人宫颈癌细胞对丝裂霉素耐药及逆转的实验研究

目的 :探讨SDZPSC 833和维拉帕米 (Verapamil,VER)对MMC体外增敏作用。方法 :以人宫颈癌Hela细胞和耐药亚系Hela/MMC细胞为材料 ,观察了PSC 833和VER对MMC体外增敏作用。结果 :无毒剂量的PSC 833和VER (1～ 3μg/ml)可显著增加MMC的细胞毒作用且可基本克服Hela/MMC细胞对MMC 5倍的耐药 ,3 H_TdR实验表明 ,VER或PSC 833与MMC联用可增加MMC对宫颈癌细胞DNA合成的抑制 ,且PSC作用强于VER ,光镜和电镜下形态学观察 ,联合用药组细胞呈明显退行性变。结论 :无毒剂量的PSC 833和VER体外能基本逆转Heal/MMC细胞对MMC的耐药性 ,且PSC 833作用强于VER ,PSC 833作为耐药修饰剂可望用于宫颈癌化疗 ,其临床应用前景优于VER。     

丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究丝裂霉素诱导人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞凋亡的规律，形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩，裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（Ｐ〈０．０１）；流失细胞仪ＤＮＡ直方图上出现特征性的亚二倍体（亚Ｇ１）峰，凋亡过程中伴Ｂｃｌ－２基因的下调，且与诱导时间呈负相关（Ｐ〈０．０１），提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降     

米非司酮逆转人宫颈癌Hela/MMC细胞系对丝裂霉素耐药的体内研究

目的:研究米非司酮(MIF)裸鼠体内逆转人宫颈癌Hela/MMC细胞系对丝裂霉素(MMC)耐药的效果及其作用机制。方法:以人宫颈癌Hela细胞耐药亚系(Hela/MMC细胞)为材料,建立裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:空白对照组、单用MIF组、单用MMC组、联合用药组,观察用药后移植瘤的体积、瘤重及裸鼠体重,光镜下观察瘤组织病理学改变及裸鼠主要脏器的病理情况,免疫组织化学染色法检测移植瘤增殖细胞相关核抗原ki-67的表达。结果:联合用药组平均瘤体积(288.61±93.70)mm3较对照组(998.93±219.10)mm3及单用MIF组(903.01±288.51)mm3显著降低(P<0.01),较MMC组(693.33±230.75)mm3明显降低(P<0.05);联合用药组平均瘤重(0.14±0.04)g较对照组(0.41±0.07)g、单用MIF组(0.37±0.10)g及单用MMC组(0.32±0.08)g明显降低,差异有显著性(P<0.01);联用组ki-67表达的平均光密度值(OD)(0.21±0.01)较对照组(0.56±0.04)、单用MIF组(0.37±0.02)及单用MMC组(0.55±0.04)明显降低,差异有显著性(P<0.01);单用MIF组平均光密度值较对照组及单用MMC组显著降低(P<0.01),对照组与单用MMC组比较,差异无显著性(P>0.05)。联合用药组肿瘤形态出现明显坏死,各组裸鼠体重无显著性差异(P>0.05),裸鼠主要脏器无明显病理变化。结论:米非司酮裸鼠体内可逆转Hela/MMC细胞对MMC的耐药性且无明显毒副作用,其逆转耐药机制可能与降低增殖细胞相关核抗原(ki-67)的表达有关。     

microRNA217逆转人宫颈癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:探讨microRNA217(miR-217)与宫颈癌顺铂耐药的关系及其可能作用机制。方法:建立具有不同顺铂耐药性的细胞株Siha及Siha/CDDP,采用实时荧光定量PCR法检测miR-217在其中的表达差异。采用实时定量PCR及Western blot法分别在核酸和蛋白水平检测果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)在Siha及Siha/CDDP细胞系的表达差异。通过转染miR-217模拟物(miR-217mimics)检测其对宫颈癌耐药的作用及其可能作用靶点。结果:相较于Siha细胞,Siha/CDDP细胞中miR-217呈低表达,而EZH2在核酸和蛋白水平均相对高表达(P<0.05)。Siha/CDDP细胞转染miR-217mimics后,EZH2在核酸及蛋白水平均明显下降(P<0.05),对顺铂的敏感性显著增强(P<0.05)。结论:在Siha/CDDP中上调其表达可部分逆转顺铂耐药性,这可能为宫颈癌耐药的临床前期研究提供新的靶点,miR-217可能通过作用于EZH2参与宫颈癌顺铂耐药的调控。     

