经脾脏注射血吸虫虫卵实验方法的探讨

报告应用经脾脏注射虫卵法建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型，并与自然感染模型作比较。结果表明，脾脏注射组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为１００％，其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程均与自然感区染模型相似。本实验提示经脾脏注射虫卵是一种较好的、建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的方法。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗诱生免疫应答的？…

目的 初步研究日本血吸虫大陆副肌球蛋白核酸疫苗在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱生的免疫应答特征。方法 利用ＴＲｌｚｏｌ方法抽提日本血吸虫大陆株成虫总ＲＮＡ〈并通过逆转录聚合酶链反应；扩增编码日本血吸虫大陆株副肌球蛋白的全基因ｃＤＮＡ，将其克隆人质粒表达载体构建成日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗；将其通过后腿胫前肌免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，共免疫３次，每次间隔３周；利用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）分析     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究

目的初步研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白核酸疫苗在C57BL／6小鼠诱生的免疫应答特征。方法利用TRIzol方法抽提日本血吸虫大陆株成虫总RNA，并通过逆转录聚合酶链反应；扩增编码日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（SjC97）的全基因cDNA，将其克隆入质粒表达载体（pcDNA／Amp）构建成日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗（pCMV－SjC97）；将其通过后腿胫前肌免疫C57BL／6小鼠，共免疫3次，每次间隔3周；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析pCMV－SjC97免疫所诱生的特异性抗体IgG及IgG亚类，以及特异性抗体IgM及IgE。并初步分析了pCMV－SjC97免疫C57BL／6小鼠脾淋巴细胞抗原特异性体外增殖能力。结果pCMV－SjC97免疫能够诱生特异性抗体IgG及IgM；pCMV－SjC97诱生的抗体滴度与注射的DNA间存在一定的量-效关系；IgG亚类分析显示，pCMV-SjC97免疫主要诱生IgG2a和IgG2b亚类，未测到IgG1及IgG3亚类。PCMV-SjC97免疫能够诱导小鼠Th细胞激活。结论pCMV-SjC97核酸疫苗能够在C57BL／6小鼠诱生较强的体液免疫应答；pCMV-SjC97免疫主要诱生Th1型细胞免疫应答。     

HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV)adr亚型基因疫苗pCMV-S2.S(PS），观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法：将PS注射于C57BL／6小鼠胫骨前肌内，应用ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体以及采用^51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果：注射基因疫苗1周后，血清中抗HBs抗体转阳，4周后抗体达到高峰，并以高水平维持至少8周；第12周时PS诱导小鼠产生了良好的HBV特异的细胞免疫应答（P＜0.05）。结论；所构建的HBV adr亚型基因疫苗PS能够诱导小鼠产生较好的体液和细胞免疫应答。     

C57BL/6J小鼠听力损失与认知功能下降的相关性

目的 通过对老年性聋模型鼠C57BL/6J和对照组CBA/CaJ小鼠听力检测,认知行为检测以及海马CA3区突触超微结构的观察,探讨C57BL/6J小鼠年龄相关性听力损失与认知功能下降的关系。方法 将C57BL/6J小鼠根据听力随年龄的变化,按年龄分为3组：6～8周、24～26周、42～44周,每组10只。CBA/CaJ小鼠按同样的年龄也分为3组,每组9只。以TDT-Ⅲ型ABR测试仪检测听力,Morris水迷宫实验检测认知行为,透射电镜观察海马突触超微结构。结果 C57 BL/6J小鼠24～ 26周组与4～6周组比较高频开始出现听力下降,42～44周组是3个组中听力最差的。而3组的CBA/CaJ小鼠均保持了较好的听力。42～44周组的C57 BL/6J小鼠与同龄CBA/CaJ小鼠的认知行为比较,在定位航行实验中前者的潜伏期和上台前路程明显长,尤其是第3天和第4天。在空间探索实验中,42～44周组的C57 BL/6J小鼠与同龄的CBA/CaJ小鼠比较穿越平台次数明显少(0.5±0.6比1.9±1.6;P＜0. 05)。海马CA3区在42～44周C57 BL/6J小鼠比24～ 26周小鼠突触间隙明显宽[(19.4 ±0. 5)nm比(11.9±0.7) nm],突触后致密物明显薄[(15.2±0.5) nm比(27.8±2.0) nm],差异均有统计学意义（均P＜0. 05）。而在CBA/CaJ小鼠变化不明显。结论 C57BL/6J小鼠随年龄增加听力进一步下降,42～44周的C57B L/6J小鼠的听力接近全聋。同时42～ 44周C57BL/6J小鼠出现明显的认知功能下降及海马突触退变,而听力较好的同龄CBA/CaJ小鼠却没有出现相应的变化。我们推测C57BL/6J小鼠年龄相关的听力损失同其认知功能下降呈正相关。     

