HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用

目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细茵表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westem blot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产，Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细茵中表达，纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细茵中生产，并能成功地用于肝癌的早期诊断。     

人HCCR蛋白表达载体的构建、表达及其蛋白纯化

目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOFMS)鉴定表达产物。结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Westernblot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段。结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化。     

KISS-1、Ezrin蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨KISS-1、Ezrin蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法分别对21例正常胃黏膜组织、23例癌旁不典型增生组织、45例胃癌组织中KISS-1、Ezrin蛋白的表达进行检测。结果正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中KISS-1蛋白的阳性表达率依次递减,经两两相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;正常胃黏膜、癌旁非典型增生和胃癌组织中Ezrin蛋白的阳性表达率依次递增,且两两相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;相关性分析发现KISS-1、Ezrin蛋白在胃癌中的表达具有显著的负相关性（r=-0.537,P〈0.01）。结论 KISS-1、Ezrin蛋白参与胃癌的发生发展过程,且可能起协同作用。     

FAF1、Livin蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌患者胃癌组织中FAF1、Livin蛋白的表达变化及其临床意义.方法 用免疫组化染色SP法检测53例胃癌患者病变组织及50例浅表性胃炎患者正常胃黏膜组织中FAF1、Livin蛋白的表达水平,并进行相关性分析.结果 胃癌组织中FAF1蛋白表达率（28.30％,15/53）明显低于正常胃黏膜组织（84.00％,42/50） （P ＜0.05）;Livin蛋白表达率（73.58％,39/53）明显高于正常胃黏膜组织14.00％ （7/50） （P ＜0.05）;在胃癌组织中FAF1蛋白表达与胃癌组织学分化程度有关（P＜0.05）;Livin蛋白表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、分化程度、癌细胞转移及TNM分期有关（P＜0.05）;FAF1、Livin蛋白在胃癌组织中的表达水平无相关性（r,=0.307,P＞0.05）.结论 FAF1蛋白的表达缺失可能参与胃癌的形成并抑制组织细胞的分化.胃癌的发生、发展、浸润、转移可能与Livin蛋白异常高表达有关.联合检测FAF1、Livin蛋白为胃癌的早期诊断及推断演进方向提供重要依据.     

SMURF1蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：研究SMAD泛素化调节因子1（SMURF1）蛋白在人胃癌组织中的表达及临床意义。方珐：采用免疫组化SP法检测68例胃癌及对应癌旁组织中SMURF1蛋白表达情况,分析SMURFl蛋白表达与胃癌不同临床病理特征的相关性。结果：SMURFl蛋白在胃癌组织中的阳性率为76．5％（52／68）,而在对应癌旁组织中的阳性率仅为26．5％（18／68）,差异具有统计学意义（χ2=34．029,P=0．000）。胃癌组织中SMURFl蛋白表达与浸润深度（χ2=5．461,P=0．019）、淋巴结转移（χ2=9．141,P=0．002）和肿瘤分期（χ2=8．380,P=0．004）显著相关,而与性别、年龄和肿瘤大小无明显相关。结论：胃癌组织中SMURFl蛋白异常高表达,其高表达与胃癌侵袭转移密切相关,提示SMURFl在胃癌发生、发展中可能发挥重要作用。     

ING1基因蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨p33^ING1基因蛋白与胃癌发生及病理生物学关系及临床意义。方法：对71例胃癌、21例胃粘膜不典型增生、18例对照组,应用Envision免疫组化法,检测p33^NIG1。结果：粘膜不典型增生组及对照组中p33^NIG1均阳性表达,而胃癌中表达62.0%(44/71)有明显下降,与前两组之间有显著差异（P＜0.01);胃癌中p33^ING1表达与肿瘤的浸润、淋巴结的转移及分有关（P＜0.01)。结论：p33^ING1是抑癌基因,在胃癌中表达下降,对胃癌发生、发展可能起重要作用,p33^ING1与p53野生型基因互相协同、依赖,抑制细胞生长、促进凋亡。p33^ING1的水平,对p53介导的基因治疗尤为重要,应予检测。     

SphK1蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的：检测鞘氨醇激酶1型（SphK1）在胃癌组织中的表达情况并分析其临床意义。方法：采用免疫组织化学染色检测58例胃癌及对应癌旁组织中SphK1蛋白的表达情况,分析SphK1蛋白表达与胃癌不同临床病例参数之间的相关性。结果：SphK1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率与对应癌旁组织中SphK1蛋白的阳性表达率比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。胃癌组织中SphK1蛋白表达与浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关。结论：胃癌组织中SphK1蛋白高表达,其高表达与恶性临床病理参数密切相关,提示SphK1在胃癌发生发展中可能发挥重要作用。     

ING1基因蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨p33ING1基因蛋白与胃癌发生及病理生物学关系及临床意义.方法对71例胃癌、12例胃粘膜不典型增生、18例对照组,应用Envision免疫组化法,检测p33ING1.结果粘膜不典型增生组及对照组中p33ING1均阳性表达,而胃癌中表达62.0%(44/71)有明显下降,与前两组之间有显著差异(P＜0.01);胃癌中p33ING1表达与肿瘤的浸润、淋巴结的转移及分化有关(P＜0.01).结论p33ING1是抑癌基因,在胃癌中表达下降,对胃癌发生、发展可能起重要作用,p33ING1与p53野生型基因互相协同、依赖,抑制细胞生长、促进凋亡.p33ING1的水平,对p53介导的基因治疗尤为重要,应予检测.     

