长链非编码RNA UCA1 靶向miR-582-5p 对膀胱癌UM-UC-3细胞生存和运动能力的调节作用及机制研究

目的：探究长链非编码RNA-UCA1通过靶向miR-582-5p对膀胱癌细胞生存和运动能力的作用及作用机制。方法：用UCA1-shRNA(sh-UCA1)和(或)miR-582-5p inhibitor转染细胞,荧光定量检测转染效率及miR-582-5p的表达水平;荧光素酶报告实验确定UCA1和miR-582-5p的靶向关系;CCK8检测细胞活性,流式检测细胞凋亡情况,侵袭及划痕实验检测细胞侵袭迁移能力,免疫印迹检测细胞增殖、凋亡及迁移相关蛋白的表达。结果：sh-UCA1能显著降低膀胱癌细胞UCA1表达水平(P<0.05),促进miR-582-5p表达(P<0.05);miR-582-5p-inhibitor能明显减弱sh-UCA1对miR-582-5p表达的促进作用(P<0.05);荧光素酶报告实验表明UCA1上有miR-582-5p的结合位点;沉默UCA1可显著抑制膀胱癌细胞增殖及Ki67的表达,促进细胞凋亡及cleaved caspase-3的表达(P<0.05);同时,sh-UCA1还能显著抑制膀胱癌细胞侵袭、迁移及VEGF的表达(P<0.05);此外,miR-582-5p inhibitor可显著减弱sh-UCA1对细胞增殖、凋亡及侵袭迁移能力的作用(P<0.05)。结论：UCA1可通过靶向miR-582-5p增强膀胱癌UM-UC-3细胞的生存及运动能力。     

miR-197-3p调控DMBT1抑制甲状腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-197-3p是否通过靶向调控恶性脑瘤缺失1基因(DMBT1)影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法RT-qPCR检测健康人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞SW579、CGTHW-1中miR-197-3p表达;MTT法检测SW579细胞增殖;Transwell小室法检测SW579细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证miR-197-3p是否靶向DMBT1;Western blot检测细胞DMBT1、cyclinD1、p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达。结果与Nthy-ori 3-1细胞比较,SW579和CGTHW-1细胞中miR-197-3p相对表达量升高(P<0.05);抑制miR-197-3p表达后,SW579细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制,细胞中cyclinD1蛋白和MMP-2蛋白表达降低而p21蛋白和E-cadherin蛋白表达升高;SW579细胞中miR-197-3p靶向负调控DMBT1的表达;过表达DMBT1明显抑制SW579细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制DMBT1则能逆转miR-197-3p对SW579细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论miR-197-3p通过靶向调控DMBT1的表达,抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

异丙酚通过miR-218抑制人食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭和迁移

目的探讨异丙酚对人食管鳞癌细胞系KYSE150侵袭和迁移的影响及其机制。方法以0、2.5、5和10μg/L异丙酚处理KYSE150细胞,24 h后分别采用Transwell小室法和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR检测细胞中miR-218的表达;Western blot检测HMGB1蛋白的表达;生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR-218和HMGB1的靶向关系,观察miR-218对HMGB1蛋白的调控作用。采用脂质体法转染miR-218抑制剂或pcDNA3.1-HMGB1-GFP过表达载体质粒后,观察miR-218和HMGB1蛋白的表达以及下调miR-218或上调HMGB1表达对10μg/L异丙酚处理的KYSE150细胞侵袭和迁移的影响。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制KYSE150细胞侵袭、迁移和细胞中HMGB1蛋白的表达,并促进miR-218的表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-218的靶基因,miR-218可负向调控HMGB1蛋白的表达(P<0.05)。下调miR-218表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05);同时上调HMGB1表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚抑制食管鳞癌KYSE150细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与miR-218靶向调控HMGB1有关。     

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-509靶向Rac1调节人肝癌LM3细胞侵袭和迁移及裸鼠模型的存活

目的:探究微小RNA-509(miR-509)对人肝癌细胞生长、侵袭、迁移及荷瘤裸鼠存活的作用及其作用机制。方法:将miR-509模拟物(miR-509 mimic)和pcDNA Ras相关的C3肉毒毒素底物1(pcDNA Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, pcRac1)转染人肝癌LM3细胞,Western blot检测Rac1的表达;萤光素酶报告基因实验证明miR-509和Rac1的靶向关系;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;采用皮下注射LM3细胞的方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠存活率,Western blot检测肿瘤组织Rac1的表达。结果:miR-509 mimic能明显抑制LM3细胞Rac1的表达(P0.05),pcRac1能明显减弱miR-509 mimic对Rac1表达的抑制作用(P0.05);miR-509 mimic还能显著减弱Rac1野生质粒的萤光素酶活性(P0.05);同时,miR-509 mimic可减少侵袭细胞数,抑制肝癌细胞迁移(P0.05)。此外,miR-509过表达还能升高肝癌移植瘤模型小鼠存活率(P0.05),降低肿瘤组织Rac1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:miR-509能通过靶向抑制Rac1的表达而抑制肝癌细胞侵袭和迁移,并促进肝癌模型小鼠存活。     

