大肠杆菌转录调控因子oxyR与抗氧化基因ahpCF、katEG的协同作用

目的探讨大肠杆菌转录调控因子oxyR与抗氧化基因ahpCF、katEG在调控内源过氧化氢(H_2O_2)水平及生长繁殖中的作用。方法荧光法检测大肠杆菌内源H_2O_2,采用以氯化铈做特异染色剂的透射电子显微镜法和AR做染料的荧光分光光度法检测内源H_2O_2的数量变化。结果突变体菌株JI374中ahpCF基因的缺失导致内源H_2O_2积累减少,其生长速度显著提高。与此相反的是,katEG基因缺失的突变体菌株JI372和ahpCF、oxyR基因双突变菌株LC74中,内源H_2O_2水平上升,抑制了细菌的生长速率。结论 oxyR调控下的抗氧化体系相关基因不仅能够调控细菌内源H_2O_2水平,ahpCF、katEG与转录调控因子oxyR之间具有协同作用,共同调控细菌的生长代谢与繁殖。同时,在ahp基因缺失条件下,kat基因起主导作用;在oxyR、ahpCF、katEG基因的协同作用中,oxyR应起决定性的作用。     

水杨酸和H2O2处理对鲜切青花菜抗氧化特性的影响

为研究外源水杨酸（salicylic acid,SA）和过氧化氢（H2O2）对鲜切青花菜的保鲜作用,用0.5 mmol/L SA和0.15 mmol/L H2O2分别浸泡处理10 min和5 min后,于20 ℃贮藏4 d期间测定抗氧化酶活性、活性氧水平、抗氧化物质含量和衰老生理指标等变化。结果发现,SA和H2O2处理可以有效保持鲜切青花菜感官品质;与贮藏期间的对照蒸馏水处理相比,SA处理的超氧化物歧化酶（SOD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）活性较大,过氧化氢酶（CAT）活性较小,超氧阴离子自由基（O2¯·）生成速率较小,H2O2含量较高,抗坏血酸（AsA）和类胡萝卜素（Car）含量较高,丙二醛（MDA）含量较低,叶绿素（Chl）和蛋白质（Pro）含量较高;H2O2处理的SOD、APX、POD和CTA活性较大,O2¯·生成速率和H2O2含量较低,AsA和Car含量较高,MDA含量较低,Chl和Pro含量较高;SA处理对这些抗氧化特性各指标的影响大于H2O2处理。结果表明,外源SA和H2O2处理可以有效延缓鲜切青花菜衰老和保持感官品质,作用机制与诱导改善抗氧化酶活性,减轻活性氧生物氧化有关;SA处理可抑制贮藏前期CAT活性,提高内源H2O2水平,0.5 mmol/L SA的保鲜效果好于0.15 mmol/L H2O2。     

H2O2参与冷激处理对番茄果实抗冷性及抗氧化酶活性的影响

本研究以“佳粉1号”番茄为试材,研究了H2O2参与冷激处理对番茄果实抗冷性及抗氧化酶活性的影响。结果表明冷激处理降低了果实的冷害发生率和冷害指数,诱导了冷藏初期番茄果实中H2O2含量的升高,延缓了丙二醛的增加,提高了低温下果实内过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性。用二甲基硫脲(DMTU)抑制内源H2O2能够削弱冷激处理所诱导的番茄果实冷害发生率的降低及对MDA累积的延缓作用,且CAT和APX的活性在冷藏初期受到抑制。结果表明,冷激处理可以有效提高番茄的耐冷性,减少低温对细胞膜系统的伤害,提高抗氧化酶的活性,而抑制内源H2O2后有效抑制了由冷激诱导的耐冷性的提高,说明冷藏初期内源H2O2参与了冷激介导番茄果实抗冷性的提高。     

