干扰素-α抑制高转移潜能人肝癌裸鼠肝细胞生长因子及血管内皮生长因子的表达

目的 观察干扰素-α(IFN-α)对高转移潜能人肝癌裸鼠模型中血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)mRNA表达的影响.方法 应用绿色荧光蛋白转染的人高转移肝癌细胞株HCC-LM3建立高转移潜能人肝癌裸鼠模型LCI-D20,种植后第2天开始分别使用IFN-α 1.5×104 U/(kg·d)(治疗组,n=12)或生理盐水(对照组,n=12)皮下注射,28 d后处死裸鼠,比较肝脏肿瘤的大小和肝内转移,免疫组织化学检测肿瘤微血管密度(MVD),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肿瘤HGF和VEGF表达的变化.结果治疗组、对照组的肝内肿瘤大小分别为(0.11±0.03)cm3、(0.99±0.37)cm3(P<0.05);肝内转移率分别为33.3%(4/12)、83.3%(10/12)(P<0.05);肝内转移数目分别为0.67±0.31个比1.91±0.43个(P<0.05);肿瘤内MVD分别为3.19±0.52、4.85±0.72(P<0.05);肿瘤VEGF mRNA表达(-△CT)分别为-8.16±0.54、-6.95±0.86(P<0.05);HGF mRNA表达分别为-11.62±0.63、-10.56±0.48(P<0.05).结论 IFN-α对HGF及VEGF表达的抑制可能是其抗肿瘤血管生成作用、抑制肿瘤生长转移作用的机制之一.     

小剂量阿司匹林协同干扰素-α抑制肝细胞肝癌生长转移的实验研究

目的 探讨小剂量阿司匹林协同干扰素-α(IFN-α)抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)生长转移的作用及机制.方法 培养具有肺转移潜能的人MHCC97L肝癌细胞.将MHCC97L肝癌组织块种植于BALB/c nu/nu雄性裸鼠肝脏,建立人肝癌裸鼠原位模型.以不同剂量组合的阿司匹林和IFN-α作用于荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积,计算肺转移灶数目及肺转移率.用MTT及明胶酶谱实验检测阿司匹林对MHCC97L细胞增殖及金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)活性的影响.用Western Blot及ELISA检测细胞及血清MMP-2及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白水平.结果 对照组肿瘤体积为(3.12±0.85)cm3,肺转移率为66.7％.大剂量阿司匹林[45 mg/(kg· d)]治疗组肿瘤体积为(1.89±0.88)cm3 (P＞0.05),肺转移率为58.3％ (P＞0.05).而大剂量IFN-α[1.5×107/(kg·d)]治疗组、大剂量IFN-α+大剂量阿司匹林治疗组、小剂量IFN-α [7.5×106/(kg·d)]+小剂量阿司匹林15 mg/(kg· d)]治疗组肿瘤体积分别为(0.69±0.40)cm3、(0.55±0.31)cm3、(0.40±0.43)cm3,均显著低于对照组(P＜0.05),肺转移率均为0(P＜0.05).2 mmol/L阿司匹林对MHCC97L细胞增殖无显著影响(P＞0.05),但可抑制其MMP-2的活性及VEGF的水平.小剂量IFN-α+小剂量阿司匹林治疗组裸鼠血清MMP-2及VEGF显著降低(P＜0.05).结论 小剂量阿司匹林可协同IFN-α抑制HCC生长转移,抑制MMP-2和VEGF的活性和表达是其重要作用机制之一.     

