对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（JNK/p38 MAPK）信号通路的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度（100、150、200、250、300 mg·L^-1）对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝（MTT）比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果 与空白组比较,对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞增殖抑制率显著增高（P<0.01）;对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低（P<0.01）。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2蛋白表达（P<0.01）;对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;明显上调p38 MAPK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;对叶百部总生物碱（200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调JNK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨荔枝核总黄酮对HepG2增殖、迁移与侵袭的影响

目的 观察荔枝核总黄酮（TFL）对人肝癌细胞HepG2株增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度TFL及顺铂对HepG2细胞增殖的影响；TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测低、中、高质量浓度TFL（70、140、210 mg·L^-1）及顺铂（60 mg·L^-1）对HepG2细胞凋亡的影响，并选择TFL最优浓度进行后续实验。将细胞分为空白组、TFL组（140 mg·L^-1）、TFL+XL019组（140 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、TFL+TPI-1组（140 mg·L^-1+1 μmol·L^-1），进行细胞划痕实验和小室侵袭实验以验证TFL对HepG2迁移和侵袭的影响；使用细胞免疫荧光技术检测TFL对HepG2细胞上皮间充质转化（EMT）标记物表达的影响；使用蛋白免疫印迹法（Westem blot）对TFL干预后细胞内的酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）信号通路上关键蛋白的表达情况进行检测。结果 MTT比色法表明，与空白组比较，在24、48 h时，各质量浓度的TFL与顺铂均能显著抑制HepG2细胞增殖（P<0.01），24、48 h时TFL对HepG2的半抑制浓度（IC₅₀）分别为（136.7±2.40）、（106.8±1.11）mg·L^-1，24、48 h时顺铂对HepG2的IC₅₀分别为（58.48±2.04）、（5.15±0.56）mg·L^-1。TUNEL法发现各质量浓度TFL均可以诱导HepG2细胞凋亡，由此结果确定TFL 140 mg·L^-1为最佳质量浓度。细胞划痕实验表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组均明显抑制HepG2细胞的迁移能力（P<0.05，P<0.01），与TFL组比较，TFL+XL019组的抑制作用明显增强（P<0.05），TFL+TPI-1组的抑制作用显著减弱（P<0.01）。小室侵袭实验表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组干预都显著抑制了HepG2细胞的侵袭能力（P<0.01），与TFL组比较，TFL+XL019组的抑制作用明显增强（P<0.05），TFL+TPI-1组的抑制作用则显著减弱（P<0.01）。荧光免疫结果表明，TFL的干预上调HepG2细胞上皮-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达，同时下调波形蛋白（Vimentin）的表达，这种作用在TFL+XL019组中更强，在TFL+TPI-1组中则有所减弱；Western blot结果表明，与空白组比较，TFL组、TFL+XL019组、TFL+TPI-1组并未影响JAK2和STAT3蛋白的表达水平，但是明显降低磷酸化（p）-JAK2与p-STAT3表达水平（P<0.05，P<0.01），与TFL组比较，TFL+XL019组中的p-JAK2与p-STAT3的表达水平显著降低（P<0.01），TFL+TPI-1组中p-JAK2与p-STAT3的表达水平显著升高（P<0.01）。与空白组比较，TFL组显著增加了含sh2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶-1（SHP-1）表达水平（P<0.01）。结论 TFL可以抑制HepG2的增殖，促进其凋亡，还可以通过逆转HepG2细胞EMT的过程以减弱其迁移与侵袭的能力，这些作用可能与TFL激活SHP-1阻断JAK/STAT3信号通路相关。     

