耐药质粒消除的研究概况与展望

质粒是细菌内染色体外具有独立复制能力的对细菌生存非必需的小型共价闭合环状双链DNA分子。耐药质粒上携带着耐药基因 ,赋予了细菌对某些抗生素耐药。耐药质粒可自宿主细胞内自发消除 ,但很缓慢 ,其消除频率为 10 - 2 - 10 - 8。含质粒的细菌用正常的培养基培养同时经某些物理、化学方法处理 ,由于质粒的复制受到抑制而染色体的复制仍继续进行 ,故可使子代细菌中的质粒消除 ,其消除频率比自发消除增加 10 0 - 10 0 0 0 0倍[1] 。质粒消除后细菌的耐药性也随之丧失 ,质粒与染色体突变不同 ,质粒消除后其耐药性不再回复 ,除非外源质粒再次…     

紫花地丁对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药质粒的消除作用基金项目:

目的 观察紫花地丁对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureaus,MRSA)耐药质粒的消除作用,探寻逆转MRSA抗药性的新方法.方法 将紫花地丁注射液亚抑菌浓度与携带耐药质粒的MRSA作用24 h,然后影印培养,计数消除子数.结果 紫花地丁和空白对照组耐药质粒的消除率分别为46.21%和0.69%,两组的消除率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 紫花地丁具有消除MRSA耐药质粒的作用.     

药物在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒pRsT98的研究

目的 探讨用中西药在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒pRST98的可能性。方法 将原存在于伤寒杆菌中的耐药质粒pRST98经接合转移分别导入大肠杆菌和鼠伤寒杆菌，选用双黄连和氧氟沙星对上述3种细菌进行亚抑菌浓度的消除试验，并对实验前后的受试菌分别进行K－B纸片扩散法和最小抑菌浓度法（MIC）药敏试验及质粒电泳检测。结果 两种药物在体外未能将受式菌携带的pRST98消除；但该质粒编码的耐药标志减少；部分菌株对原有药物的耐药程度明显下降。结论 双黄连和氧氟沙星能降低pRST98宿主菌的耐药性，但药物作用后同一质粒在不同宿主菌中耐药性变化的差异，显示该质粒表达的多样性和复杂性。     

pSC101-pMB1质粒双复制子质粒的构建

目的构建带有pSC101和pMB1复制子的质粒。方法将pSC101、pUC19（pMB1型复制子）分别用Eco-RI限制性内切酶消化后,DNA连接酶连接.车睾化大肠杆菌DH5a,筛选重组子,提取质粒电泳分析;氯霉素培养条件下提取双复制子质粒及其检测OD260值,并将双复制子质粒转化ploA-大肠杆菌。结果阳性重组子带有1个11.9kb质粒,该质粒带有氨苄青霉素和四环素耐药基因的质粒,氯霉素培养条件下双复制子质粒的提取物OD260值增加,并能转化ploA-大肠杆菌。结论构建的质粒带有pSC101和pMB12类复制子。     

喹诺酮类抗菌药对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

以喹诺酮类药物作为质粒消除剂,进行抗生素耐药质粒定位实验。通过10株金黄色葡萄球菌耐药株的实验,确定其中3株菌具有氯霉素、四环素和红霉素耐药质粒。并比较了喹诺酮类与SDS的消除作用,发现在不同浓度的消除剂及不同菌株中其消除作用不相同。     

喹诺酮类抗菌药对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

以喹诺酮类药物作为质粒消除剂,进行抗生素耐药质粒定位实验。通过10株金黄色葡萄球菌耐药株的实验,确定其中3株菌具有氯霉素、四环素和红霉素耐药质粒。并比较了喹诺酮类与SDS的消除作用,发现在不同浓度的消除剂及不同菌株中其消除作用不相同。     

大黄素对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

自中药虎杖中提取的大黄素与常用化学消除剂—吖叮黄、SDS,分别对金黄色葡萄球菌多剂耐药菌株(T_c~rG_m~rS_m~rP_c~r)进行抗生素耐药质粒消除试验。结果表明,大黄素对试验菌(22)的四环素耐药性:消除率与对照相比提高5.8—6.7倍。少数菌落同时消除青霉素、庆大霉素及链霉素的耐药性,消除率与对照相似。据此,初步认为金黄色葡萄球菌(22)可能存在四环素质粒。不能排除另一与青霉素等耐药性有关的质粒存在的可能性。     

R质粒的紫外线消除试验改进和体会

质粒是细菌内染色体外具有遗传功能的环状双链ＤＮＡ,在革兰阴性杆菌质粒中含有一种耐药性质粒叫做Ｒ质粒［１］。质粒虽然可自宿主细胞内自发消除,但很缓慢,其消除频率为 １０－２～１０－８,而利用理化因素处理,其消除频率可增加 １００～１００ ０００倍［２］。本试验对细菌带有耐氯霉素（ＣＭ）质粒进行紫外线消除做些改进和探索。１材料和方法１．１菌种处理耐氯霉素（ＣＭ）Ｄ１５痢疾杆菌,经接合传递给大肠杆菌（从而获得耐ＣＭ大肠杆菌）。１．２细菌悬液的制备取培养６ｈ密布涂菌的耐ＣＭ大肠杆菌的平板２只,每只加无菌生…     