α-干扰素联合TACE治疗晚期肝细胞性肝癌

目的：探讨α-干扰素（IFN-α）联合经导管肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗晚期肝癌的疗效及预后价值。方法：前瞻性分析聊城市人民医院普通外科2006年8月—2009年8月收治的138例晚期肝细胞性肝癌患者的临床资料。其中TACE组72例,联合治疗组66例,分组方式为随机分组。结果：治疗后第2周2组间血清AFP水平差异无统计学意义（P〉0.05）,但治疗后第4周及第8周联合治疗组血清AFP下降程度较TACE组明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。TACE组疾病控制率62.5%,联合治疗组疾病控制率78.8%,两者相比较差异有统计学意义（χ2=4.38,P〈0.05）。完成治疗后1、2、3、4个月和〉4个月TACE组新发肿瘤率分别为6.9%、26.4%、33.3%、18.1%和11.1%;联合治疗组新发肿瘤率分别为3.0%、7.6%、19.7%、37.9%和21.2%。2组总体比较差异有统计学意义（χ2=17.47,P〈0.01）;2组治疗后3个月内新发肿瘤率比较,差异有统计学意义（χ2=16.25,P〈0.01）;2组治疗后〉3个月新发肿瘤率比较,差异无统计学意义（χ2=3.29,P〉0.05）。138例患者均获得随访,TACE组治疗后平均生存时间（238.48±15.65）d,联合治疗组治疗后平均生存时间（350.19±22.37）d,两者相比较差异有统计学意义（χ2=14.20,P〈0.01）。结论：TACE联合IFN-α治疗晚期肝细胞性肝癌有助于延缓患者治疗早期新发肿瘤的发生,延长患者生存时间,改善患者的预后。     

干扰素α抑制乙肝病毒X蛋白诱导的肝癌转移的分子机制研究

目的 研究干扰素α抑制乙肝病毒X蛋白诱导肝细胞癌侵袭转移的分子机制,为肝癌的临床治疗研究提供实验依据.方法 采用脂质体法构建pcDNA 3.1-HBx质粒转染CCL13细胞,将CCL13/HBx细胞与干扰素-α共培养,并用RT-PCR、Western Blot从mRNA和蛋白质水平检测CCL13/pcDNA3.1、CCL13/HBx、CCL13/HBx-INF-α中p202、PTEN基因表达,Transwell实验检测CCL13/pcDNA3.1、CCL13/HBx、CCL13/HBx-INF-α细胞侵袭能力.结果 CCL13/HBx细胞中p202、PTEN基因的mRNA及蛋白表达水平明显低于CCL13/pcDNA3.1细胞和CCL13/HBx-INF-α细胞(P＜0.05),而CCL13/pcDNA3.1细胞与CCL13/HBx-INF-α细胞间表达差异无统计学意义(P＞0.05).CCL13/HBx细胞通过Matrigel的细胞数[(37.2±3.8)个/HP]明显多于CCL13/pcDNA3.1[(6.4±1.2)个/HP,t=8.369,P＜0.05]和CCL13/HBx-INF-α细胞[(7.6±1.3)个/HP,t=7.256,P＜0.05],而CCL13/pcDNA3.1与CCL13/HBx-INF-α细胞间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 干扰素α可能通过上调乙肝病毒X蛋白所介导的p202基因、PTEN基因表达,抑制肝癌细胞的侵袭转移.     

靶向血管内皮细胞治疗肝癌的实验研究

目的 运用抗肝癌区血管内皮细胞的单克隆抗体进行抑癌实验。方法 通过建立裸小鼠人肝癌动物模型来进行,抑瘤实验。结果 抗肝癌区血管内皮细胞的单克隆抗体在肝癌动物模型的抑瘤裕有明显的抑瘤作用。结论 抗体在动物实验中明显的抑瘤作用,表明通过应用这种抗体可对肝癌进行以血管为靶向的生物治疗,从而为肝癌的治疗提供一种新的治疗方法。     

α—干扰素和全反式维甲酸对肝癌根治性切除术后复发转移？…

目的　研究α 干扰素 (IFN α)和全反式维甲酸 (ATRA)联合应用对肝癌根治性切除术后复发转移的抑制作用。方法　选用原位接种人肝癌裸鼠转移模型 ,于不同时间切除移植瘤后联合应用不同剂量的IFN α和ATRA ,治疗 5周后处死动物 ,测量复发瘤大小 ,观察转移情况。结果　 7d切除 ,对照组肺转移率、肝内复发瘤大小、播散灶数目分别为 10 0 %、(6 4.74± 9.0 5 )mm3、(2 .5 0±0 .85 )个 ,治疗组为 6 6 .7%、(2 .73± 1.76 )mm3(P <0 .0 1)、0个 (P <0 .0 1) ;10d切除 ,对照组肺转移率、肝内复发瘤大小、播散灶数目分别为 10 0 %、(3 2 2 3.93± 1.97)mm3、(34.2 0± 1.30 )个 ,治疗组为 5 0 % (P <0 .0 1)、(10 6 6 .70± 8.0 1)mm3、(3.6 0± 1.14)个。结论　联合应用IFN α和ATRA能抑制肝癌根治性切除术后的肝内复发、播散和转移。     

