抗犬细小病毒的单克隆抗体的制备

CPV－YZ株的细胞培养液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为免疫原免疫BALB／C小鼠，应用杂交瘤技术筛选出8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为F5G10、3F11F4、F11G6、6C5C2、6E4G3、6C2B11、F11D6、3D9C4株，各株单抗均为IgG型；中和试验表明：F11G6、3D9C4、6E4G3、6C5B114株单抗有中和作用，Dot-ELISA试验证明了8株单抗仅针对病毒抗原决定簇的空间结构。     

犬细小病毒研究进展

犬细小病毒是自主复制型病毒的一个成员，主要引起狗的肠炎和心肌炎，整个基因组是单链线形的5323个核苷酸，有2个主要的开放阅读框架。     

Alloferon1体外抗犬细小病毒研究

[目的]开发出一种用于防治犬细小病毒病的新药物。[方法]将不同剂量的Alloferon1添加于病毒感染前、病毒感染同时、病毒感染后的细胞培养液中进行体外抗犬细小病毒试验。[结果]FK81细胞接种CPV后2 d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d后病变细胞呈葡萄串状脱落。在80%细胞产生病变时收取病毒,TCID50为10-6.2～10-6.3/ml。对照组细胞上清的血凝反应为阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212。对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变。250.0和25.0μg/ml 2个浓度的抗病毒作用较强,2.5μg/ml的抗病毒作用较弱。在病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而在病毒感染后加入多肽的抗病毒作用较弱。[结论]Alloferon1可以用于犬细小病毒病的防治。     

Alloferon2体外抗犬细小病毒作用研究

为试验Alloferon2是否具有抗犬细小病毒作用并开发出一种可以用于防治犬细小病毒病的新药物,将不同剂量的Alloferon2添加于病毒感染前、病毒感染时、病毒感染后的细胞培养液进行体外抗犬细小病毒试验.结果显示,FK81细胞病毒接种CPV后2d,细胞开始变圆,胞质内颗粒增多;4～6 d病变细胞呈葡萄串状脱落,在80％细胞产生病变时收毒,TCID50为10-6.2～ 10-6.1/mL.对照组细胞上清为血凝反应阴性,接种病毒细胞上清的血凝价为212.对照组的8孔细胞生长正常,接种病毒的8孔细胞全部产生病变.250 μg/mL和25 μg/mL2个浓度的抗病毒作用较强,2.5 μg/mL浓度的抗病毒作用较弱;病毒感染前或同时加入多肽的抗病毒作用较好,而病毒感染后加入多肽的抗病毒效果较弱.结果表明,Alloferon2可以用于犬细小病毒病的防治.     

犬细小病病毒诊疗与探讨

犬细小病是一种急性、烈性、致死性传染病,特征是非化脓性心肌炎和出血性肠炎。心肌炎型多见于出生后4-6周龄,临床症状未出现就突然死亡,或者出现严重的呼吸困难后死亡;出血型肠炎在临床上最为常见,以呕吐、腹泻或拉稀、便中带血、白细胞显著减少为特征。近年来该病发病率高,成为养犬业最大的威胁。     

犬细小病毒的分离与鉴定

从临床表现体温升高、呕吐、血样腹泻、脱水等疑似细小病毒 (Canine Parvovirus,CPV)感染的病犬中 ,采取粪样 8份。应用狗肾传代细胞 (MDCK)增毒 ,其中 6号病料 (CPV6 )在 MDCK细胞上产生脱落、变形、游离等细胞病变 ,且细胞感染性试验发现 ,CPV6对 MDCK的感染性强于对猫肾传代细胞 (CRFK )的感染性 ;核酸型试验证明 ,CPV6毒株的代谢可被 5 -溴脱氧尿核苷 (FUDR)所抑制 ,其核酸属于 DNA型 ;所分离的病毒培养物能凝集猪、猴、马、猫的红细胞 ,凝集效价达 2 6 ～ 2 8,并能被已知犬细小病毒阳性血清所抑制 ,但不能凝集牛、犬、绵羊、兔、小鼠和鸡的红细胞 ;电镜观察病毒粒子外观呈圆形或六边形 ,直径约 2 0～ 2 3nm ;该病毒耐酸、耐热、耐乙醚 ;动物致病性试验表明 ,经口服 1m L ,试验组幼犬第 7天发病 ,采集病犬粪样做 HA试验为阳性反应 ,其凝集猪红细胞的特性能被犬细小病毒阳性血清所抑制。     

犬细小病毒的分离与鉴定

采用细胞培养法对疑似犬细小病毒的粪便和内脏进行了分离和鉴定,并对分离到的病毒进行生物学特性鉴定和动物回归试验。结果共分离到3株CPV,分离株在猫肾细胞F81产生明显细胞病变,血凝效价达1∶27～1∶210,细胞病变能被犬细小病毒阳性血清所抑制,接种幼犬后,分离株3可以引起试验犬发病死亡。     

猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用经超滤浓缩、PEG沉淀、氯化铯密度梯度离心纯化的猪细小病毒（PPV）免疫BALB／C小白鼠、，取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／O在PEG存在下融合，经HAT筛选、ELISA测定及3次克隆化后，获得3株（P－15－36－6，P－15－45－51，P－15－52－28）能持续稳定分泌抗PPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，3株杂交瘤细胞的染色体数均在95条以上，经分类测定其免疫球蛋白均属IgG，且均为IgG1亚类，阻断试验证明单抗具有抗PPV的特异性，利用间接ELISA抑制试验进行了单抗在诊断上应用研究。     

63株传染性法氏囊病病毒分离株单抗反应谱分析

利用 1 2株不同来源的抗传染性法氏囊病病毒 (IBDV)单克隆抗体 ,采用斑点酶联免疫吸附试验方法 ,对 1 992～1 999年从全国不同地区收集的 63株 IBDV毒株进行单抗反应性检测 ,建立各分离毒的单抗反应谱 ,以分析各毒株的抗原性。根据各分离株的单抗反应谱 ,可将 63个分离毒株分成 1 0组     

猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用经超滤浓缩、PEG 沉淀,氯化铯密度梯度离心纯化的猪细小病毒(PPV)免疫 BALB/C 小白鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP_2/O在PEG 存在下融合,经 HAT 筛选、ELlSA 测定及3次克隆化后,获得3株(P-15—36—6,P-15—45—51,P—15—52—28)能持续稳定分泌抗 PPV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株杂交瘤细胞的染色体数均在95条以上,经分类测定,其免疫球蛋白均属 Ig G,且均为 IgG_1亚类。阻断试验证明单抗具有抗 PPV 的特异性。利用间接 ELISA 抑制试验进行了单抗在诊断上应用研究。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒中和性单克隆抗体的建立和应用

用氟利昂去除法氏囊组织杂蛋白,并经甘油-酒石酸钾密度梯度离心进一步纯化,通过电镜观察、光密度测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE).证明得到的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)形态完整。将纯化的IBDV 免疫 BALB/C 鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(VNT)检测分泌抗体,获得了6株稳定分泌抗 IBDV 中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为 NIB_1、NIB_2、NIB_3、NIB_4、NIB_5、NIB_6。还建立了检测 IBDV 的单克隆抗体双抗体 ELISA。     

伊氏锥虫单克隆抗体制备及性质研究

本研究运用杂交瘤技术成功地分离了B_8、I_2两株分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体(McAb)的细胞系。首先用可溶性伊氏锥虫抗原接种BALB/C小鼠,经过一定的免疫程序后,取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经过两次有限稀释法克隆,用ELISA方法选育出B_8、I_2两株产生抗伊氏锥虫McAb的细胞株。用琼脂扩散法与标准羊抗鼠亚类血清反应证明两种McAbs皆隶属于IgG_1亚类。细胞株在连续传代及冻存复苏后其分泌抗体能力稳定;经多种血清学反应证实,这两株McAb与伊氏锥虫可溶性抗原不起凝集反应,只有ELISA反应阳性。pH稳定试验表明,B_8株McAb比I_2株稳定。     

抗仙台病毒单克隆抗体在诊断上的应用

本文应用辣根过氧化物酶标记抗仙台病毒的单克隆抗体,建立了抗体夹心法检测小鼠体内仙台病毒抗体的方法,与间接 ELISA 进行比较,检出率提高6%左右,敏感度提高四倍以上。样本结果的变异系数小于10%,重复性良好。直接用酶标记单克隆抗体有简便、廉价、生物活性高等优点。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

减蛋综合征病毒单克隆抗体的生物学特性鉴定

该研究在建立分泌减蛋综合征病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的基础上，鉴定了１０株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体（４Ｂ１，１Ｄ４，２Ｄ６，３Ｄ６，２Ａ１，３Ａ５，３Ｃ６，３Ｃ１，１Ｂ３和２Ｃ５）和生物学活性，这１０株杂交瘤细胞分泌的抗体有高度的特异性，只特异地作用于减蛋综合征病毒，微量血凝抑制试验（ＨＩ）发现４Ｂ１，３Ｃ１，２Ｃ５和３Ｃ６有血凝抑制活性，腹水效价分别为２４（ｌｏｇ２），４（ｌｏｇ２），７（ｌ     

鸡大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研制

将菌毛化的大肠杆菌C600（fim^ ）经0.3%甲醛灭活后作为免疫原，经淋巴细胞杂交瘤技术，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选获得1F4－1和2C32株抗F1菌毛a或b因子抗原单抗和1株抗F1c因子抗原单抗，它们均为IgG1。免疫印迹试验结果表明：3株单抗均能同禽大肠杆菌1型菌毛反应，识别分子质量为17ku左右的菌毛蛋白。同时对沙门氏菌及猪源大肠杆菌进行检测，结果均无交叉反应性，说明禽病原性大肠杆菌F1菌毛与沙门氏菌1型菌毛及猪大肠杆菌粘附素之间存在很大差异。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．