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a（miR-133a）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位；噻唑蓝（MTT）比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响；流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）mRNA表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt，mTOR的表达。结果 与空白组比较，启膈散可抑制EC9706细胞的增殖（P<0.01），并呈剂量依赖性，筛选30%抑制浓度（IC₃₀）40 mg·L^-1和半抑制浓度（IC₅₀）80 mg·L^-1进行后续实验；与空白组比较，抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖（P<0.01），筛选抑制剂0.25 μmol·L^-1进行后续实验；与空白组比较，启膈散80 mg·L^-1组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率（P<0.05），启膈散40 mg·L^-1组可促进EC9706细胞晚期凋亡率（P<0.05），与Akt/mTOR抑制剂联合用药后，可协同增效。与空白组比较，各组均能提高miR-133a表达（P<0.05），其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较，各组均能够均可明显降低Akt，mTOR蛋白表达（P<0.05），与单独用药比较，抑制剂与中药联合应用组Akt，mTOR的蛋白表达有所降低。结论 启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长，促进EC9706细胞的凋亡，其抑制机制可能与调控miR-133a的表达，影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的 观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测华良姜素（0、5、10、25、50、100、150、300 μmol·L^-1）对HepG2细胞不同时间（24、48、72 h）的增殖抑制作用；异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡试剂盒检测华良姜素（0、3、15、75 μmol·L^-1）对HepG2细胞的凋亡作用；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响；转录组学分析华良姜素（15 μmol·L^-1）对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证差异基因［TEK、血小板源性生长因子α受体（PDGFRA）、脾酪氨酸激酶（SYK）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽（PIK3CG）、Janus激酶3（JAK3）、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2（MAGI2）］mRNA相对表达。结果 与空白组比较，华良姜素组HepG2细胞的增殖降低（P<0.05，P<0.01）；凋亡率升高（P<0.01）；Bax蛋白表达水平升高（P<0.05，P<0.01），Bcl-2的蛋白表达水平降低（P<0.01）；转录测序得到59 000个受调控的表达基因，受调控显著差异表达基因125个，其中表达上调差异基因47个，表达下调差异基因74个，京都基因和基因组数据库（KEGG）分析显示，加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较，华良姜素组（15 μmol·L^-1）TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA 表达水平降低（P<0.01）。结论 采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖，初步验证其凋亡，可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础，同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨金骨莲提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的 探讨金骨莲提取物（JGL）对炎症的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白组（10%胎牛血清），脂多糖（LPS）模型组（0.5 mg·L^-1），JGL给药组（10，20，40，60，80，120，160，200，250，300 mg·L^-1），JGL给药组同时给予LPS刺激（0.5 mg·L^-1），培养24 h进行后续检测。采用细胞增殖与检测试剂盒（CCK-8）试剂检测JGL对RAW264.7细胞增殖活性的影响；采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6，IL-10和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测炎症相关因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS），前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）/环氧合酶-2（COX-2）的表达及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）途径关键蛋白的活化。结果 与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）刺激24 h后能显著促进RAW264.7细胞增殖（P<0.01），与模型组比较，JGL对细胞增殖无显著显著影响；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）能显著增加NO，IL-1β，IL-6，IL-10和TNF-α的释放（P<0.01），与模型组比较，JGL（20~300 mg·L^-1）给药24 h后能剂量依赖性显著抑制NO的释放（P<0.01）；与模型组比较，JGL各剂量组IL-1β，IL-6，IL-10均明显降低（P<0.05，P<0.01），但对TNF-α的释放未见明显的抑制作用；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）能显著诱导iNOS，PTGS2/COX-2基因表达（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，JGL各剂量组能下调iNOS，PTGS2/COX-2 mRNA的表达（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，LPS（0.5 mg·L^-1）组PI3K/Akt通路显著活化（P<0.01），JGL（10，20，40，80 mg·L^-1）显著降低PI3K p110和p-PI3K p85蛋白及Akt磷酸化水平（P<0.01），抑制PI3K/Akt通路活化。结论 金骨莲提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应，减少炎症因子的释放，其抗炎作用与抑制PI3K/Akt途径有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法 以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L^-1。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC₅₀，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L^-1开展实验。用0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（P<0.01），细胞凋亡明显增加（P<0.05，P<0.01），细胞于有丝分裂准备期（G₂）期阻滞明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

目的 探讨小金丹提取物（XJD）对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法 以脂多糖（LPS）、白细胞介素-4（IL-4）刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞增殖活性检测（CCK-8）法检测10~80 mg·L^-1对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-6（IL-6）释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的mRNA表达;采用流式细胞分析法检测CD206表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路关键蛋白的活化。结果 10~80 mg·L^-1 XJD对0.5 mg·L^-1 LPS和20 μg·L^-1 IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。与空白组比较,LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括显著增加NO、IL-6释放（P<0.01）,明显上调M1型基因白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素氧化环化酶-2（COX-2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达（P<0.01）。同LPS诱导组比较,20~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著抑制NO、IL-6的释放（P<0.01）;10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-α mRNA表达（P<0.01）。与空白组比较,IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括CD206⁺巨噬细胞比例显著升高（P<0.01）,显著上调M2型基因精氨酸-1（Arg-1）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA表达（P<0.01）。同IL-4诱导组比较,10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著降低CD206⁺ M2型巨噬细胞比例（P<0.01）;显著下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β₁ mRNA表达（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3-激酶p110（PI3K-p110）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达均显著上调（P<0.01）;同LPS或IL-4诱导组比较,XJD能明显降低PI3K p110蛋白表达和p-Akt水平（P<0.05,P<0.01）。结论 小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化,机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。     