miR-107抑制胶质瘤细胞的体外增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-107对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法运用RT-qPCR检测人正常的星形胶质细胞系NHA、神经胶质瘤细胞系U87、A172、U251中miR-107和FOXK1的表达;将细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-107组(转染miR-107 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXK1组(转染si-FOXK1)、miR-107+pcDNA3.1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1)和miR-107+pcDNA3.1-FOXK1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1-FOXK1);用脂质体法分别转染至U87细胞;CCK-8法检测细胞的增殖;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测细胞中FOXK1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常的星形胶质细胞NHA相比,神经胶质瘤细胞U87、A172、U251中miR-107表达明显下调,FOXK1表达明显上调(P<0.05);过表达miR-107、敲减FOXK1均可抑制U87细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-107可抑制野生型FOXK1的细胞荧光活性,并负向调控FOXK1的表达;过表达FOXK1可逆转miR-107对U87细胞增殖迁移侵袭的抑制作用。结论 miR-107抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制可能与靶向负调控FOXK1有关,将可为胶质瘤的诊断和治疗提供靶向治疗的依据。     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-129对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA MALAT1对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的影响,初步分析其机制.方法 将lncRNA MALAT1抑制物转染前列腺癌PC3细胞,分为untreated组(对照组)、si-NC组(阴性对照组)及si-MALAT1组(沉默MALAT1),实时定量PCR检测各组PC3细胞lncRNA MALAT1和miR-129的表达,双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA MALAT1和miR-129的靶向关系,CCK-8方法检测各组PC3细胞增殖能力,Transwell实验检测各组PC3细胞侵袭能力.结果 转染MALAT1抑制物能够降低PC3细胞lncRNA MALAT1的表达,上调miR-129的表达(P＜0.05);双荧光素酶实验表明lncRNA MALAT1可以靶向调控miR-129.lncRNA MALAT1表达抑制后,PC3细胞的增殖与侵袭能力下降(P＜0.05).结论 沉默lncRNA MALAT1可以抑制前列腺癌细胞PC3的增殖和侵袭,其机制可能与调控miR-129表达有关.     

miR-135b-3p调控XAF1表达影响甲状腺癌细胞的迁移、侵袭和放射增敏性

目的探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制。方法培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达。转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系。结果与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05)。miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达。抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响。结论miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点。     

EPAS1 siRNA抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨沉默内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)对抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 将HiMet-ccRCC细胞分为对照(Con)组、阴性对照(NC)组、沉默EPAS1表达组(EPAS1 siRNA组)。用RT-qPCR检测HiMet-ccRCC细胞EPAS1 mRNA水平;MTT法检测HiMet-ccRCC细胞增殖;Transwell小室法检测HiMet-ccRCC细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、PCNA表达。结果 与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞中EPAS1表达水平显著降低(P<0.05),HiMet-ccRCC细胞增殖抑制率明显升高、侵袭及迁移细胞数明显减少(P<0.05);与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、PCNA蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默EPAS1可抑制HiMe...     

TRAP1 通过TGF / Smad3 通路对膀胱癌的迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨TRAP1蛋白对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法：采用Western blot从膀胱癌细胞株中挑选出高表达TRAP1的细胞系BIU-87;使用TRAP1沉默慢病毒（LV3-TRAP1）沉默TRAP1,使用GFP荧光及PCR检测LV3-TRAP1沉默效率;Transwell和划痕实验分别检测沉默TRAP1蛋白表达后对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响;CM-H2DCFDA荧光染色细胞检测膀胱癌细胞内活性氧水平;Western blot检测相关信号通路TGF/Smad3蛋白的表达情况。结果：LV3-TRAP1慢病毒可以有效地抑制TRAP1蛋白的表达;沉默TRAP1蛋白的表达可以有效抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力、降低膀胱癌细胞内活性氧水平;同时TGF/Smad3信号通路中的TGF、Smad2及Smad3蛋白表达也相应降低。结论：沉默TRAP1蛋白可以通过调控TGF/Smad3信号通路来抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

Cyclic RNA Circ_0000735 sponges miR-502-5p to promote bladder cancer cell proliferation and invasion and inhibit apoptosis