日本血吸虫HGPRT重组抗原与不同佐剂联合应用对小鼠免疫保护作用的研究

目的:观察日本血吸虫(大陆株)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase, HGPRT)重组抗原(reSjc HGPRT)与ISA206或弗氏佐剂联合免疫对小鼠诱导抗日本血吸虫感染的保护作用. 方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:reSjc HGPRT加ISA206佐剂免疫组、reSjc HGPRT加弗氏佐剂组、ISA206佐剂对照组、弗氏佐剂对照组和感染对照组.20 μg重组抗原和ISA206或弗氏佐剂乳化后小鼠项背部多点皮下注射,共免疫3次,每次间隔2周.佐剂对照组小鼠仅注射ISA206或弗氏佐剂和生理盐水,感染对照组不注射任何重组抗原或生理盐水.于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部皮肤感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴,6周后剖杀小鼠,门脉灌注收集成虫,计数成虫数、雌雄合抱数和小鼠肝组织虫卵数.在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体. 结果:重组抗原加ISA206佐剂或弗氏佐剂免疫组均诱导小鼠产生特异性IgG抗体应答,与感染对照组和弗氏佐剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);诱导小鼠产生的减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别为53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%,与感染对照组和2种佐剂对照组相比均有统计学意义(P<0.05).结论:reSjc HGPRT与ISA206或弗氏佐剂联合免疫,可诱导小鼠产生抗血吸虫感染保护作用.     

γ-干扰素在两种品系肺损伤差异性小鼠中的表达

目的 :探讨γ -IFN是否和冲击波所致肺损伤差异性相关。方法 :BALB/C和C5 7BL/ 6近交系小鼠采用BST -Ⅰ型生物激波管致伤。酶联免疫吸附试验测定血清和肺组织中中γ -IFN的含量 ,Northern杂交试验检测γ -IFN基因在肺组织的表达。结果 :两品系小鼠伤前血清和肺组织γ -IFN含量极低。C5 7BL/ 6小鼠血清标本中γ -IFN含量在伤后 1h显著升高 ,伤后 6h有明显下降。而BALB/C小鼠血清标本γ -IFN含量在伤后 6h显著升高 ,基本与C5 7BL/ 6小鼠伤后 1h水平相当。两种小鼠肺组织γ -IFN含量的变化趋势与血清标本的基本一致 ,不同之处在于伤后 6h ,BALB/C小鼠肺组织γ -IFN含量虽然有显著升高 ,但尚明显低于C5 7BL/ 6小鼠伤后 1h水平 ,而C5 7BL/ 6小鼠γ -IFN含量在伤后 1h和 6h持续维持在一个较高的水平。γ -IFN基因在两品系小鼠中的表达也具有明显的差异性 ,其变化趋势与肺组织中γ -IFN含量的变化相似。结论 :在相同冲击波作用下 ,BALB/C和C5 7BL/ 6小鼠γ -IFN表达呈现显著的差异性 ,提示它可能为这两种小鼠肺损伤差异的原因之一。     

日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定

目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位，候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸，定向克隆入融合表达载体pET-32c( )，经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达，表达产物以Ni^2 -NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H／HeJ及C57BL／6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞，^3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖，P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。     

