豆腐酸浆中一株解淀粉乳杆菌的分离鉴定

利用MRS选择性培养基从自然发酵的豆腐酸浆中分离得到一株产乳酸细菌(编号E36)。初步研究结果表明:该菌株革兰氏染色阳性,菌体呈短杆状,单生或呈短链,菌落呈圆形,乳白色,边缘整齐,表面湿润,不透明;菌株生长过程中,加有溴甲酚紫指示剂的培养基由紫变黄,经生理生化和16S rRNA基因序列分析,初步鉴定该菌为产酸解淀粉乳杆菌。     

豆腐酸浆老汤中产酸菌的分离筛选与鉴定

利用MRS选择性培养基,从分别采自山东邹平、陕西榆林、河北涞源、云南石屏、云南建水及云南元阳的6份酸浆老汤中分离纯化出12种菌落形态不一样的乳酸菌,分别采用MC改良培养基和发酵黄浆水p H及产酸量的监测对12种菌进行初筛及复筛,筛选出一株产酸较快、较高的乳酸菌,并对该菌株进行了菌落形态、生理生化及16S r DNA序列分析的鉴定实验,结果表明:该菌株为革兰氏阳性菌,菌落特征为白色,圆形,表面突起,不透明,边缘整齐,镜检发现该菌为球菌、直径为0.8μm,四联或成串排列,经生理生化及16S r DNA序列鉴定确定该菌为肠球菌属中的屎肠球菌(Enterococcus faecium),遗传稳定性较好。      

豆腐酸浆老汤中产酸菌的分离筛选与鉴定

利用MRS选择性培养基,从分别采自山东邹平、陕西榆林、河北涞源、云南石屏、云南建水及云南元阳的6份酸浆老汤中分离纯化出12种菌落形态不一样的乳酸菌,分别采用MC改良培养基和发酵黄浆水p H及产酸量的监测对12种菌进行初筛及复筛,筛选出一株产酸较快、较高的乳酸菌,并对该菌株进行了菌落形态、生理生化及16S r DNA序列分析的鉴定实验,结果表明:该菌株为革兰氏阳性菌,菌落特征为白色,圆形,表面突起,不透明,边缘整齐,镜检发现该菌为球菌、直径为0.8μm,四联或成串排列,经生理生化及16S r DNA序列鉴定确定该菌为肠球菌属中的屎肠球菌(Enterococcus faecium),遗传稳定性较好。     

1株酸浆豆腐中产蛋白酶菌种的分离与鉴定

以市售酸浆豆腐为样品,首先筛选样液适宜的稀释倍数,将样品稀释液接种于马铃薯葡萄糖平板和MRS平板进行纯培养,然后接种于脱脂牛奶培养基,以产透明圈为指标,再以酪蛋白为底物测定酶活,筛选分离产蛋白酶菌种,继而通过肉眼观察菌落形态、光学显微镜和电镜、显微镜观察菌体形态,进一步通过各种生理生化反应、ITS测序方法进行菌种鉴定。结果表明:25 g样品稀释至10^-5浓度适宜,在脱脂牛奶培养基中,温度28 ℃、有氧培养72 h后产生透明圈,酶活为9.6 U/mL;肉眼观察菌落为乳白色,呈绒毛状,有同心圈并呈放射线状,显微镜下节孢子呈单个或链状,扫描电镜观察菌丝体宽4~5.5 μm,孢子大小多数为(3.3~5.7) μm×(7.0~17.1) μm;根据生理生化反应结果,查阅《真菌鉴定手册》,鉴定为白地霉(Geotrichum candidum);ITS测序显示与白地霉同源性达100%。根据生长曲线可知,0~8 h,菌株处于延迟期;8~40 h,菌株处于对数期;40~68 h,菌株处于稳定期;68 h以后,菌株处于衰亡期。     

自然发酵酸菜汁中乳杆菌的分离鉴定

通过选择性培养和形态学观察,从分别采自辽宁省阜新、葫芦岛、兴城、营口、锦州的5份传统发酵酸菜汁中,分离纯化和筛选出4株具有耐酸特性的乳杆菌疑似菌株(HLD1-3、YK1-2、JZ6-3、XC4-4),并对其进行运动性、过氧化氢酶、石蕊牛乳、明胶液化、不同温度生长、不同NaCl质量浓度生长、糖发酵实验等传统生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,进一步鉴定其属种。二者结果均表明：4株耐酸乳酸菌均属于乳杆菌属,其中,HLD1-3和YK1-2属于乳杆菌属的清酒乳杆菌种,而JZ6-3和XC4-4属于乳杆菌属的植物乳杆菌种。由此可以推断,东北自然发酵酸菜可作为潜在益生乳酸菌分离筛选的资源库。     