姜黄素对人宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

目的 :探讨姜黄素对宫颈癌 Hela细胞放射敏感性的影响及机制。方法 :利用细胞克隆技术进行剂量 -存活曲线分析 ,末端脱氧核苷酰转移酶法检测细胞凋亡 ,并对细胞周期进行分析。结果 :姜黄素组 D0 值为 96.89c Gy,空白对照组和空白药剂组 D0 值分别为 1 30 .1 2 c Gy和 1 40 .46c Gy( P<0 .0 5 )。流式细胞仪分析空白对照组和姜黄素组凋亡区阳性细胞分别为 1 .2 3%和 90 .70 % ( P<0 .0 5 ) ;经姜黄素 2 0μM、40μM处理 2 4 h后 ,与对照组相比 ,G0 /1期细胞比例降低 ,G2 + M期细胞比例增高。结论 :姜黄素可以明显提高宫颈癌 Hela细胞的放射敏感性 ,机制可能与其引起瘤细胞周期阻滞 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关     

猪原位肝脏隔离灌注大剂量丝裂霉素C实验研究

目的 建立一种球囊导管隔离技术进行原位肝脏隔离灌注(ILP)大剂量化疗药物.通过与传统手术隔离方法对比,探讨这种方法的可行性和隔离效果.方法家猪12只,分为A、B两组:A组6只,通过传统的方法进行灌注;B组6只,采用球囊导管隔离技术进行灌注.两组均在常温下经门静脉灌注大剂量丝裂霉素C(MMC 2 mg·kg-1),灌注15 min后以乳酸Ringer液冲洗10 min.灌注过程中和灌注后定时抽取血标本,灌注前后取肝脏活组织标本.利用高效液相色谱法(HPLC)测定血标本中的MMC浓度,光镜下观察灌注前后肝组织微观结构的改变.结果灌注过程中4只动物死亡,其余8只动物灌注过程顺利.A组灌注时MMC在肝循环液中的浓度为(28.319±4.893)mg·L-1,体循环血中浓度为(0.074±0.019)mg·L-1;B组灌注时肝循环中的药物浓度为(25.507±6.289)mg·L-1,体循环血中浓度为(0.086±0.021)mg·L-1.两组之间肝循环和体循环的药物浓度差异无显著性(P＞0.05).灌注后肝组织活检未见肝细胞明显坏死、肝窦内皮细胞无严重损伤.结论利用球囊导管技术进行肝脏隔离灌注的方法是简便而较为安全的,可以有效地隔离肝脏循环,应用这种方法进行大剂量MMC的肝脏局部化疗是可行的.     

丝裂霉素C动脉灌注对血管形态改变的研究

本实验采用剂量０．５ｍｇ／２ｍｌ及１．０ｍｇ／２ｍｌ的抗癌药丝裂霉素Ｃ对家兔颈外动脉行一次性灌注，于灌注后１、３、７ｄ分别进行光镜及透射电镜检查。实验结果表明：颈外动脉内灌注ＭＭＣ可造成该动脉系统不同分段的不同程度的损伤。光镜下动的损伤以内膜破坏性改变为特征；亚微结构的改变呈现ＥＣｓ脱落、内膜通透性增高及血栓形成。     