纳米Fe2O3靶向鸡肉腐败菌光催化抑菌效能 特性研究

目的探索可见光下纳米Fe2O3对鸡肉腐败菌的光催化抑菌效能特性及机制。方法以Escherichia coli及鸡肉腐败菌Pseudomonas fluorescens和Macrococcus caseolyticus为受试菌株,可见光照为激发条件,研究纳米Fe2O3对细菌菌落数量和菌体脂质氧化程度的影响。结果纳米Fe2O3在可见光下能够有效抑制E.coli、P.fluorescens和M.caseolyticus生长繁殖,1.2 mmol/L的H2O2能够增强Fe2O3的光催化抑菌活性;当Fe2O3质量浓度为0.4 g/L时,对P.fluorescens和M.caseolyticus的抑菌作用效果最强;在光催化过程中,P.fluorescens和M.caseolyticu的脂质氧化值随着反应时间延长呈先升高后降低的趋势,在120 min分别达到最大值1.31nmol/mg(细胞干重)和2.14 nmol/mg(细胞干重)。结论可见光条件下,M.caseolyticus对光催化反应比P.fluorescens更加敏感,纳米Fe2O3先引起细菌体内脂质氧化,进而导致菌体细胞破裂而死亡。     

H_2O_2适应对双歧杆菌部分特性的影响及其遗传稳定性

研究H2O2适应对Bifidobacteriumbifidum KLDS2.0613生长特性、疏水性和降胆固醇能力等特性的影响,以及该菌株H2O2适应反应的遗传稳定性。研究结果表明,与未适应菌株相比,经3mg/LH2O2适应后的B.bifidum KLDS2.0613的生长特性和降胆固醇能力没有显著变化,而适应菌株的疏水性显著降低。H2O2适应菌株在厌氧条件下培养1代后,其耐受H2O2能力丧失。     

CodY在单核细胞增生李斯特菌抗氧化胁迫中的作用

目的：探究全局性转录调控因子CodY在单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）抗氧化应激中的作用。方法：利用H2O2对处于对数中期（OD600 nm=0.65）的Lm野生株EGDe和CodY缺失株EGDeDcodY进行氧化胁迫，比较两菌株氧化耐受能力、抗氧化应激物（过氧化氢酶（catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽（glutathione，GSH））活性或含量差异；通过随机扩增多态性DNA技术比较两菌株基因组模板稳定性（genomic template stability，GTS）；利用实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）检测两菌株抗氧化应激物编码基因以及DNA损伤诱导反应（SOS反应）重要基因的转录表达变化。结果：1）H2O2对EGDe的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度大约是EGDeDcodY的2 倍，当H2O2浓度超过20 mmol/L时，EGDeDcodY抑菌圈直径极显著大于EGDe（P≤0.01）。2）200 mmol/L H2O2完全抑制EGDeDcodY生长而EGDe生长速率则有所减慢。3）H2O2胁迫使EGDe和EGDeDcodY中CAT活力均下降，但转录水平并没有显著变化；SOD活力在两菌株内无明显变化，但转录表达在EGDe和EGDeDcodY中差异高度显著（P≤0.001）；值得注意的是，GSH编码基因的转录表达和其含量在EGDe和EGDeDcodY中变化趋势基本一致，随H2O2胁迫时间延长呈先显著下降后略微上升，而且与EGDe相比，GSH在EGDeDcodY中的转录表达水平具有极显著差异（P≤0.01）。4）EGDe和EGDeDcodY的GTS分别为93.1%和80.0%；real-time PCR显示EGDeDcodY中参与SOS反应的重要基因（recA、lexA、recR、lmo1302、lmo1975）转录表达受到高度显著抑制（P≤0.001），而EGDe中recA、lmo1302和lmo1975的转录表达被激活。结论：CodY缺失导致细菌在H2O2胁迫下的耐受能力和生长速率显著降低，GSH含量下降，GTS降低，参与SOS反应的重要基因表达受到显著抑制，表明CodY在Lm抵御氧化胁迫中发挥了重要的调控作用。     

致病菌快速检测管联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定即食食品中的大肠埃希氏菌O157:H7

目的 建立基于致病菌快速检测管技术联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)快速、高效、准确鉴定即时食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli, E. coli) O157:H7的方法。方法 选取改良胰蛋白胨大豆肉汤(modified tryptone soya broth, mTSB)为初筛培养基, 制作出针对即时食品中E. coli O157:H7的致病菌快速检测管, 初筛阳性结果采用MALDI-TOF MS技术鉴定。结果 5株常见E. coli O157:H7菌株均能特异检出, 而其他非E. coli O157:H7均未检出, 灵敏度可达51 CFU/mL; 通过对人工污染样品和自然样品检测, 鉴定结果和GB 4789.36—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》方法完全一致, 且检测效率提高了30%。结论 两种技术联合应用建立的鉴定即时食品中E. coli O157:H7的新方法, 操作简便、成本低廉, 适合推广, 为快速、准确鉴定即时食品中E. coli O157:H7打开了新思路。     

