MTT法、Transwell法和AnnexinV—FITC／PI试剂盒及流式细胞仪技术分析检测Pinl对MDA—MB一23l细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果Pinl在乳腺癌细胞系中高表达。与未处理组及转染对照片段controlsiRNA组相比,沉默Pinl表达后,PinlmRNA（P〈0．05）和蛋白（P〈0．05）表达均明显下降,细胞生长增殖能力[P〉0．05（第1天）,P〈0．01（第2—4天）]减弱,细胞侵袭数目（6．61±0．53,P〈0．05）减少,细胞凋亡率（31．5％±3．06％,P〈0．05）显著增加。结论沉默Pinl表达后可抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,促进乳腺癌细胞凋亡。     

CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨化学趋化因子受体1（CXCR1）对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平。以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CXCR1小干扰RNA（CXCR1 siRNA组）,同时转染siRNA对照组。设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48h后,Western blot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况。结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致。结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调。抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关。