阿奇霉素对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/ADM的耐药逆转研究

目的研究阿奇霉素（AZM）对人肺腺癌多药耐药细胞株A549／阿霉素（ADM）的耐药逆转作用。方法使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度AZM对细胞株A549／ADM的抑制率，确定其非细胞毒性浓度。用MTT法分别检测ADM、顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、氨甲蝶呤（MTX）对细胞株A549、A549／ADM以及使用AZM处理后的A549／ADM的半数抑制浓度（IC50）。使用流式细胞仪检测A549以及加入AZM前后的A549／ADM内ADM的荧光强度。结果≤10mg／L的AZM对A549／ADM无明显细胞毒作用。A549／ADM对ADM、VCR、DDP、MTX均有不同程度的耐药。使用5mg／LAZM处理后，A549／ADM对上述4种药物的敏感度均有不同程度的提高。AZM的浓度提高至10mg／L时，A549／ADM对上述药物的敏感程度提高更明显。A549／ADM经AZM处理后细胞内ADM荧光强度明显提高。结论AZM可以部分逆转A549／ADM的耐药，其逆转效果与剂量相关。     

丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究了丝裂霉素诱导人膀胱癌 Ｂ Ｉ Ｕ８７ 细胞凋亡的规律。形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩、裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（ Ｐ＜ ０．０１）；流式细胞仪 Ｄ Ｎ Ａ 直方图上出现特征性的亚二倍体（亚 Ｇ１ ）峰；凋亡过程中伴 Ｂｃｌ２ 基因的下调，且与诱导时间呈负相关 （ Ｐ＜ ００１）。提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降低 Ｂｃｌ２ 的表达可提高膀胱癌腔内化疗的疗效。     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

肝动脉注射丝裂霉素C加载体溶液的肝癌患者药动力学研究

用ＨＰＬＣ法，对肝癌患者肝动脉给予丝裂霉素Ｃ加载体，溶液的肝脏血药浓度进行了测定，按非隔室模型统计计矩原理进行分析，结果表明：丝裂霉素Ｃ加载体溶液给药组药动力学参Ｔｍａｘ，ＡＵＣ０，ＭＲＴ、ＣＡＶＥ，ＣＬ与单独丝裂霉素Ｃ给药组相比有显著差异。     

丝裂霉素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的研究

目的:研究丝裂霉素对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法:在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的丝裂霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果:在丝裂霉素作用下,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,分别与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05);同时,S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升。结论:丝裂霉素可诱导胆囊癌细胞发生凋亡,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制。     

TRAIL联合丝裂霉素对前列腺癌细胞DU145杀伤作用的实验研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和丝裂霉素C(MMC)对前列腺癌细胞的杀伤作用及其协同作用.方法 选用激素非依赖的前列腺癌细胞株DU145,将生长良好的细胞接种于96孔培养板,培养24 h后用MMC(25、50、100、200 μg/Ml)和TRAIL(10、50、125、250、500 ng/Ml)分别/联合作用12 h,倒置纤维镜下观察细胞形态的变化,然后用MTT法测定细胞的生长抑制率.结果 ①细胞形态变化(50～500)ng/Ml的TRAIL组、(50～200)μg/Ml的MMC组、以及上述浓度的TRAIL和MMC联合用药组部分细胞变圆,从培养瓶壁脱落,核/浆比例增大,胞浆颗粒增多,胞核有皱缩变形,大小不均.上述改变的程度随着药物浓度的增加而加重.②细胞生长抑制率10 ng/Ml TRAIL和25 μg/Ml MMC对DU145细胞的生长抑制率和不用药组比较无显著性差异(P＞0.05);(50～500)ng/Ml TRAIL和(50～200)μg/Ml MMC对DU145的生长抑制率显著高于阴性对照组(P＜0.05),而且随着TRAIL和MMC浓度的升高,生长抑制率显著增高(P＜0.05);(50～500)ng/Ml的TRAIL和(50～200)μg/Ml的MMC分别联合作用对DU145细胞的抑制率均高于单独给药组(P＜0.05);10 ng/Ml的TRAIL单独用药对DU145细胞的抑制作用虽不显著(P＞0.05),但和(50～200)μg/Ml MMC联合用药均能加强后者对DU145细胞的抑制作用(P＜0.05).结论 TRAIL和MMC在杀伤前列腺癌细胞时存在协同作用.     

