联合检测FHIT、Ki-67及PCNA在皮质醇增多症肾上腺皮质不同病变中的意义

目的 探讨皮质醇增多症肾上腺皮质不同病变中脆性组氨酸三联体(FHIT)、Ki-67及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平及其在鉴别诊断中的作用.方法 应用免疫组织化学方法检测49例皮质醇增多症肾上腺皮质病变(腺癌14例、腺瘤26例、皮质增生9例)患者FHIT、Ki-67及PCNA的表达.结果 FHIT在肾上腺皮质增生表达最高,腺瘤次之,腺癌最低(分别为100.00％、96.15％、42.86％);Ki-67与PCNA在肾上腺皮质腺癌的表达最高,腺瘤次之,皮质增生最低(分别为85.71％、7.69％、0和100.00％、96.15％、77.78％).FHIT、Ki-67及PCNA在皮质醇增多症肾上腺皮质病变中的表达两两相关,其中FHIT与Ki-67表达呈负相关(r=-0.718,P=0.00),FHIT与PCNA表达呈负相关(r=-0.449,P=0.001),Ki-67与PCNA表达呈正相关(r=0.387,P=0.006).联合检测FHIT、Ki67及PCNA结果显示,腺癌表现为FHIT阴性或弱阳性、Ki-67强阳性、PCNA强阳性;腺瘤表现为FHIT阳性、Ki-67阳性、PCNA阳性;皮质增生表现为FHIT强阳性、Ki-67阴性、PCNA阴性.结论 联合检测FHIT、Ki-67及PCNA对肾上腺皮质腺癌、腺瘤及增生的鉴别诊断具有重要的价值.     

库欣综合征中FHIT、Ki-67、PCNA的表达及相关因素的研究

目的  探讨库欣综合征肾上腺皮质病变中肿瘤抑制基因脆性组氨酸三联体（FHIT）、肿瘤增殖抗原Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,探索鉴别库欣综合征肾上腺皮质病变的相关因素。方法  应用免疫组织化学方法检测49例库欣综合征肾上腺皮质病变（腺癌14例、腺瘤26例、增生9例）中FHIT、Ki-67、PCNA的表达,对临床病理及生化指标采用有序结果的累积比数Logistic回归分析探索鉴别库欣综合征皮质病变的相关因素。结果  FHIT在肾上腺皮质增生中表达最高,腺瘤次之,腺癌最低（分别为100%、96.15%和42.96%）,Ki-67与PCNA在肾上腺皮质腺癌的表达最高,腺瘤次之,增生最低（分别为85.71%、7.69%、0.00%和100%、96.15%、77.78%）。应用Logistic回归分析发现FHIT、PCNA两个因素与鉴别腺癌、腺瘤、增生的关系更为密切。结论  FHIT、Ki-67和PCNA的表达与库欣综合征肾上腺皮质病变密切相关。Logistic回归分析提示FHIT、PCNA与鉴别诊断的关系更为密切。

     

肾上腺皮质肿瘤Ki67表达和P16蛋白表达的相关性及意义

目的研究肿瘤增殖抗原Ki67和抑癌基因P16与肾上腺皮质肿瘤的关系。方法应用免疫组化方法检测68例肾上腺皮质肿瘤（腺瘤60例、腺癌8例）及9例瘤旁正常组织标本中Ki67及P16的标记指数（La—beling Index，LI）。结果Ki67在正常肾上腺组织不表达，在腺癌表达最高，腺瘤次之；P16在正常肾上腺组织表达最高，腺瘤次之，腺癌最低，Ki67和P16在肾上腺皮质肿瘤表达的结果相比较差异有显著性（P〈0．001），且存在负相关关系（r=-0．7136，P〈0．05）。Ki67的LI在肾上腺皮质腺瘤、腺癌的界定值（cut point）为4％；P16的LI在肾上腺皮质腺瘤、腺癌的界定值为12％。结论Ki67及P16的表达与肾上腺皮质肿瘤显著相关，肾上腺皮质肿瘤组织Ki67的LI〉4％和P16的LI〈12％时，提示为腺癌。联合检测Ki67和P16在肾上腺皮质肿瘤的表达对区别良、恶性肾上腺皮质肿瘤具有重要意义，可以作为早期诊断肾上腺皮质腺癌的生物学指标之一。     