不同品系小鼠对实验感染念珠状链杆菌敏感性的观察

本文通过念珠状链杆菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ，Ｓ．ｍ．）实验感染昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＢＡＬＢ／ｃ、ＩＣＲ、ＮＩＨ、ＤＢＡ共６个品系小鼠，观察其对Ｓ．ｍ．敏感性的差异。其中昆明、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ两个品系在腹腔接种后表现出明显的临床、病理改变。昆明小鼠发病率和死亡率分别为９２％和８０％；Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ分别是８０％和１２％。昆明小鼠较之Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠起病急、病情严重，多数动物死于感染的急性期。其余品系的发病率为：ＮＩＨ８％、ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ４％，没有动物死亡；ＩＣＲ在接种后无任何临床病理改变。在实验感染后临床病理改变方面，昆明小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠间有较大不同。昆明小鼠以末梢血管淤血、四肢尾部水肿、关节炎、截瘫、腹泻为主，而Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠则以注射部位和其它部位皮下脓肿、化脓性关节炎为主。本研究提示，中国昆明小鼠对Ｓ．ｍ．敏感性最高，可以将其作为“哨兵动物”用于实验大鼠Ｓ．ｍ．的常规监测；不同品系小鼠不仅对实验感染Ｓ．ｍ．的敏感性不同，而且表现出不同的临床病理改变。     

PRELIMINARY STUDIES ON SHARED ANTIGENS AMONG CERCARIA,ADULT WORM AND EGG OF SCHISTOSOMA JAPONICUM

The pooled sera of inbred C57BL/6 mice in- fected with Schistosoma japonicum, the antisera against gut-associated antigen (GAA) from artificially immunized rabbits (RAGAA20) and the antisera against soluble egg antigen (RASEA) purified by im- munoaffinity chromatography were tested with cer caria-stuck-slides, adult worm sections and liver-egg sections by immunohistochemical studies with peroxi- dase-linked protein A (PPA method). In mice anti body against eggs was detected before oviposition. Eggs containing late developmental stage of embryo started to secrete SEA 37 days after infection when the titer of the antibody against eggs reached l:256. GAA20 and SEA were proved to be at the same location within mature eggs, and RAGAA20 0nly reacted with eggs exuding SEA. RASEA reacted strongly with the membrane of cercaria. The results showed that S japonicum SEA shared its antigens with GAA and membrane-asso. ciated antigens (MAA). GAA might play a role of prcsensitizing in egg granuloma formation.     

SPF级C57BL/6J小鼠生长发育和繁殖性能指标的测定

目的 在SPF级动物饲养条件下，对本中心饲养的SPF级C57BL／6J小鼠生长发育和繁殖性能指标进行测定。方法 挑选80～90日龄C57BL／6J小鼠40只（雌、雄各半），采取1：1间歇同居，兄妹近交繁殖，并统计其生长发育和繁殖性能参数指标。结论 SPF级C57BL／6J小鼠离乳后体重增长较慢；第2、3胎繁殖性能较好，第5胎最差，种鼠连续繁殖5胎后要更换。     

黄芪多糖对KKAy小鼠骨骼肌蛋白激酶B丝氨酸磷酸化的影响

目的:观察胰岛素刺激下蛋白激酶B(PKB)丝氨酸磷酸化水平在遗传性2型糖尿病小鼠(KKAy)骨骼肌组织的变化及黄芪多糖(APS)对其影响。方法:选取雌性KKAy16只,随机分为2组:糖尿病组和糖尿病黄芪多糖治疗组;选取雌性C57BL/6J小鼠20只作为对照组,随机分为正常对照组和黄芪多糖对照组。于黄芪多糖治疗前后观察体重、血糖、血胰岛素水平、胰岛素抵抗指数及口服葡萄糖耐量试验,治疗8周后用免疫印迹法检测骨骼肌组织胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达。结果:KKAy小鼠体重、血糖及胰岛素抵抗指数均显著高于C57BL/6J组,同时伴有明显的糖耐量异常(P<0.01),经APS治疗8周后,各项实验指标均明显降低(P<0.01)。KKAy小鼠骨骼肌组织胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达水平显著低于C57BL/6J小鼠(P<0.01),黄芪多糖可明显提高KKAy小鼠骨骼肌丝氨酸磷酸化PKB表达(P<0.05),但对C57BL/6J小鼠各项指标无显著影响。结论:胰岛素刺激下的PKB磷酸化障碍是2型糖尿病胰岛素抵抗的重要机制之一,黄芪多糖可增强胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达水平,从而改善KKAy小鼠胰岛素抵抗。     