淋球菌的质粒谱与耐药谱分析

淋病是我国性传播疾病(STD)的主要病种，越来越引起人们的广泛关注，淋球菌是淋病的病原菌。淋病治疗过程中抗生素的滥用以及用药的不规范，产生了新耐药菌株和新的耐药谱，给临床治疗用药带来了困难。为了解我区淋球菌的耐药情况以及耐药与质粒的关系，我们于2002年从深圳市龙岗区各医院STD门诊病人中分离到40株淋球菌，并对其质粒谱与耐药谱进行了研究。现报道如下。     

细菌接合性耐药质粒与毒力关系的研究

目的　研究伤寒菌接合性耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 与宿主菌毒力的关系。方法　用伤寒菌同源染色体的含ｐＲＳＴ９８ 野生株、消除ｐＲＳＴ９８ 菌株及ｐＲＳＴ９８ 重新导入消除菌株后,检测它们在人、兔及豚鼠血清中抵抗力的改变。将ｐＲＳＴ９８ 导入不含质粒的鼠伤寒无毒株ＲＩＡ,比较接合子ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ 与含一毒力质粒的鼠伤寒毒株ＳＲ－ １１ 及ＲＩＡ在体外对Ｈｅｐ－ ２ 、ＣＨＯ 和ＨｅＬａ 细胞的粘附、侵袭能力;经口感染小鼠观察３ 种菌在体内播散、繁殖及引起所在脏器的病理改变,并经腹腔感染测定对小鼠的半数致死量。结果　携带ｐＲＳＴ９８ 的菌株在血清中的抵抗力显著高于无此质粒菌株（ Ｐ＜ ０ ．０５）;ｐＲＳＴ９８ 在体外不影响宿主菌对上述３ 种细胞的粘附、侵袭力,但能使携带该质粒的ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ在小鼠肠系膜淋巴结、脾和肝脏的活菌数显著增加（ Ｐ＜ ０．０５） ,并引起相应的病理变化;腹腔注射小鼠ＬＤ５０ 比ＲＩＡ降低１０００ 倍（Ｐ＜ ０．０１） 。结论　伤寒菌耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 具有多效性,不但能编码对药物的抗性,同时还能使宿主菌的毒力增强。     

耐药质粒在肠道杆菌间的接合传递研究

选用１３种抗菌药物对１８株肠道杆菌进行药敏试验、质烂检测并用传统及改良两种接合转移试验方法，以５株伤寒杆菌的不相容性Ｃ群（ｉｎｃＣ）Ｒ质粒、６株大肠杆菌及２株鼠伤寒杆菌的Ｒ质粒作供体，研究其在肠道杆菌间的传递。结果显示，Ｒ质粒能在４种肠道杆菌间互相传递，其中伤寒杆菌ｉｎｃＣ群Ｒ质粒能在这４种菌中稳定复江表达耐药性。质粒的可传递性给阻断耐药性的传播和疾病的防治带来很大困难，单纯消除某个菌中的耐药质粒     

医院内感染耐药菌质粒的调查

目的：了解医院内感染耐药性菌质粒的分布情况。方法：运用质粒图谱,限制性内切酶谱,质粒消除,接合传递等系列补充实验对医院内感染细菌的R－质粒进行综合分析。结果：医院内感染以革兰氏阴性杆菌为主,占79．6％,其中71％的革兰氏阴性杆菌含R－质粒,DNA分子在2．3－23．1KB间,75．2％的铜绿假单胞菌经质粒消除后,对先锋V,庆大霉素,氨卞青霉素和羟卞青霉素由原来的耐药变为敏感,说明这部分细菌的抗药性是由质粒介导的。另外24．8％的菌株虽然质粒被消除了,但抗药性并未发生改变,铜绿假单胞菌20KB的质粒可转化到受体菌中,使受体菌带有铜绿假单胞菌相同的抗药性,表明这一质粒可在不同种属间传递,有成为“流行质粒”的倾向。结论：医院内感染以革兰氏阴性菌为主,质粒在耐药菌株的传播流行中起重要作用。     