杀菌剂对DIP系统中过氧化氢酶的影响

本实验探讨了两种杀菌剂和一种H2O2稳定剂对过氧化氢酶的控制作用。结果表明,当杀菌剂A、B和H2O2稳定剂C的用量分别为200mg·L-1、50mg·L-1和1000mg·L-1时,对过氧化氢酶活性的抑制作用最强;其中杀菌剂A与B只作用于细菌,对已经产生的过氧化氢酶没有明显效果;H2O2稳定剂C可直接作用于过氧化氢酶抑制其活性,且能有效地保护H2O2使其性质变得稳定,不易分解。杀菌剂A、B与H2O2稳定剂C适当配合使用,杀菌剂效果更佳。     

枸杞黄酮对H_2O_2致血管内皮细胞损伤的保护作用

研究枸杞黄酮对过氧化氢(H2O2)损伤血管内皮细胞的保护作用。以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验对象,H2O2建立HUVEC的损伤模型。试验分正常对照组、过氧化氢损伤组、阳性对照组(Vit C)、干预组(枸杞黄酮100、200、400 mg/L预处理)。用MTT法观察枸杞黄酮对H2O2损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定内皮细胞中脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,分析其保护作用机制。MTT结果表明H2O2损伤后内皮细胞生长抑制率(IR)为38.8%;100、200、400 mg/L枸杞黄酮干预组IR分别为34.0%、30.7%、25.5%,IR显著降低,且与枸杞黄酮浓度呈相关(P0.01);干预组中H2O2损伤内皮细胞的MDA生成减少,SOD活力增加,与枸杞黄酮浓度呈相关(P0.01)。枸杞黄酮的干预对H2O2所致内皮细胞的损伤有保护作用,且随枸杞黄酮浓度的增加,保护作用更强。其机制可能与枸杞黄酮抑制H2O2所致内皮细胞的脂质过氧化以及增强其抗氧化作用有关。     

不同处理对烟草种子萌发及过氧化氢酶活性的影响

以烤烟型品种NC89为材料 ,通过浸种处理研究了不同K+浓度、H+浓度、渗透势及H2 O2 等对烟草种子萌发过程中呼吸速率和过氧化氢酶活性的影响。 0 .0 1～ 0 .1mol/LKNO3处理对种子萌发过程中活力指数和过氧化氢酶活性有明显的促进作用 ;0 .0 0 1～ 0 .0 1mol/LHCl处理后其活力指数、第 4天的过氧化氢酶活性和呼吸速率都比对照高 ;2 0 0～ 30 0g/L的PEG - 6 0 0 0溶液浸种 2 4h ,对烟草种子活力的提高也有明显效果 ;0 .3%H2 O2 虽能提高烟草种子的呼吸速率 ,但其发芽势及活力指数均低于对照     

乳源β-酪啡肽-5对C2C12细胞的抗氧化损伤作用

通过建立过氧化氢(H2O2)对C2C12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-CM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法：1) MTT法测定72h内β-CM5对C2C12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度H2O2对C2C12细胞活力的影响,筛选H2O2的最佳剂量和作用时间;3)测定β-CM5对H2O2损伤后细胞活力的影响;4)检测培养液中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性。结果：1)β-CM5各浓度组MTT值与对照组无差异;2)0.25mmol/L的H2O2作用于C2C12细胞 1h,MTT值显著低于对照组 (P＜0.01);3)与损伤组相比,β-CM5预保护组的MTT值显著升高(P＜0.05),治疗组MTT值无明显变化;4)与损伤组相比,β-CM5预保护组的SOD活性显著提高(P＜0.05),LDH活性显著下降(P＜0.05)。结论：β-CM5具有较强的抗氧化作用,对H2O2损伤的C2C12细胞有明显的保护作用,其机制可能与增强抗氧化酶活力和维持细胞完整性有关。     