自然发酵肉制品中干酪乳杆菌的分离和鉴定

从自然发酵香肠和自制腌肉中分离得到68株乳酸菌,通过对菌株发酵适应性的研究,筛选出2株性能优良,适用于肉制品发酵的乳酸菌C67和R6,初步生化鉴定表明,2株均为干酪乳杆菌。文中还对所获得的菌株的相关发酵性能进行了测试。     

自然发酵酸菜中乳杆菌的分离鉴定与多态性分析

以自然发酵的东北酸菜汁液为实验样品,对其中的乳杆菌进行了分离纯化,共得到乳杆茵34株:使用生理生化实验对其中的10株乳杆菌进行了鉴定;并采用16S rDNA PCR-RFLP方法对这10株乳杆菌进行了遗传多态性的分析.结果表明它们分属5个遗传型.     

绿豆酸浆中淀粉絮凝菌的分离鉴定及其生长特性

以自然发酵绿豆酸浆为研究对象,采用平板分离技术从酸浆中分离出5株具有絮凝淀粉活性的产酸细菌,通过群体形态、个体形态观察、生理生化实验及16S rDNA序列分析对絮凝活性最高的菌株LLY11进行菌种鉴定,鉴定该菌株为Acetobacter indonesiensis,并命名为Acetobacter indonesiensis LLY11。通过单因素实验优化了其培养条件,其最佳培养条件为:分别以1%葡萄糖、2%牛肉膏作为绿豆汁培养基的碳源和氮源、初始pH5.0、培养温度30 ℃,在该培养条件下,测定了LLY11菌株的生长曲线,确定菌株从12 h才开始进入对数期,有二次生长,分别在24 h和42 h菌体数量达到最高值,随后进入衰亡期。     

植物乳杆菌D1501发酵黄浆水的抑菌活性及其中细菌素的分离与鉴定

将植物乳杆菌D1501(Lactobacillus plantarum D1501)接种于黄浆水中,37 ℃静置培养24h后制成酸浆。抑菌活性测定表明,该方法制备的酸浆对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有明显的抗菌活性,对假丝酵母有弱的抑菌活性,但对酿酒酵母和2株霉菌没有抑制作用。经中和及酶解实验推测酸浆中的抑菌物质为细菌素。将经过30、10、3 kDa超滤分离得到的无细胞超滤液旋蒸浓缩定容后,采用RESOURCE-Q阴离子交换柱和300SB-C18反相层析柱依次纯化,得到色谱纯度细菌素物质,命名为Lp100。该细菌素经液相色谱-串联质谱法分析,确定分子质量约为1 434.90 Da,氨基酸序列为MCCKVLLLLSRR。最终细菌素比活力为7 247.00 IU/mg,纯化倍数为79.94 倍,回收率为1%。     

一株植物乳杆菌的分离鉴定及应用

从湖南自然发酵的酸豇豆中分离出一株疑似乳酸菌菌株L4,提取其16S rDNA,并经测序、同源性分析和系统发育树构建等,对其属种进行鉴定。结果表明,菌株L4为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。通过耐盐、耐酸和降解亚硝酸盐实验发现,菌株L4可在10%食盐含量条件下生长,耐受pH 2.5,对亚硝酸盐的降解率高达99%。接种菌株L4发酵萝卜干,以自然发酵萝卜干为对照,对发酵萝卜干进行感官评定初步探究该菌株发酵萝卜干的特性。结果表明,菌株L4可以缩短萝卜干发酵周期,提高发酵萝卜干感官评分。     

Identification of Lactic Acid Bacterial Strains with High Conjugated Linoleic Acid-Producing Ability from Natural Sauerkraut Fermentations

ABSTRACT:  Natural sauerkraut fermentations contain a great number of lactic acid bacteria. The aim of this study was to identify lactic acid bacterial strains with high conjugated linoleic acid (CLA)-producing ability from natural sauerkraut fermentations. Fifteen CLA-producing lactic acid bacterial strains were isolated in the study. One of these strains, designated as NCUL005, showed the highest CLA-producing ability (0.623 mg/mL). The transformation efficiency of converting linoleic acid into CLA by NCUL005 was 26.67%. The CLA produced by NCUL005 comprised a mixture of 32.2% cis9, trans11-C18:2 isomer and 67.8% trans10, cis12-C18:2 isomer. NCUL005 was identified as Lactobacillus plantarum , based on its cell morphology, characteristics of lactic acid production, and analysis result from Biolog Microbial Identification System (BMIS).     