Survivin及Ki-67在大鼠肾上腺增生髓质中的表达及其相关性研究

目的：研究Survivin及Ki-67在大鼠肾上腺增生髓质中的表达,以探讨Survivin及Ki-67在肾上腺髓质增生发生发展中的作用及二者相关性。方法：健康雄性Wistar大鼠40只随机分为2组：A组(肾上腺髓质增生组),B组(正常对照组),每组20只。A组用利血平0．4 mg／(kg·d)诱导建立肾上腺髓质增生的大鼠模型,B组用生理盐水0．4 mg／(kg·d),于第6周末用免疫组织化学SP技术检测两组大鼠肾上腺髓质组织中Survivin及Ki-67的表达。结果：在增生组和正常对照组中,Survivin的阳性表达率分别为15／18(83．33％),5／20(25．00％);Ki-67的阳性表达率分别为13／18(72．22％),4／20(20．00％)。肾上腺髓质增生组的阳性表达率明显高于正常对照组(F<0．01),并且Survivin和Ki-67之间有一定相关性(r=0．388)。结论：Survivin及Ki-67基因的过度表达与大鼠肾上腺髓质增生发生发展存在一定的关系,并且二者之间存在一定协同性,共同促进肾上腺髓质增生的发生。     

肾上腺皮质不同性质及功能病变组织端粒酶表达测定及意义

目的研究肾上腺皮质不同性质及功能病变组织的端粒酶表达。方法利用放射自显影为基础的端粒重复序列扩增方法,对29例肾上腺皮质腺瘤(8例皮质醇增多症,17例醛固酮增多症,4例无功能腺瘤)、5例肾上腺皮质增生(临床表现为皮质醇增多症)、2例肾上腺皮质癌、4例正常肾上腺皮质组织的端粒酶表达进行检测。结果29例肾上腺皮质腺瘤、5例肾上腺皮质增生组织和4例正常肾上腺皮质标本未见端粒酶表达,2例肾上腺皮质癌组织呈现明显端粒酶表达。结论肾上腺皮质腺瘤及增生组织端粒酶表达呈阴性;端粒酶可作为对肾上腺恶性病变有一定参考价值的肿瘤标志。     

良、恶性肾上腺肿瘤组织中端粒酶活性的鉴别意义

目的: 检测肾上腺肿瘤中的端粒酶活性,探讨其在鉴别良恶性肾上腺肿瘤中的价值. 方法: 留取西安交通大学第一医院泌尿外科共手术治疗的肾上腺肿瘤组织标本31例,立即液氮中速冻保存.应用TRAP-ELISA法测定肾上腺肿瘤中的端粒酶活性. 结果: 在肾上腺肿瘤标本31例中,6例阳性,阳性率19.4%,其中恶性肿瘤(肾上腺皮质癌2例,恶性嗜铬细胞瘤1例,肾上腺转移癌2例) 5例端粒酶均为阳性,无功能肾上腺皮质腺瘤1例端粒酶亦阳性. 结论: 良性肾上腺肿瘤一般无端粒酶活性,恶性肾上腺肿瘤具有较强的端粒酶活性,检测肾上腺肿瘤的端粒酶活性有助于鉴别良恶性肾上腺肿瘤.     

Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在乳腺导管内增生性病变的表达及其意义

目的 探讨B细胞淋巴瘤因子3(Bcl-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P53基因编码蛋白和增殖细胞核蛋白（Ki-67）在乳腺导管内增生性病变中的表达及应用价值。方法 采用免疫组化检测乳腺普通型导管增生（UDH）、柱状上皮病变（CCL）、非典型导管增生（ADH）和导管原位癌（DCIS）组织中Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达。结果 Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在UDH中均少量表达;在CCL、ADH和DCIS中均明显表达,且随着病变的级别升高,阳性率逐渐增高（P<0.05）;Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白在CCL、ADH和DCIS中着色强阳性（++～+++）的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达在乳腺导管内增生性病变的病理诊断、鉴别诊断及指导临床治疗方面有较高应用价值,可显著提高乳腺导管内增生性病变的诊断准确率。     

卵巢上皮性肿瘤中cyclin D1和Ki-67蛋白检测及其临床意义

目的 探讨卵巢上皮性肿瘤中cyclin D1和Ki-67蛋白表达及其临床意义。方法 运用免疫组化方法,检测cyclin D1和Ki-67蛋白在30例卵巢腺癌、20例卵巢交界性肿瘤和80例卵巢癌中的表达情况,结合肿瘤的临床资料,分析其临床意义。结果 cyclin D1蛋白在卵巢良性腺瘤、交界性肿瘤和卵巢中的阳性表达率分别为3％、25％、26％。Ki-67蛋白在交界性卵巢肿瘤的过度表达率为15％,在卵巢癌中为39％,而且与肿瘤Silverberg氏分级有显著的相关性（P〈0.05）,其中47％的G2／G3级的卵巢癌出现Ki-67蛋白过度表达,其过表达率明高于G1级的肿瘤（17％）。结论 cyclin D1和Ki-67蛋白可以作为临床判断卵巢上皮性肿瘤良恶性有参考价值的分子标记;卵巢癌中Ki-67蛋白过度表达可成为评估肿瘤细胞恶性程度的指标之一。     