植物源香辛料对E.coli O157：H7的杀菌效果比较

以常见植物源香辛料包括八角、丁香、桂皮、茴香、芥末、花椒、麻椒、香叶为材料,研究其醇提取物在不同浓度和作用时间下对E.coli O157：H7的杀菌效果,并分析不同产地对香辛料杀菌效果的影响。结果表明：试验用香辛料对E.coli O157：H7均具有一定的杀菌作用,杀菌能力差异显著（p＜0.05）,杀菌效果最好的香辛料为丁香,体积分数为9.1%的丁香提取物作用1 h可杀灭E.coli O157：H7 5 lg（CFU/mL）以上,其次为八角;相比其它香辛料,芥末提取物杀灭E.coli O157：H7的效果不理想,体积分数为50%的3个不同芥末产品提取物处理1 h平均杀灭2.47 lg（CFU/mL）E.coli O157：H7;产地来源对某些香辛料的杀菌能力有影响,如茴香、桂皮、八角（p＜0.05）。     

过氧化氢在茉莉酸甲酯抑制拟南芥根生长中的作用研究

茉莉酸类物质(JAs)是许多高等植物体内产生的天然化合物,广泛分布于植物体各个部位,其在植物生长发育、代谢调节、抗病、耐逆、防御相关基因的诱导表达等方面均起着重要的作用。本文主要研究茉莉酸甲酯对拟南芥根生长调控中,H_2O_2在其中的功能。利用不同浓度的茉莉酸甲酯对野生型拟南芥(wt)和过氧化氢酶突变体型拟南芥(C、D、F)萌发的幼苗进行处理,对其根的生长情况进行测定。结果表明:与对照相比,不同浓度的茉莉酸甲酯均可以抑制野生型拟南芥根的生长,且随着茉莉酸甲酯浓度的增加,根生长受抑制的程度也逐渐增大;而同时茉莉酸甲酯对于wt和C、D、F的根生长抑制情况并无太大差异,并且结合染色结果也说明:H_2O_2在茉莉酸甲酯抑制拟南芥根的生长的过程中可能不发挥作用。     

红曲色素的抗氧化活性及对HepG2氧化损伤的保护作用研究

目的 研究纯化后的红曲色素(monascus pigments,MPs)抗氧化活性及对HepG2细胞氧化损伤的修复作用。方法 以红曲米粉为原料,对其含有的MPs进行提取、纯化和鉴定。通过测定MPs的总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ammonium salt, ABTS]阳离子自由基清除率评估了其抗氧化活性。同时,选用0.20 mmol/L的H2O2建立氧化应激模型,探索不同浓度MPs对细胞氧化损伤的保护机制。结果 纯化后的MPs含有4种MPs单体,分别为安卡红曲黄素、红曲玉红素、红曲素和潘红胺。MPs的总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除率与其浓度呈正相关。用不同浓度的MPs预处理后,与MC组相比,较低浓度（10 μg/mL）的MPs能显著提高细胞的存活率,但较高浓度的MPs (20 μg/mL)显著降低了细胞的存活率,这可能是H2O2与MPs协同作用导致的。随着MPs浓度增加,细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)累积量逐渐减少。当MPs浓度为20 μg/mL时,过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分别从14.75 U/mL±0.04 U/mL、3.87 U/mL±0.09 U/mL提升至15.25 U/mL±0.05 U/mL、8.28 U/mL±0.68 U/mL。结论 MPs有较强的自由基清除能力,对H2O2诱导的氧化损伤有保护作用,这可能是与MPs提高了抗氧化酶活性,降低了细胞内ROS累积量有关。     

中草药提取物抑制H_2O_2诱导人皮肤细胞凋亡的初步研究

建立了过氧化氢(H2O2)诱导人皮肤成纤维细胞损伤及凋亡模型,并研究几种具有抗氧化作用的复方中草药提取物对细胞损伤及凋亡的影响。采用MTT、Hoechst染色及TUNEL等方法检测过氧化氢诱导细胞后以及加入中草药提取物后细胞的存活率、细胞形态以及细胞凋亡的状况。实验结果显示:在浓度为0.8 mmol/L,作用时间6 h,过氧化氢能诱导人皮肤成纤维细胞损伤和凋亡(p<0.05);而抗氧化类中草药复方提取物等物质能够显著提高过氧化氢诱导的细胞存活率的降低,并能明显减少凋亡细胞的数量(p<0.05),表明其对过氧化氢导致的细胞损伤和凋亡作用具有一定的抑制和防护作用。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside,C3G）对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力以及一氧化氮（nitric oxide,NO）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G（6.25～25.00 μmol/L）能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低（P＜0.05）。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放（P＜0.05）,显著增加SOD和GSH-Px活力（P＜0.05）。此外,与空白对照相比,400 μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调（P＜0.05）,而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调（P＜0.05）;而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论：C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。     