N-Ras、pERK1/2在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

本研究检测了非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)N-Ras和pERK1/2(extracellular signal regulated kinase,ERK)表达水平,探讨其临床意义.     

人过氧化物氧化还原酶-1在胃癌中的表达情况及其临床意义

目的 探讨人过氧化物氧化还原酶-1（PRDX1）在胃癌中的表达情况及其与胃癌临床病理特征和预后之间的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测21例胃癌与相应癌旁组织中PRDX1 mRNA和蛋白的表达水平,并应用免疫组化法检测105例胃癌和癌旁组织中PRDX1蛋白的表达水平,以分析其表达情况与临床病理特征及预后的关系。结果 qRT-PCR和Western Blot检测发现,PRDX1在胃癌组织中的mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组织化学检测结果表明,PRDX1蛋白水平在胃癌组织中高于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期间PRDX1蛋白表达水平差异有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示,PRDX1蛋白的过表达与总生存时间及无病生存时间较短相关。COX多因素分析显示,PRDX1是胃癌独立的预后影响因子。结论 胃癌组织中PRDX1蛋白的表达明显升高,PRDX1蛋白高表达可能促进了胃癌的发生和发展,可能做为胃癌的早期诊断及预后评估的新型生物学指标。     

CIAPIN1和P-gp蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)和P糖蛋白(P-gp)蛋白在胃癌组织中的表达,分析二者对胃癌诊断的临床意义。方法回顾性分析2017年8月至2019年3月于本院行手术切除治疗的60例胃癌患者的临床资料,分析CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌及癌旁组织中的阳性率,分析临床分期、淋巴结转移情况对胃癌组织CIAPIN1、P-gp蛋白表达的影响。结果CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织中的阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期,淋巴结转移患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于未转移,差异有统计学意义(P<0.05);经线性回归分析检验显示,CIAPIN1、P-gp蛋白与胃癌临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织与癌旁组织表达存在差异,其表达与临床分期、淋巴结转移情况相关,CIAPIN1、P-gp蛋白表达对临床分期、淋巴结转移的诊断具有一定意义。     

IGF-1R在胃癌组织中的表达及其与浸润转移和预后的关系

目的 探讨胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）在胃癌组织中的表达及其与胃癌浸润、转移的关系.方法 应用免疫组化SP法检测436例胃癌组织石蜡标本及92例癌旁非肿瘤胃黏膜组织标本中IGF-1R表达.结果 IGF-1R在胃癌组织表达明显高于癌旁非肿瘤胃黏膜组织,436例胃癌组织中有385例 IGF-1R蛋白表达阳性,216例高表达,IGF-1R蛋白的阳性表达与患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、Lauren分型、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关.I、II和 III期胃癌患者中IGF-1R高表达者5年生存率明显低于IGF-1R低表达者,IV期胃癌患者的5年生存率与IGF-1R表达无关,IGF-1R表达、浸润深度、淋巴结和远处转移和TNM分期为胃癌患者独立的预后因素.结论 胃癌组织IGF-1R表达与淋巴结和远处转移及预后显著相关,IGF-1R可能成为一个预测肿瘤进展、浸润和转移的分子标记物.     

胃癌组织中B7-H1的表达及临床意义研究

目的检测人体胃癌组织中B7-H1的表达,探讨其与患者临床病理特征的关系及对预后的影响。方法采用免疫组化染色法检测胃癌组织中B7-H1的表达,分析其在胃癌组织中的阳性表达率与患者临床病理特征之间的关系,并绘制患者术后生存曲线,评价B7-H1表达对预后的影响。结果65例胃癌组织中癌细胞的细胞膜、细胞质以及部分肿瘤组织浸润的淋巴管及淋巴细胞中均有检测到B7-H1的阳性表达,阳性率为36.9%。有淋巴结转移或脉管内有癌栓的患者B7-H1阳性率较高（均P＜0.05）。B7-H1阳性表达的胃癌患者术后5年生存率（25.0%）低于阴性表达的患者（56.1%）（P＜0.05）。结论B7-H1阳性表达的胃癌患者易发生淋巴结转移,预后较差,B7-H1可作为评价胃癌患者预后的指标之一。     