乳酸菌素生产菌的分离与鉴定

对乳酸菌素产生菌进行分离,得到4株理想菌株。利用高效液相色谱检测其发酵液,初步确定4菌株均为乳酸菌,其中Ⅱ32菌株产乳酸最多,对各指示菌的抑制作用最显著,对该菌株作进一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培养基上可以生长,最适生长温度为28℃,革兰氏染色呈阳性,无芽孢。通过API生化反应实验、16SrDNA测序可进一步确定该菌株是L·paraplantarum或L·paraplantarum。最终通过对recA-gen的PCR产物检测,鉴定菌株Ⅱ32为Lactobacillusparaplantarum(类植物乳杆菌)。牛津杯抑菌试验显示,该菌株的发酵液不仅对多数G+细菌的生长有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等Gˉ细菌的生长也具有明显的抑制作用,但对真菌没有活性。     

泡菜中优良乳酸菌的分离鉴定及其发酵性能的研究

从多种泡菜中分离出92株菌，对其在低温下发酵能力进行测试，筛选出了四株产酸较快、发酵风味较好的菌株Leu．1、Leu．2、Lact．1和Lact．2。经API系统鉴定，Leu．1和Leu．2为肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides)，Lact．1为干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp.casei)，Lact.2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。在10℃发酵白菜中，接种发酵的产酸速度和风味明显优于自然发酵，其中Leu．1和Leu．2发酵前期产酸较快，发酵11d白菜汁pH值达3．67，而Lact．1和Lact．2发酵11d pH值达3．30左右。另外还对四株菌的相关发酵性能进行了测试。     

内蒙古奶豆腐中产胞外多糖乳酸菌的分离筛选

从内蒙古牧民自制的传统发酵乳制品“奶豆腐”中分离得到4 株乳酸杆菌。经表型、生理生化和API 鉴定,这4 株菌都是植物乳杆菌,分别为植物乳杆菌C2、C8、C15 和C21。采用负染法观察菌株荚膜多糖产生情况,菌株C8、C15 和C21 都产生荚膜多糖,在普通光学显微镜下荚膜清晰可见。对4 株植物乳杆菌48h 内的生长和产胞外多糖情况进行分析发现,本实验中的4 株植物乳杆菌在发酵48h 内的胞外多糖产量逐渐增加,其中植物乳杆菌C21 的产量最高。     

传统发酵酸乳中乳酸菌的分离鉴定

对喀什市、疏勒县和疏附县传统发酵酸奶中的乳酸菌进行分离,结合菌落形态特征和凝乳试验,筛选出6株菌株(K3、L1、L2、L3、F1、F2),通过耐盐和耐酸试验,得知菌株L1在5%盐浓度、培养24h时存活率达到45.95%,F1在pH 2、培养2h时存活率为6.33%;通过16SrRNA序列扩增和序列比对后,初步确定K3、L1、L2为德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii),L3、F1、F2为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)。     

酸菜中具有抑菌活性乳酸菌的分离鉴定及其产细菌素特性

目前已有研究陆续从不同的乳酸菌中分离到细菌素,但是这些细菌素存在着抑菌谱窄的问题,寻找广谱抗菌性能的新一代细菌素具有重要的理论价值和应用前景。以市售保质期较长的8种不同品牌的酸菜为材料,将青霉菌作为指示菌,通过抑菌实验筛选出一株能产生抑菌物质的菌株L3,经过生理生化鉴定、16S rDNA测序分析确定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),故命名为植物乳杆菌L₃,NCBI序列号为MT781360。该菌株在MRS培养基中于37℃培养18～24 h时产细菌素L3的抑菌活性最强。将该培养上清液采用乙酸乙酯萃取,葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50过滤分离纯化,再经Trinice-SDS-PAGE电泳结果显示,细菌素L3的分子质量约为4～5 kDa。细菌素L3对蛋白酶敏感,但其活性不受过氧化氢酶的影响,初步结果显示细菌素L3为蛋白质类物质。细菌素L3在60～100℃处理20 min或121℃处理15 min仍具有较高的抑菌活性,pH值2～10范围内有良好的稳定性;对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及部分真菌具有抑菌活性。植物乳杆菌L_3<...     