Objective: The objective of this study was to investigate the effect on the proliferation, invasion, and apoptosis of bladder cancer cells through miR-502-5p of the Circ_0000735 circular RNA. Methods: Circ_0000735 and miR-502-5p expression of bladder cancer patients in malignant and paracancerous tissues was identified using qRT-PCR. Nucleoplasm isolation assay and RNase R enzymatic assay were used to classify Circ_0000735 subcellular origin and stability. Dual luciferase reporter assay and RIP assay were used to confirm Circ_0000735 and miR-502-5p targeting relationships. Cell proliferation, apoptosis, and invasion capacity were identified using CCK8, flow cytometry, and transwell assays. To confirm the effect of Circ_0000735 on tumorigenesis in nude mice, in vivo experiments were conducted. Results: Circ_0000735 expression was increased in bladder cancer tissues and cells compared with paraneoplastic tissues and normal cells, and miR-502-5p expression was reduced (both P<0.05). In the cytoplasm, Circ_0000735 was largely clustered and could not be digested by the RNase R enzyme, and ceRNA may play a role in bladder cancer cells. Circ_0000735 silencing prevented cell proliferation and invasion and facilitated apoptosis (all P<0.05). The incorporation of miR-502-5p inhibitor rescued the effect on bladder cancer cells of Circ_0000735 silencing. In vitro experiments showed that inhibition of Circ_0000735 expression was beneficial in suppressing tumorigenic ability in nude mice. Conclusion: Circ_0000735 can adsorb miR-502-5p to promote bladder cancer cell proliferation and invasion and inhibit apoptosis. Circ_0000735 may be an effective molecular target for bladder cancer therapy.     

miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制

BACKGROUND:It has been proved that miR-34a plays an inhibitory role in the growth of lung cancer stem cells, but the underlying mechanism remains unclear. OBJECTIVE:To explore the inhibitory effect of miR-34a on lung cancer stem cells and the underlying mechanism. METHODS:The CD133⁺ lung cancer stem cells were separated from lung cancer A549 cell lines using magnetic activated cell sorting method. And miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were established by liposome transfection technology. Besides, the targeted relationship between miR-34a and Notch1 was analyzed by the dual-luciferase reporter. Afterwards, Notch1 silencing was performed by gene knockout, and its effect on lung cancer stem cells was determined. RESULTS AND CONCLUSION:After sorted and detected by immunomagetic selection and flow cytometry assay respectively, a high rate of CD133⁺ lung cancer stem cell was obtained. And qRT-PCR detected that the expression level of miR-34a in CD133⁺ lung cancer stem cells was significantly lower than that in CD133^- lung cancer stem cells. Moreover, miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were successfully constructed and miR-34a significantly inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. Dual-luciferase reporter assay indicated that Notch1 mRNA was a target of miR-34a. In addition, Notch1 silencing obviously inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. These findings suggest that miR-34a can inhibite lung cancer stem cells via the Notch1 signaling pathway.     

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-200b调控PDCD4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;分别将miR-200b siRNA、PDCD4 mimics以及相应对照miRNA转染MCF-7细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果miR-200b在乳腺癌组织中呈低表达水平,进一步抑制miR-200b的表达,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力显著增强(P<0.05);将miR-200b siRNA、PDCD43′-UTR共转染到乳腺癌MCF-7细胞中,双荧光素酶报告基因结果显示抑制miR-200b的表达后,PDCD4的表达及活性相应上调(P<0.05);同时通过蛋白免疫印迹实验可以发现,抑制miR-200b表达后,PDCD4蛋白表达含量降低,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显增强(P<0.05);而过表达PDCD4后PDCD4蛋白表达含量增加(P<0.05),乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miR-200b可靶向上调PDCD4基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力。     

Circ-MALAT1靶向miR-101抑制膀胱癌细胞系SW780侵袭和迁移

目的 探讨circ-MALAT1靶向miR-101抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移.方法 将膀胱癌细胞系SW780分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ-MALAT1组(转染si-circ-MALAT1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-101组(转染miR-101 mimics)、(si-circ-M...     

miR-140-3p通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭

目的:探究微小RNA-140-3p(mi R-140-3p)对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的靶向关系以及对非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭的影响。方法:使用RT-qPCR检测HLF-1、A549和H1299不同细胞株中mi R-140-3p的表达水平,选择差异最显著的A549细胞用作后续研究对象; Target Scan软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证mi R-140-3p和PD-L1之间的靶向关系; RT-qPCR和Western blot检测转染mi R-140-3p模拟物和抑制剂对PD-L1表达水平的影响; MTT法检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞活力的影响; Transwell实验检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:mi R-140-3p在人肺癌A549和H1299细胞的表达中显著下调(P 0. 05); mi R-140-3p高表达能够使PD-L1表达下调,对A549细胞的活力、迁移和侵袭具有抑制作用;转染pc DNA3. 0-PD-L1能够阻断mi R-140-3p对A549细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:mi R-140-3p可通过靶向负调控PD-L1抑制A549细胞的活力、迁移和侵袭。