血管内皮细胞生长因子诱导肝癌转移的实验研究

目的　研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)与肝癌细胞转移的相互关系。方法　运用BodyenChamber膜侵袭培养系统培养VEGF肝癌细胞株HepG     

聚乙二醇化干扰素-α联合卡培他滨对肝癌生长作用的影响

目的探讨联合应用聚乙二醇化干扰素-α与肿瘤选择性化疗药卡培他滨抑制肝癌生长的作用。方法用30只LCI-D20人肝癌高转移裸鼠模型,随机分为对照组、聚乙二醇化干扰素- α组(1．875μg／周)、卡培他滨组(每日2．10mmol／kg体重)和联合用药组。用药4周后,观察裸鼠肝内移植瘤体积变化及肝内转移情况,检测血常规、肝肾功能和体重变化。结果对照组、聚乙二醇化干扰索-α组、卡培他滨组和联合用药组肿瘤体积分别为(2 275±1 337)、(336±220)、(889±614) 和(26±56)mm~3。与对照组相比,用药组肿瘤体积明显缩小,联合用药组尤为突出(P<0．01)。各用药组血常规、肝功能和体重的变化差异无统计学意义(P>0．05)。结论聚乙二醇化干扰素-α与卡培他滨联合应用能显著抑制LCI-D20裸鼠模型中肝移植瘤的生长和浸润,副作用不明显。     

小剂量阿司匹林协同干扰素-α诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的 探讨小剂量阿司匹林协同干扰素-α(IFN-α)诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用及机制.方法 体外培养的人肝癌BEL-7402细胞经IFN-α单独或联合小剂量阿司匹林处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况;流式细胞术分析不同组药物对BEL-7402细胞凋亡的影响,Western blot检测BEL-7402细胞凋亡相关蛋白表达的变化.结果 MTT法检测显示,与对照组相比,作用48 h时IFN-α组和阿司匹林组的肝癌细胞增殖率分别为82.45％±1.71％和83.22％±2.26％,联合用药组为69.84％±1.18％,联合用药组细胞增殖抑制率明显低于单独用药组(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,IFN-α组和阿司匹林组细胞凋亡率分别为14.78％±1.93％和14.00％±0.61％,联合用药组为21.68％±1.28％,明显高于单独用药组(P＜0.05).Western blot检测发现IFN-α及小剂量阿司匹林可促进caspase-3及caspase-9的表达,而二者联合应用时caspase-3及caspase-9亦被明显激活.进一步检测显示,IFN-α单独或联合阿司匹林可促进肝癌细胞促凋亡蛋白Bax的表达(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达未见明显变化(P＞0.05).结论 小剂量阿司匹林可协同IFN-α抑制BEL-7402细胞的增殖,通过激活caspase-3及caspase-9诱导肿瘤细胞凋亡,该作用可能与促凋亡蛋白Bax表达的增高有关.     

血清胰岛素样生长因子-Ⅱ、血管内皮生长因子、白细胞介素一Ⅱ和干扰素-γ水平在肝癌微波消融治疗前后的变化

目的 观察大鼠在肝癌微波消融治疗前后血清胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅱ、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-2和干扰素(IFN)-γ水平的变化.方法 80只SD大鼠,随机分4组,正常组除抽血检测外不做任何处理,其余3组行肝癌细胞种植,对照组尾动脉抽血检测,手术组行手术切除肿瘤,消融组消融肿瘤,ELISA法测定血清IGF-Ⅱ、VEGF、IL-2和IFN-γ水平并比较3周后4组间IGF-Ⅱ、VEGF、IL-2和IFN-γ水平的变化情况.结果 对照组第5周较第3周时血清IGF-Ⅱ[(1.93±0.45) μg/L比(1.16±0.21)μg/L]和VEGF[(395.72±55.28)ng/L比(248.43±1.71)ng/L,P<0.05].经手术治疗或微波消融治疗后血清IGF-Ⅱ(0.65±0.18比0.73±0.16)和VEGF[(129.35±51.46)ng/L比(135.63±33.37)ng/L]水平明显下降,而IL-2、IFN-γ水平则明显升高.结论 IGF-Ⅱ可直接或通过增加VEGF的合成促进肿瘤血管形成,可作为原发性肝癌的诊断、判断愈后与跟踪随访的重要指标.微波消融治疗肝癌是一种有效的方法.     