肾上腺及其病变组织中内皮素－1的免疫组织化学和超微结构观察

观察、研究内皮素－１（ＥＴ－１）在人肾上腺及其病变组织中的形态学定位。方法用免疫组织化学的方法研究了ＥＴ－１在肾上腺瘤性和非瘤性组织中的组织学情况和电镜定位。结果ＥＴ－１免疫阳性物质存在于肾上腺皮质腺瘤（１００％）、皮质腺癌（３／１０）和瘤旁组织（１００％）中，而不存在于髓质组织中。ＥＴ－１免疫阳性物质以环状和颗粒状存在于肾上腺皮质腺瘤、皮质增生组织和瘤旁组织细胞胞浆内和胞膜上，以粉尘状存在于肾上腺癌个别细胞胞浆内。免疫电镜下ＥＴ－１阳性物质存在于粗面内质网、线粒体、脂质体和细胞膜上。结论提示ＥＴ－１与肿瘤分化程度有关，ＥＴ－１免疫组织化学染色，可能具有鉴别肾上腺良恶性皮质腺瘤的意义；ＥＴ－１阳性物质存在于粗面内质网，说明ＥＴ－１是由皮质细胞合成的；存在于线粒体和脂质体，说明ＥＴ－１与皮质激素合成有关；存在于细胞膜上可能与ＥＴ－１受体有关。     

原发性醛固酮增多症(肾上腺皮质癌一例报告)

原发性醛固酮增多症是肾上腺皮质球状带病变所引起的具有电解质紊乱特征的病征。本病大多由肾上腺皮质腺瘤引起;少数来自双侧皮质增生;由皮质癌引起者极少见。1963年Gilbert对本病搜集文献160例,其中肾上腺皮质腺瘤127例,占79%;肾上腺皮质增生30例,占19%,肾上腺皮质癌仅3例,占2%。本病由肾上腺皮质癌引起者在国内已报道3例。现将我院收治的1例报告于下。     

肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及意义

目的　探讨肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 6 2例肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达。结果　肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达阳性率分别为 5 3.2 %和6 4 .5 % ,PCNA蛋白表达阳性肺癌Fhit蛋白阳性率明显低于PCNA蛋白表达阴性肺癌 (P <0 .0 1)。Fhit蛋白和PCNA蛋白在肺癌中表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移、3年生存期均密切相关 ,PCNA蛋白与肺癌病理类型亦有关。结论　Fhit蛋白和PC NA蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关 ,二者相互抑制 ,呈明显负相关     

子宫腺肌病中PTEN和Akt的表达及其相关性研究

目的探讨子宫腺肌病病灶中10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(PTEN)和蛋白激酶B（PKB/Akt）的蛋白表达情况,旨在为子宫腺肌病的发生发展以及治疗提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜（27例）、正常子宫内膜(20例)的腺上皮细胞和间质细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt （P Akt）蛋白的表达并进行比较。结果PTEN蛋白在腺上皮细胞中的表达,正常子宫内膜表达高于在位内膜和异位内膜（P＜0.05,P＜0.01）,子宫腺肌病在位内膜的表达高于子宫腺肌病异位内膜的表达（P＜0.01);Akt、P Akt蛋白在子宫腺肌病异位内膜的腺上皮细胞中的表达强度高于在位内膜（P＜0.05）和正常子宫内膜(P＜0.01),其在位内膜腺上皮细胞中的表达强度高于正常子宫内膜(P＜0.01)。PTEN蛋白在间质细胞中的表达,正常子宫内膜明显高于子宫腺肌病的在位内膜和异位内膜（P＜0.05）,但在位内膜与异位内膜之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Akt、P Akt蛋白在间质细胞中的表达,异位和在位内膜明显高于正常内膜,异位内膜和在位内膜两组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PTEN与Akt、PTEN与P Akt在子宫腺肌病异位内膜、在位子宫内膜和正常子弓内膜中的表达均呈负相关（r＝-0.444;r＝-0.546）。结论PTEN蛋白表达在子宫腺肌病的在位、异位内膜中减少;Akt、P Akt蛋白表达增加。PTEN蛋白低表达不能有效的抑制Akt的激活,从而对子宫腺肌病的发生与发展起重要的作用。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达及意义