抗氧化活性乳酸菌的分离鉴定及其在泡菜发酵中的应用

本研究从农家自制泡椒中分离并鉴定出三株具有抗氧化活性的乳酸菌。并用这几株乳酸菌组合后发酵泡菜,同时设立自然发酵组作对照,分别测定了乳酸菌菌株和1~5 d发酵泡菜的抗氧化活性,以揭示人工接种抗氧化活性乳酸菌在泡菜发酵中的作用。结果发现添加乳酸菌的泡菜发酵周期比自然发酵泡菜缩短2 d。泡菜发酵实验表明添加乳酸菌发酵泡菜的抗氧化活性远大于自然发酵泡菜的抗氧化活性。到发酵后期,三个发酵组中除DPPH自由基清除率无显著差异外(p0.05),自然发酵组的还原力、羟基自由基和ABTs自由基清除率显著低于人工接种组,其中羟基自由基清除率的差异最为显著,均大于自然组清除率28.41%的两倍以上。通过感官品尝实验对泡菜的风味进行初步评估,表明添加乳酸菌发酵泡菜的风味较自然发酵更佳。进一步通过GC-MS对泡菜中的香气成分进行初步分析,结果证明接种乳酸菌发酵泡菜的风味成分中烷烃和酯类比自然发酵泡菜中更为丰富,二者的总比例在所测峰面积比例中均高出自然组27%~30%。本研究为泡菜的健康发酵和泡菜风味的优化提供了理论依据。     

降解展青霉素的乳酸菌的筛选鉴定及其降解特性研究

目的:筛选鉴定具有降解展青霉素作用的乳酸菌,并揭示其降解展青霉素的特性。方法:将从青海泡菜中分离得到的2株乳酸菌活化后与展青霉素共培养,利用高效液相色谱(HPLC)法检测共培养过程中体系中展青霉素的含量,筛选出对展青霉素具有较高降解能力的一株乳酸菌。通过对该乳酸菌形态学观察及对16S rDNA序列同源比对,确定该乳酸菌的分类进化地位。进一步准备该乳酸菌的活菌、胞内物质、胞外代谢物以及细胞壁并分别与展青霉素共培养,利用HPLC研究上述各组分对展青霉素的降解作用,探究该乳酸菌降解展青霉素的特性。结果:本研究从2株青海泡菜分离得到的乳酸菌中筛选到一株乳酸菌YZU02能够高效降解展青霉素,经微生物形态学观察及16S rDNA测序比对表明YZU02菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。YZU02活菌对展青霉素降解效果较好,可在36 h内将展青霉素由10.87 μg/mL降至2.94 μg/mL。YZU02胞内物质、经展青霉素刺激后的YZU02胞内物质、YZU02胞外代谢物对展青霉素几乎没有降解作用,推测该乳酸菌去除展青霉素与生物降解无关。YZU02细胞壁可将展青霉素含量由10.84 μg/mL降低至5.10 μg/mL。结论:植物乳杆菌YZU02可通过其细胞壁的吸附作用去除溶液状态中的展青霉素,在36 h内对10.87 μg/mL的展青霉素的清除效率达到72.95%,在防治展青霉素污染方面极具应用价值。     

新疆哈萨克族传统发酵驼乳中乳酸菌的分离鉴定

分别从新疆玛纳斯、乌兰巴依、南山、水西沟采集的4份酸驼乳中,分离得到乳酸菌22株。采用传统形态学、生理生化特性方法对乳酸菌进行鉴定,鉴定结果为Lactobacillus16株(72.72%),Lactococcus 3株(13.63%),Enterococcus 2株(9.10%),Streptococcus 1株(4.55%),优势杆菌为Lactobacillus helveticus(18.18%),优势球菌为Lactococcus lactis subsp.lactis(13.63%)。利用16S rDNA序列同源性分析和系统发育树分析对MLS1进行了分子鉴定,鉴定结果为菌株MLS1与Lactobacillus rhamnosus的同源性达到98.1%,与传统生理生化鉴定结果一致,表明了16S rDNA序列分析应用在乳酸菌鉴定上的准确性。     

发酵肉制品中乳酸菌的分离、筛选和鉴定

对发酵肉制品中乳酸菌的分离、纯化以及鉴定技术进行了研究,结果从发酵香肠、腊肠、火腿中分离筛选得到2株德氏乳杆菌,并建立了一套发酵肉制品中乳酸菌的分离鉴定方法.