FOXJ1在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的相关性

目的 观察FOXJ1在胃癌组织中的表达水平,探讨其与患者的临床病理特征和预后的相关性,为胃癌的诊断和治疗提供参考.方法 选取2010年3月至2012年6月在我院就诊并进行手术切除的胃癌患者86例,采用免疫组织化学法检测FOXJ1在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并统计分析FOXJ1在胃癌组织中的表达水平与临床病理特征和预后的相关性.结果 胃癌组织免疫组化结果显示FOXJ1表达阳性率(48.84%)低于癌旁组织(94.19%),两者比较差异具有统计学意义(P<0.05);TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)期、浸润深度(T3+T4)、有淋巴结转移、有远处转移的患者FOXJ1表达阳性率降低(P<0.05);FOXJ1表达阴性患者3年后病死率明显高于阳性患者,两者比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 胃癌组织中FOXJ1表达水平降低,TNM分期越高、浸润深度越深、有淋巴结转移、有远处转移的患者FOXJ1表达水平更低,FOXJ1表达阴阳性患者3年病死率高于阳性患者.     

siRNA干扰人宫颈癌基因(HCCR)的表达对胰腺癌PANC1细胞增殖?凋亡和侵袭的影响

目的:建立稳定转染人宫颈癌癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)siRNA真核表达质粒的人胰腺癌PANC1细胞株,探讨siRNA干扰HCCR的表达后对人胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法:通过脂质体转染法将含HCCRsiRNA的真核表达质粒pGCsi-HCCR稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1,抗生素G418筛选获得稳转细胞株;Western blot检测PANC1细胞中HCCR的表达,同时检测肿瘤相关基因p53蛋白表达的变化;流式细胞仪检测PANC1细胞的细胞周期和凋亡率变化;MTT比色法检测siRNA干扰后对PANC1细胞增殖能力的影响:Transwell侵袭实验观察siRNA干扰后对PANC1细胞侵袭能力的影响.结果:Western blot证实siRNA稳转组的PANC1细胞株和空载体稳转组比较HCCR蛋白表达水平下调,稳转细胞株建立成功.siRNA稳转组p53蛋白表达下降.siRNA稳转组的S期细胞数目减少而G0/G1期细胞数目增加,细胞凋亡增加.MTT结果显示siRNA稳转组1和稳转组2细胞吸光度分别为空载体组细胞的0.65倍和0.68倍,细胞增殖能力下降.Transwell侵袭实验显示siRNA稳转组细胞和空载体组细胞穿膜数分别为24.4±9.9和49.1±15.4(P＜0.01),稳转组细胞侵袭能力下降.结论:siRNA干扰HCCR的表达后能抑制胰腺癌PANC1细胞增殖和侵袭,促进其凋亡.     

Nrf-2与HO-1在胃癌组织中的表达及意义

【摘要】目的 通过检测核因子E2相关因子（Nrf-2）、血红素加氧酶1（HO-1）在胃粘膜标本组织中的表达情况,研究二者在胃癌发生、发展以及早期胃癌诊断中的意义和作用。方法 通过免疫组化EnVision法检测122例Nrf-2、HO-1在胃粘膜标本组织中的表达情况,分析 Nrf-2、HO-1在胃粘膜组织各个病变期彼此间的关系,以及二者与胃癌各临床病理资料因子相应的关系。结果 Nrf-2蛋白在正常胃粘膜组与重度不典型增生组、胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;肠上皮化生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;轻 中度不典型增生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;而其余各胃粘膜样本组之间相互对照比较,差异无统计学意义（P＜0.05）。HO-1蛋白在正常胃粘膜组与重度不典型增生组、胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;肠上皮化生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;轻中度不典型增生组与胃癌组对照比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;而其余各胃粘膜样本组之间相互对照比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。Nrf 2、HO-1蛋白分别在年龄、性别、肿瘤大小、分化程度中比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;在肿瘤侵润深度、TNM分期、淋巴结转移中比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Nrf-2、HO-1的高表达对胃癌的发生、发展可能有重要作用,若将二者进行联合检测,对胃癌高危人群的初筛、早期胃癌的诊断和预后的判断可能有重要的意义。同时二者也将有可能成为胃癌化学预防以及治疗的新靶点。     

人宫颈癌致癌基因的原核表达与多克隆抗体制备

目的构建人宫颈癌致癌基因HCCR-1167-360片段的重组质粒,在原核细胞中表达并鉴定。方法从培养的人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,经RT-PCR扩增出HCCR-1167-360的cDNA片段,将其克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,将测序正确的HCCR-1167-360基因连接到pET30a(+)表达载体中,IPTG诱导在BL21中进行表达,用SDS-PAGE检测表达产物。采用初步纯化和割胶纯化方法,获得较纯的重组蛋白,采用弗氏佐剂方法免疫兔子,收获多克隆抗体,用Wastern blot鉴定重组蛋白的免疫原性。结果经测序证明获得了HCCR-1167-360基因片段。SDS-PAGE分析,HCCR-1167-360在BL21中获得表达,其相对分子质量为26kD左右,主要以包涵体形式存在。免疫兔子获得了HCCR-1167-360多克隆抗体,经Wastern blot检测结果表明获得了特异性的多克隆抗体。结论获得具有抗原性的HCCR-1167-360原核表达蛋白。