α-干扰素对膀胱癌细胞多药耐药性逆转的研究

目的研究α干扰素（αＩＦＮ）对膀胱癌多药耐药性的逆转作用。方法应用ＭＴＴ法检测阿霉素（ＡＤＭ）的细胞杀伤作用。荧光法检测细胞内阿霉素浓度和斑点杂交法检测ｍｄｒ１ｍＲＮＡ相对含量。结果５００ＩＵ／ｍｌαＩＦＮ能明显增强阿霉素对耐药细胞ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的杀伤作用,但不能增强阿霉素对敏感细胞ＢＩＵ８７的杀伤作用;αＩＦＮ能增加阿霉素在ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞内的积聚,但不改变ｍｄｒ１ｍＲＮＡ在细胞内表达量。结论αＩＦＮ对膀胱癌细胞多药耐药性具有逆转作用,其机制与αＩＦＮ增加细胞内抗癌药物浓度有关,与增加ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达量无关。     

携带γ-干扰素的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ治疗肝癌

目的 观察鼠源γ-干扰素(mIFN-γ)基因插入溶瘤腺病毒CNHK300后,该病毒对不同的肝癌细胞株及其裸鼠移植瘤的增殖力及特异性杀伤作用.方法 用噻唑蓝(MTT)法观察CNHK300-mIFN-γ(简称CNHK300-Mγ)对人正常肝细胞WRL-68、人肝癌细胞SMMC-7721、HepG Ⅱ的特异性杀伤作用.裸鼠肝癌SMMC-7721模型观察CNHK300-Mγ、CNHK300和ONYX-015的抗肿瘤疗效,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中mIFN-γ的表达量.结果 CNHK300-Mγ能选择性地杀伤肝癌细胞,在肿瘤细胞中半数抑制浓度(IC50)＜1,而在正常肝细胞中为370.肝癌模型中,CNHK300-Mγ治疗组能表达mIFN-γ,治疗结束后第3天和第7天血清中的mIFN-γ分别为(231±101)ng/L和(1733±191)ng/L.CNHK300-Mγ具有明显的肿瘤生长抑制作用,与CNHK300、ONYX2015和对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 mIFN-γ的插入使病毒对肿瘤细胞的杀伤能力提高,CNHK300-Mγ具有明显的肿瘤生长抑制作用.

Abstract：

Objective To study the effect of mouse interferon-γ (mIFN-γ) insertion on the selective replication and cytotoxicity of a tumor-specific oncolytic adenovirus CNHK300 in hepatocellular carcinoma (HCC) cells and HCC xenografts. Methods The cytotoxicity of CNHK300-mIFN-γ (CNHK300-Mγ) was examined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) colorimetric assay in normal and HCC cells.Healthy nude BALB/C mice were injected with the SMMC-7221 cells. Forty mice with tumors of 5-8 mm in diameter were randomly divided into 4 groups of 10 mice: CNHK300-Mγ group (CNHK300-Mγ was injected into the tumor once every other day for 5 times) , CNHK300 group ( CNHK300 was injected) , ONYX-015 group (ONYX-015 was injected) , and control group (diluent of virus was injected). Seven, 14, 21, 28, 35, and 42 days after the initial injection the size of tumor was examined ( Tumor volume was estimated as a × b2 × 0. 5 , where a and b were the maximal and minimal diameters, respectively). Forty-eighth after the finish of the whole course of treatment, the mice were killed. Twenty-four mice with the same tumors were randomly divided into 3 groups of 8 mice: CNHK300-Mr group, CHNK300 group and control group.The mice were killed in half, 3, 7 days after the last injection. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the expression of mIFN-γ in blood. Results CNHK300-Mγ could selectively kill tumor cell lines, whose 50% inhibitory concentration (IC50) was under 1 in tumor cells and 370 in normal liver cells. ELISA showed that the expression of mIFN-γ in the blood of the CNHK300-Mγ group was (231 ± 101) ng/L or (1733 ± 191) ng/L in 3 days or 7 days after virus infection, while no mIFN-γ could be detected in CHNK300 group and control group. The tumor size in the CNHK300-Mr group was significantly smaller than in the CNHK300 group, ONYX-015 group, and control group (P＜0. 05). Conclusion Being capable of specifically killed HCC cells and mediating effective expression of therapeutic gene in vivo, CNHK300-Mγ holds a splendid future as a potential antitumor agent.     