产KPC酶超耐药阿斯肠杆菌EaH7的发现及其耐药伴生质粒的遗传特征

 目的  分析1株亚胺培南抗性阿斯肠杆菌(Enterobacter asburiae)的耐药机制及其遗传特征。方法  Vitek-2 Compact系统初步鉴定菌株并测定抗生素最小抑菌浓度,对16s rRNA基因测序以确定菌株;PCR法扩增β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类等17种耐药基因并测序确认;以CaCl₂诱导的化学法转化质粒;构建伴生质粒DNA文库并测序,以Glimmer 3.02 和BLASTP软件注释并预测伴生质粒序列的编码基因功能;采用接合试验验证伴生质粒对耐药性质粒转移的作用。结果  该菌株为阿斯肠杆菌,对亚胺培南等15种β-内酰胺及氨基糖苷类抗生素耐药,仅对左氧氟沙星和环丙沙星敏感;该菌株同时含有2种质粒,其中耐药性质粒pEa-1携带耐药基因blaKPC-2、blaCTX-M-15和blaTEM-1,而伴生质粒pEa-2则携带4种转移蛋白基因mobA、mobB、mobC和mobD;pEa-2可促进耐药质粒pEa-1接合转移。结论  在国内首次报道了产KPC-2酶的阿斯肠杆菌,该菌携带的质粒pEa-2具有促进耐药性质粒pEa-1接合转移的作用。     

伤寒杆菌耐药质粒pRST98介导血清杀菌作用抗性的研究

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细菌接合性耐药质粒与毒力关系的研究

目的 研究伤寒菌接合性耐药质粒ｐＲＳＴ９８与宿主菌毒力的关系。方法 用伤寒菌同源染色体的含 ｐＲＳＴ９８野生株、消除ｐＲＳＴ９８菌株及ｐＲＳＴ９８重新导入消除菌株后，检测它们在人、兔及豚鼠血清中抵抗力的改变。将ＰＲＳＴ９８导入不含质粒的鼠伤寒无毒株ＲＩＡ，比较接合了ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ与含一毒力质粒的鼠伤寒毒株ＳＲ－１１及ＲＩＡ在体外对Ｈｅｐ－２、ＣＨＯ和ＨｅＬａ细胞的粘附、侵袭能力；经口感染小鼠     

伤寒杆菌耐药质粒pRST98介导血清杀菌作用抗性的研究

将ｐＲＳＴ９８导入不含质粒且对抗菌药物敏感的大肠杆菌、伤寒杆菌，并用十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）清除耐药菌株的ｐＲＳＴ９８，计算接合子及Ｒ质粒消除前后菌株在人、兔及豚鼠的不同浓度、不同成份血清中的存活率。ｐＲＳＴ９８介导其宿主苏对血清杀苏的抗性，但在不同宿注菌中抵抗力不同；补体经典途径主路途径均参与血清杀菌过程。ｐＲＳＴ９８具有多效性，其广泛的宿主性在介导细菌多重耐药的同时，还赋予细菌抵抗血清的杀菌作     

金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒DNA的抽提及检测

本文报道了用溶菌酶合并使用少量溶葡萄菌素作为破壁酶提取金黄色葡萄球菌质粒DNA,然后用琼脂糖凝胶电泳来检测的方法。比较研究了一株自南京地区分离的金黄色葡萄球菌多剂耐药株(22)及用大黄素处理后所得的不同耐药性消除菌株的质粒DNA。结果证明,在金黄色葡萄球菌(22)中含有4条质粒带。分子量较小的二条质粒带可能与四环素耐药性及青霉素耐药性有关。它们的分子量约为2.6及2.0 Mdal。     

鹅不食草水煎剂对绿脓杆菌R质粒体外消除作用的实验研究

目的 探讨中药鹅不食草水煎剂对绿脓杆菌R质粒的消除作用。方法 对临床分离的绿脓杆菌R质粒进行了检测,并选用中药鹅不食草水煎剂对该质粒进行了体外消除试验。结果 体外药物作用24h、48h、72h,R质粒消除率分别为0.7％、4.7％、46.3％,SDS对照组分别为0.3％、0.7％、1.7％。结论 鹅不食草对耐药质粒有较强的消除作用。     

耐药质粒在肠道杆菌间的接合传递研究

选用１３ 种抗菌药物对１８ 株肠道杆菌进行药敏试验、质粒检测并用传统及改良两种接合转移试验方法,以５ 株伤寒杆菌的不相容性 Ｃ群（ Ｉｎｃ Ｃ） Ｒ 质粒、６ 株大肠杆菌及２ 株鼠伤寒杆菌的 Ｒ 质粒作供体,研究其在肠道杆菌间的传递。结果显示, Ｒ 质粒能在４ 种肠道杆菌间互相传递,其中伤寒杆菌 Ｉｎｃ Ｃ 群 Ｒ 质粒能在这４ 种菌中稳定复制并表达耐药性。质粒的可传递性给阻断耐药性的传播和疾病的防治带来很大困难,单纯消除某个菌中的耐药质粒已难以奏效,正常菌群中庞大的耐药基因库是致病性耐药菌株流行的潜在危险;合理选择、控制抗生素的使用,降低“选择性压力”显得尤为重要。