WORM BURDEN AND LYMPHOCYTE RESPONSE IN MICE IMMUNIZED WITH N-METHYL-N''-NITRO-N- NITROSOGUANIDINE ATTENUATED CERCARIAE OF SCHISTOSOMA JAPONICUM*

Investigations were carried out to observe wormburden and egg granuloma formation at differenttime intervals between immunization and challengein relation to the in vitro lymphocyte proliferativeresponse in mice immunized with NTG-attenuatedcercariae of Schistosome japonicum. Mice wereexposed t0 30 NTG-attenuated cercariae (30 u,glmlNTG x 15 min) twice at two week intervals andwere challenged at week 4, 6, 8, 10 0r 12 with 40cercariae of S japonicum. Results showed that miceimmunized with NTG-attenuated-cercariae had feweror stunted worms and fewer splenic and hepaticgTanulomas. Worm reduction rates of 8U/o, 54%, 82%,43To and 29'/o were observed at weeks 4, 6, 8, 10 and12 from initial immunization respectively. Thus,optimal acquired immunity against a challenge infection seems to occur at week 8. In mice imm-unized with NTG-attenuated cercariae, the prolifera-tive response of lymphocytes from lymph nodes,thymus and spleen to soluble egg antigen increasedgradually throughout the first six weeks postinitialinfection, peaked at week 7 and then markedlydecreased by week 12. This suggests that there maybe some correlation between the development ofprotective immunity and the dynamic characteristicsof lymphocyte proliferative response in vitro in themice model infected with NTG-attenuated cercariaeof S japonicum.     

Congenital infection of rabbits with Schistosoma japonicum and protective immunity of offspring

Background Recently congenital infection with Schistosoma japonicum (S. japonicum) has been domonstrated in pigs, rabbits, mice and dogs. We explored the rabbit as an animal model for the congenital infection of schistosomiasis japonica and assessed the effect of a congenital S. japonicum infection on the resistance of rabbit kittens to a postnatal challenge infection.Methods Sixteen pregnant New Zealand white rabbits were infected with a single dose of S. japonicum cercariae. The exposed animals were divided into three groups according to the gestation age at the time of infection. Diagnosis of prenatally acquired S. japonicum infection in the rabbit kittens was primarily based on serological tests in combination with parasitological and histopathological findings. Congenitally infected kittens were challenged percutaneously with 100 S. japonicum cercariae to assess the effect of a congenital S. japonicum infection on kitten resistance to a postnatal challenge infection.Results The overall prevalence of congenital infection in offspring of infected mothers was 20% (12/60). The congenital infection rate in group L (late gestation) was much higher than in group E (early gestation) and group M (mid-gestation) (P&lt;0.05). After a postnatal challenge infection, prenatally infected kittens had a 54.66% worm reduction rate, 41.45% egg reduction rate, and 51.76% granuloma size reduction rate compared to nave kittens.Conclusions This study demonstrates the possibility of congenital infection of S. japonicum in rabbits and the resistance of congenitally infected kittens to a postnatal challenge infection. These results have important implications not only for epidemiological investigations, but also in designing government control programs for schistosomiasis.     