不同粒径纳米金标记二抗增强表面等离子共振检测E. coli O157:H7

基于双通道表面等离子共振（surface plasmon resonance,SPR）传感器,结合不同粒径的金纳米粒子（Aunanoparticle,AuNPs）标记多克隆抗体（polyclonal antibody,PAb）作为第二抗体,采用氨基偶联的方法将PAb固定在传感器表面作为第一抗体,采用三明治夹心法进行了检测大肠杆菌O157∶H7（E. coli O157∶H7）的研究。考察3 种粒径的AuNPs作为标记物,增强SPR响应信号检测E. coli O157∶H7的能力。结果表明,增强效果最佳的AuNPs粒径为17.79 nm,其可检测到的E. coli O157∶H7的最低浓度为10 CFU/mL。     

过氧化氢调控菜心采后木质化的机理初探

为研究过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）在菜心贮藏保鲜中的作用,该研究用5 mmol/L H2O2浸泡处理鲜切菜心,置于4 ℃下贮藏,对贮藏期内菜心薹茎的品质变化、酶活性、基因表达差异进行分析,初步明确H2O2信号对鲜切菜心茎木质素合成的调控作用。结果显示：H2O2处理导致菜心的呼吸速率、茎木质素含量及内源H2O2含量增加,贮藏12 d时,茎木质素含量增加了35.78%,H2O2含量提高2.71倍;木质素合成途径关键酶的苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL）、肉桂醇脱氢酶（Cinnamyl alcoholdehydrogenas,CAD）在贮藏9 d比对照组酶活性分别提高85.70%、15.53%。基因水平分析发现,H2O2处理提高了木质素合酶基因（POD37、PAL4、PAL8）、活性氧生成酶基因（RbohB、RbohG）及其清除酶基因（SOD1、SOD2、SOD3、CAT3）在不同贮藏时期内的表达。综上所述,5 mmol/L H2O2处理导致了采后薹茎木质素的增加,加快品质劣变,不利于菜心贮藏保鲜效果,推测H2O2处理通过影响活性氧平衡系统,对内源H2O2含量进行调节,影响木质素合成。该研究结果说明H2O2在采后贮藏保鲜过程中具有重要调节作用。     

热处理与内源H2O2对黄瓜抗冷性和抗氧化酶活性的影响

研究热处理和二甲基硫脲(DMTU)抑制内源H2O2再进行热处理,对2℃贮藏条件下荷兰小黄瓜冷害发生率、细胞膜系统以及活性氧代谢的影响。对照组黄瓜在冷藏过程中,冷害发生率、膜渗透率和丙二醛(MDA)含量均呈上升趋势,H2O2含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性先上升后下降,而过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性随贮藏时间的延长而降低。热处理可以抑制低温贮藏中黄瓜冷害发生率和膜渗透率的增加,提高贮藏初期H2O2含量,减少MDA的积累,提高黄瓜CAT、APX、SOD的活性,POD活性在贮藏前后未发生明显变化,表明POD不是抗冷系统中的关键因子。抑制内源H2O2后进行热处理的黄瓜冷害发生率和MDA含量显著高于热处理组,而CAT、APX的活性受到抑制。结果表明,热处理可以减轻黄瓜冷害的发生,提高抗氧化酶的活性。抑制内源H2O2后进行热处理的黄瓜抗冷性降低,表明初期内源H2O2在热处理诱导的黄瓜抗冷性中发挥重要作用。     

顶孢霉发酵液提取物清除自由基能力的研究

为了研究筛选出的具有抗氧化活性的2株顶孢霉的发酵液提取物清除自由基的能力,本研究制备了2株顶孢霉的发酵液提取物,比较了其清除O2-·、·OH和DPPH·三种自由基的能力.结果表明:2株顶孢霉发酵液提取物的相对还原力(即总抗氧化活性)均显著高于维生素E;对O2-·自由基的清除率也均高于维生素E,其中,菌株YX015更为高效,在1.0mg/mL浓度时对O2-·自由基的清除率达到49.15%;2菌株清除·OH和DPPH·的能力均显著弱于维生素E,但都高于其自身清除O2-·的能力,在浓度达到1.0mg/mL时,菌株CA022对·OH的清除率为60.43%;菌株YX015对·OH的清除率为83.33%.