目的研究人脑星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白的差异表达，探讨它们之间、它们与病理分级及复发之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测了50例星形细胞瘤中不同级别的FHIT、、PCNA蛋白的表达水平，以10例非肿瘤脑组织作对照。结果非肿瘤脑组织FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为100％、0，星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为40％、86％；尽管在星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达总体差异有显著性（P〈0．05），Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅳ级间比较差异有显著性（P〈0．05），但Ⅲ级与Ⅳ级比较差异无显著性（P〉0．05）；经统计学分析FHIT、PCNA蛋白呈皿著负相关（P〈0．01）；8例复发病例中复发前后FHIT、PCNA蛋白表达差异有显著性（P〈0．05）。结论星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达之间的显著负相关，提示FHIT、蛋白可能对细胞增殖具有负性调控作用。FHIT、PCNA蛋白的表达水平可能与星形细胞瘤的病理分级和复发有关，推测FHIT、PCNA蛋白的表达可能与星形细胞瘤的肿瘤侵袭性相关。     

P53、Caspase-3和凋亡调节蛋白FasL在乳腺癌的表达及其意义

目的:通过在人乳腺癌组织和癌旁(相对正常)乳腺组织中观察p53、Caspase-3和FasL凋亡调节蛋白的表达,探讨p53、Caspase-3及FasL在乳腺癌疾病发生、发展过程中的作用及关系,为提高生物治疗乳腺癌疾病提供一定的实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检测21例收集于手术切除患者的乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织中的p53、Caspase-3及FasL。结果:P53蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为61.9%明显高于癌旁组织(相对正常)乳腺组织的0%;而Caspase-3蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.0%明显低于癌旁乳腺组织的80.9%;FasL蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为57.1%明显高于癌旁乳腺组织的19.0%。结论:在乳腺癌发生、发展过程中p53、Caspase-3和FasL蛋白发挥着既独立又协同的作用。     

Survivin、Her-2、P16和PTEN在膀胱癌中的表达及意义

目的研究Survivin、Her2、P16和PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法检测43例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中以上4种蛋白的表达。结果4种蛋白在膀胱癌中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有显著性意义(均为P<0.01)。不同临床分期间Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05);不同病理分级间Survivin、Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。Her2和Survivin蛋白表达间存在正相关(r=0.821,P<0.05)。结论Her2和Survivin的高表达是膀胱癌预后不良的指征;P16可作为早期诊断的标记物;PTEN则可作为膀胱癌预后不良的独立性指标。     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义

目的研究WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测60例原发性胃癌及其癌旁组织中WWOX与c-jun蛋白的表达情况。结果胃癌组织中WWOX蛋白阳性表达率(28.3%)显著低于在癌旁组织中的表达率(81.7%)(P<0.01)。胃癌组织中c-jun蛋白阳性表达率(68.3%)显著高于其癌旁组织中的表达率(23.3%)(P<0.01)。WWOX蛋白的阳性表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与其他临床病理参数无关。c-jun蛋白阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。两者的表达存在相关性(χ2=4.96,P<0.01)。结论WWOX蛋白和c-jun蛋白在胃癌组织和癌旁组织的表达均有明显的差异,WWOX蛋白在胃癌中低表达,而c-jun蛋白在胃癌中高表达。     

cAMP—依赖性蛋白激酶的提纯及活性测定

用ＤＥＡＥ－纤维素层析和羟基磷灰石层析方法,从牛心中提取了ｃＡＭＰ－依赖性蛋白激酶。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定分子量为３８ｋＤａ,并测定了其活性,为ｃＡＭＰ代谢途径的研究打下了基础。     

肾上腺皮质肿瘤细胞中Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白的表达及其意义

目的观察Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白在肾上腺皮质肿瘤中的表达，探讨其在肾上腺皮质肿瘤免疫逃逸中的作用及意义。方法采用免疫组化SP法检测55例肾上腺皮质腺瘤和17例肾上腺皮质腺癌Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白的表达，应用Mias99图像分析系统对检测结果进行分析。结果①Fas、HLA-DR在肾上腺皮质癌中表达减少，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显低于肾上腺皮质腺瘤（P〈O．01）；②Fas-L在肾上腺皮质癌中表达增多，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显高于肾上腺皮质腺瘤（P〈0．01）。结论①Fas／Fas-L系统与HLA—DR可能在肾上腺皮质肿瘤的免疫逃逸机制中发挥重要作用；②Fas、HLA—DR可作为判别肾上腺皮质良、恶性肿瘤的指标。