泡状棘球蚴感染纯系小鼠诱导免疫耐受的实验研究

目的探讨感染泡球蚴的小鼠皮肤移植后免疫系统的变化对移植物的影响。方法采用小鼠尾部皮肤移植建立小鼠皮肤移植模型。将64只C57BL/6小鼠及64只BALB/c小鼠各随机分为4组,每组各16对小鼠,其中16只C57BL/6小鼠为供体,16只BALB/c小鼠为受体。A组:空白对照组(非同系移植不予以任何干预);B组:实验组1,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴1个月后);C组:药物对照组,采用非同系移植加药物[西罗莫司(商品名:雷铂霉素)]干预,皮肤移植术后5d每日给予西罗莫司1.5mg/kg干预;D组:实验组2,以健康C57BL/6小鼠尾部皮肤移植至BALB/c小鼠(感染泡球蚴3个月后)。术后观察BALB/c小鼠尾部移植皮肤生长情况。每组留8只用于观察BALB/c小鼠术后尾部移植皮肤生存期,每组于术后3、5、7、9d4个时间点各取2只小鼠尾部移植皮片,用于观察小鼠尾部移植皮肤病理变化情况。结果 A、B、C、D组移植皮肤存活时间平均为(6.00±0.76)、(7.50±0.93)、(13.25±1.04)、(11.5±0.93)d。C组小鼠移植皮片存活时间较D组长,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组移植皮肤存活时间较A、B组延长,差异有统计学意义(P<0.01)。组织病理学检查:A、B组移植皮片均在术后1周左右发生明显的逐渐加重的急性免疫排斥反应,C、D组移植皮片的免疫排斥反应较A、B组轻。结论小鼠感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植皮片的存活,可以延长移植皮片的生存时间。该模型为研究感染泡球的免疫实验研究提供了良好的实验平台,为进一步研究泡球蚴感染后机体免疫状态的变化提供了理论依据。     

抗T细胞受体αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植诱导小鼠皮肤移植耐受

目的:探讨抗T细胞受体(T cell receptor, TCR)αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用.方法:第0天,向C57BL/6小鼠(受体)尾静脉输注2×10⁸个BALB/c小鼠(供体)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单抗500 μg;第2天,向C57BL/6小鼠腹腔注射抗CD80单抗500 μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对C57BL/6小鼠进行迟发型超敏反应测定和混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)分析,并进行MLR的白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)逆转实验、过继转移实验和嵌合体检查,探讨耐受形成的机制.结果:接受了抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植的C57BL/6小鼠,供体皮肤移植物平均存活70 d;在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性.IL-2逆转实验结果表明克隆不应答可能参与了移植耐受的形成.体内、体外过继转移实验均显示耐受C57BL/6小鼠脾细胞中存在抑制细胞的活性.嵌合体检查结果表明在耐受C57BL/6小鼠的胸腺和脾中均形成了混合嵌合体,嵌合体水平随时间下降.结论:抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功诱导出皮肤移植物的长期耐受.     

体外诱导C57BL/6小鼠CIK细胞研究

目的:诱导培养C57BL/6小鼠CIK细胞,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用。方法:使用三种细胞因子及抗CD3单抗体外诱导C57BL/6小鼠脾细胞,用CCK-8试剂检测对肿瘤细胞杀伤作用。结果:培养出的CIK细胞主要为CD8+NK1.1+细胞,对肿瘤细胞有较强杀伤作用。结论:成功诱导出C57BL/6小鼠CIK细胞。     

小鼠脊髓发育遗传参数的研究

目的：进行小鼠脊髓发育形态学数据测定，研究遗传参数。方法：取4种近交系小鼠，A／J；C57BL／6J；DBA／2J；129xl／SvJ以及A／J与C57BL／6J杂交的F1和F2代重组个体，多聚甲醛灌注后进行脊髓重量、颈膨大截面积、灰质百分比的测定。结果：数据显示在4个近交系中，A／J与C57BL／6J脊髓发育差别最大，A／J为小脊髓(平均重65．21mg，截面积2．69mm^2；C57BL／6J为大脊髓，平均重81．58mg，截面积3．06mm^2)。在该近交系与重组小鼠中，脊髓发育的遗传度为30％～40％，最少控制基因数为2～4。结论：小鼠中脊髓发育存在超显性现象，通过小鼠脊髓形态测定获得了发育相关的遗传参数，为脊髓发育数量性状基因座(QTL)和控制基因的确认提供了资料。     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.