FAM联合化疗和α-干扰素联用抑制肝癌生长的研究

我们利用人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型 ,研究α 干扰素与ＦＡＭ 5 氟脲嘧啶 (5 Ｆｕ) +丝列霉素 (ＭＭＣ) +阿霉素(ＡＤＭ) ,联合化疗方案应用对肝癌生长的影响。一、材料与方法1 .实验材料 :人肝细胞癌Ｈ91 0 1瘤株由厦门大学抗癌研究中心提供。ＢＡＬＣ/Ｃ裸小鼠 5～ 6周龄 ,雌性 ,体重1 8～ 2 0 ｇ ,由厦门大学抗癌研究中心提供 ,饲养于ＳＰＦ级无菌饲养室。脱氧核苷末端转移酶介导的缺口末端标记法(ＴＵＮＥＬ法 )原位细胞凋亡检测试剂盒采用德国宝灵曼公司的ＩｎＳｉｔｕＣｅｌｌＤｅ ｔｅｃｔｉｏｎＫｉｐ,ＡＰ试剂盒。2 .人肝细胞癌裸鼠…     

卡培他滨联合α-干扰素治疗转移性肾癌

肾细胞癌对传统的细胞毒性化疗药物不敏感。曾有人报道5-氟尿嘧啶(5-FU)持续静脉滴注有8％～10％的反应率，细胞因子的反应率为10％～15％，但约1／3的转移性患者在接受5-FU与细胞因子的联合治疗后，能达到相对较长时间的客观缓解。然5-FU毒副作用较大。文献报道，卡培他滨(希罗达)单药治疗转移性肾癌已被证实有一定疗效。近年，我们用卡培他滨联合α-干扰素治疗转移性肾细胞癌患者21例，现对其疗效与毒性进行探讨。     

α-干扰素和COX-2抑制剂对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用研究

目的研究α-干扰素和环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布和α-干扰素处理对肝癌细胞增殖的影响;通过荧光显微镜检测细胞凋亡。结果实验组与对照组相比,能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,两种药物高浓度联合作用48 h后,对肝癌细胞的生长抑制率可达92.44%±0.98%。α-干扰素和塞来昔布对肝癌细胞的增殖抑制具有协同作用。荧光显微镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。结论 COX-2抑制剂塞来昔布和α-干扰素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖有协同抑制作用,同时能诱导其凋亡,并且呈剂量和时间依赖性,这提示α-干扰素和COX-2抑制剂塞来昔布对HCC的预防和治疗可能有积极意义。     

α-干扰素和全反式维甲酸对肝癌根治性切除术后复发转移的干预作用

目的 研究α-干扰素(IFN-α)和全反式维甲酸 (ATRA) 联合应用对肝癌根治性切除术后复发转移的抑制作用.方法 选用原位接种人肝癌裸鼠转移模型,于不同时间切除移植瘤后联合应用不同剂量的IFN-α和ATRA,治疗5周后处死动物,测量复发瘤大小,观察转移情况.结果 7d切除,对照组肺转移率、肝内复发瘤大小、播散灶数目分别为100%、(64.74±9.05)mm3、(2.50±0.85)个,治疗组为66.7%、(2.73±1.76)mm3 (P＜0.01)、0个(P＜0.01);10d切除,对照组肺转移率、肝内复发瘤大小、播散灶数目分别为100%、(3223.93±1.97)mm3、 (34.20±1.30)个,治疗组为50% (P＜0.01)、(1066.70±8.01)mm3、(3.60±1.14)个.结论 联合应用IFN-α和ATRA能抑制肝癌根治性切除术后的肝内复发、播散和转移.     