维甲酸对宫颈癌细胞化疗增敏作用的实验研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对宫颈癌耐丝裂霉素细胞HeLa/MMC增殖及药物敏感性的影响,并探讨其机制。方法观察ATRA作用下细胞HeLa/MMC增殖,MTT法观察ATRA对HeLa/MMC药物敏感性的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测凋亡相关基因bax的表达。结果 ATRA对HeLa/MMC增殖有抑制作用;ATRA能提高MMC对HeLa/MMC细胞的杀伤作用,ATRA能促进细胞凋亡,上调HeLa/MMC细胞bax基因的表达。结论表明ATRA的化疗增敏作用与促进HeLa/MMC细胞凋亡,上调HeLa/MMC细胞bax基因的表达有关。     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞抑制及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以5～50μmol/L的姜黄素分别处理Hela细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测凋亡,透射电镜进行形态学观察.SABC免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bcl-XL、Caspase-3蛋白表达水平.结果:curcumin对Hela细胞增殖有抑制作用.并呈剂量依赖性.DNA直方图上可见亚"G1"峰;透射电镜观察见部分细胞发生凋亡形态学改变.Bcl-2、Bcl-XL表达均下调,Caspase-3表达增强.结论:姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显抑制作用.上调Cas-pase-3,下调Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

不同浓度丝裂霉素C膀胱灌注防治膀胱癌复发

将４０例浅表性膀胱癌接受膀胱灌注化疗的患者随机分为低浓度组和高浓度组，灌注的方法完全相同，但灌注药物丝裂霉素Ｃ加生理盐水的浓度分别为１ｍｇ／ｍｌ和２ｎｇ／ｍｌ，经６－５３个月随访观察，结果表明高浓度组的疗效较好，由于灌注间隔的时间较长（每月１次），高浓度组的副作用并不突出。     

bFGF滴眼治疗丝裂霉素C致角膜损伤的实验研究

目的探讨丝裂霉素C造成角膜损伤后碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对角膜修复过程的影响。方法将直径为6．0mm的双层纱布片在0．04％的MMC溶液中浸透后，置于兔眼角膜中央3min，制作成MMC致角膜损伤动物模型，随机分为治疗组和对照组。治疗组应用贝复舒滴眼液和氧氟沙星眼药水点眼，对照组仅用氧氟沙星眼药水点眼，荧光素钠角膜染色后，于手持裂隙灯显微镜下观察角膜上皮愈合情况及角膜新生血管情况。每周检查3次，持续2周，判断疗效。结果治疗组与对照组比较，角膜上皮愈合情况有显著性差异（X^2=6．583，P＜0．05），角膜新生血管情况亦有显著性差异（X^2=6．788，P＜0.01）。结论bFGF对丝裂霉素C所致角膜损伤有显著疗效，能缩短病程，减少角膜新生血管形成。     

人胃癌MGC803细胞紫杉醇耐药细胞系初步建立的实验研究

目的：探讨胃癌MGC803对紫杉醇的耐药机制,初步建立人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系,研究耐药过程中的变化。方法：采用逐步递增紫杉醇浓度,间歇作用体外诱导法建立人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系MGC803/PA,做相关检测;MTT法测定药物敏感性;光学显微镜、电子显微镜、MTT法等方法观察其生物学指标的改变。结果：经过4个月建成人胃癌MGC803紫杉醇耐药细胞系MGC803/PA,2、3、4个月的耐药指数分别为5.12、11.46、15.98,并且与其他多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性,MGC803/PA的细胞形态逐渐发生改变,生长曲线逐渐改变。结论：MGC803/PA细胞具有耐药表型,且耐药性能稳定,MGC803/PA的增殖能力逐渐下降,MTT法及其电镜可以较早地提示MGC803/PA的耐药特征。