干扰素-α对CCL13/HBx细胞生长及侵袭转移潜能的抑制作用

目的 观察干扰素-α对恶性转化的CCL13/HBx细胞的生长和侵袭转移潜能的抑制效应.方法 采脂质体法将pcDNA3.1-HBx质粒转入CCL13细胞,将CCL13/HBx细胞分别在普通条件下培养或与干扰素-α共培养,采用绘制生长曲线、平板集落形成实验、划痕愈合实验、体外侵袭力、体内裸鼠成瘤实验分别检测CCL13/HBx、INF-α-CCL13/HBx、CCL13/PcDNA3.1细胞在体内、体外的生长及运动迁移能力的差异.结果 pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞后在该细胞中稳定表达,CCL13/HBx细胞生长明显快于INF-α-CCL13/HBx和CCL13/PcDNA3.1细胞,克隆生成率明显增高(31.2%比10.8%比12.4%,P<0.05),划痕愈合能力明显增强,穿过人工基底膜的细胞数明显增多[(41.6±3.1)/HP比(7.4±1.2)/HP比(9.2±1.6)/HP,P<0.05].干扰素-α治疗组CCL13/HBx细胞裸鼠皮下成瘤体积减小[(2.4±0.2)cm3比(4.2±0.3)cm3,P<0.05].结论 CCL13/HBx细胞较CCL13/pcDNA3.1细胞具有更强的生长和侵袭转移潜能,干扰素-α能明显抑制HBx蛋白所诱导的细胞恶性表型.     

微波治疗仪联合α-干扰素栓治疗女性生殖器尖锐湿疣疗效观察

目的探讨微波治疗仪联合α-干扰素栓(奥平栓)治疗尖锐湿疣的效果。方法选取68例尖锐湿疣患者应用微波治疗仪联合奥平栓治疗为治疗组，50例尖锐湿疣患者单独采用微波治疗为对照组，两组疗效进行比较。结果微波治疗仪联合奥平栓治疗尖锐湿疣治愈率明显高于对照组(P＜0．01)。结论微波治疗仪联合奥平栓是治疗女性生殖器尖锐湿疣的理想方法。     

围介入手术期联合应用IFN-α及ATRA治疗肝癌的机制探讨

目的 在围介入治疗间期,探讨一种疗效好、副作用少的辅助治疗方法 .方法 建立肝癌细胞CBRH7919的大鼠动物模型,选22只接种瘤块组织的Wistar大鼠,3周瘤块形成后全部给予肝动脉结扎.分为2组:(1)对照组(12只):给予腹腔注射等量生理盐水,(2)干扰素-α(IFN-α)和全反式维甲酸(ATRA)联合高剂量组(10只):腹腔给予IFN-α(1000 000 U·kg~(-1)·qod~(-1))隔天1次,腹腔给予ATRA(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))1次/d,于肝动脉结扎后第1天开始用药,治疗10 d后处死动物,测肿瘤组织中转移相关基因表达水平、蛋白表达水平、肿瘤微血管密度及肿瘤细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测肿瘤组织中转移相关基因VEGF、bFGF的mRNA表达,两组相比,IFN-α联合ATRA处理组的肿瘤组织中bFGF和VEGF表达显著下降(P＜0.05).免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF的蛋白表达水平与RT-PCR结果 一致,IFN-α和ATRA联合处理组的肿瘤组织中bFGF和VEGF下降明显,bFGF表达很弱,而VEGF几乎不表达.ELISA法检测血清中VEGF水平,对照组血清VEGF浓度为(92.5±13.9)pg/ml,IFN-α和ATRA联合处理组血清VEGF浓度为(69.85±20.4)pg/ml,两者相比有统计学差异(P＜0.05).免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),对照组的肿瘤组织中可见到较多的新生血管,而在IFN-α和ATRA联合处理组的肿瘤组织中新生血管明显减少.MVD在对照组为(114±18)/HP,IFN-α和ATRA联合处理组为(66±5)/HP(P＜0.01).肿瘤细胞凋亡的检测,两组相比,IFN-α和ATRA联合处理组,肿瘤组织出现较大面积的坏死,流式细胞仪检测发现坏死细胞(Annexin V~-PI~+)显著增多,而早期凋亡细胞比例并明显增高.TUNEL法镜下观察到凋亡细胞的细胞核被染成蓝紫色,染色质分布不均.对照组和治疗组的凋亡指数分别为(3.74±1.57)%、(12.34±4.78)%,差异具有显著性(P＜0.05).结论 联合应用IFN-α及ATRA可以抑制肿瘤新生血管形成,进而抑制肝癌生长和转移,提示两种作为抗肿瘤血管形成的药物在介入治疗间期的早期联合应用,在临床防治肝癌术后的复发转移中有一定的作用.