基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 采用分子对接和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测苦参碱衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对热休克蛋白90（Hsp90）的调控作用；采用噻唑蓝（MTT）比色法检测衍生物C4（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μmol·L^-1）对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响；采用克隆形成实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞增殖能力的影响；采用细胞划痕实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞迁移能力的影响；采用Transwell实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞侵袭能力的影响；采用流式细胞术检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞凋亡能力的影响；采用Western blot检测衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、表皮生长因子受体（EGFR）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X基因（Bax）、B细胞淋巴瘤2相关的细胞死亡激动剂（Bad）蛋白表达量的影响。结果 衍生物C4能有效地与Hsp90蛋白通过水介导的氢键网络与天冬氨酸-51（ASN-51）、甘氨酸-135（GLY-135）、苯丙氨酸-138（PHE-138）的残基相互作用，和PHE-138苯环之间的π-π堆积相互作用有助于增强其亲和力，与空白组比较，衍生物C4可以明显的下调A549细胞内Hsp90蛋白表达（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以明显降低细胞活力（P<0.05，P<0.01）；给药24、48、72 h，衍生物C4对A549细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（12.32±0.14）、（7.79±0.16）、（3.26±0.09） μmol·L^-1；与空白组比较，衍生物C4（2、4、8 μmol·L^-1）使A549细胞克隆形成能力明显下降（P<0.05，P<0.01），且呈浓度依赖性；与空白组比较，衍生物C4可以明显抑制A549细胞的迁移、侵袭能力（P<0.05，P<0.01），其中浓度在8 μmol·L^-1时效果最为显著（P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以显著诱导A549细胞发生凋亡反应（P<0.01），在0、2、4、8 μmol·L^-1时细胞凋亡率分别为（2.28±0.35）%、（4.97±0.36）%、（8.86±0.50）%、（20.67±0.99）%；与空白组比较，衍生物C4可以明显增加Caspase-9、Bax、Bad蛋白表达量（P<0.05，P<0.01），使PI3K、p-PI3K、p-Akt、EGFR、Bcl-2蛋白表达量发生不同程度降低（P<0.05，P<0.01），Akt蛋白的表达量没有发生明显的变化。结论 衍生物C4发挥抗肿瘤的作用是通过抑制细胞活力、增殖能力、迁移和侵袭能力，并且促进细胞的凋亡反应，其发挥作用的机制可能是通过抑制Hsp90/PI3K/Akt信号通路来实现的。     

基于Akt/JNK/p38 MAPK信号通路探讨健脾活骨方对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察健脾活骨方（JPHGP）对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用,并基于蛋白激酶B/c-Jun氨基末端激酶/p38 MAPK（Akt/JNK/p38 MAPK）信号通路探索相关作用机制。方法 通过鸡胚尿囊膜实验、胸主动脉环实验和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的迁移、侵袭、黏附和管腔形成实验,在有或无酒精诱导条件下,观察JPHGP不同质量浓度8、16、32 μg·L^-1对血管新生的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HUVEC中Akt、JNK、p38 MAPK等磷酸化表达水平。结果 与正常组比较,模型组动脉环周围微血管数目及长度均减少,HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力降低（P<0.05,P<0.01）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组作用后能明显升高鸡胚尿囊膜新生血管长度（P<0.05,P<0.01）,与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组能浓度依赖地增加胸主动脉环周围微血管数量（P<0.05,P<0.01）,JPHGP 32 μg·L^-1组能升高胸主动脉环周围微血管长度（P<0.05）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组均能增强HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力。Western blot检测结果表明,与正常组比较,模型组中的p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组的p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）,JPHGP 16、32 μg·L^-1组的p-JNK/JNK的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 JPHGP对酒精致血管内皮细胞功能损伤具有保护作用,其机制可能与激活Akt/JNK/p38 MAPK信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP“健脾活血”功效阐明提供一定的科学依据。     

去氢木香内酯激活凋亡与自噬抑制人肺癌A549细胞生长

目的 研究去氢木香内酯（DL）对人肺癌细胞A549增殖、凋亡、自噬的影响,以期阐明其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）研究0、5、10、15、20、25 μmol·L^-1 DL对人肺癌A549细胞增殖能力的影响。通过细胞克隆形成实验研究DL对A549细胞克隆形成能力的影响。选择10、20 μmol·L^-1作为DL低、高浓度组,采用荧光染料Hoechst 33258染色及蛋白免疫印迹法（Western blot）观察DL对A549细胞凋亡的影响。通过吖啶橙染色检测DL给药后自噬溶酶体的变化,利用免疫荧光实验和Western blot检测DL对微管相关蛋白1轻链3（LC3）表达水平的影响,通过对比DL单独给药及其分别与自噬抑制剂巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合用药对A549细胞自噬的影响。通过Western blot观察DL对A549细胞信号通路调控的作用。结果 与空白组比较,10、15、20、25 μmol·L^-1 DL组A549细胞存活率均显著降低（P<0.01）;5 μmol·L^-1 DL可显著抑制A549克隆细胞形成（P<0.01）,说明DL能够抑制人肺癌A549细胞的增殖能力。与空白组比较,DL组（10、20 μmol·L^-1）凋亡细胞数目增多,DL组（20 μmol·L^-1）中凋亡相关蛋白聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶（PARP）和B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2表达显著下降（P<0.01）。吖啶橙染色结果显示,与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）橙色荧光增强,说明自噬溶酶体的生成数量增多。DL组（20 μmol·L^-1）还能使细胞内LC3橙色荧光颗粒明显增高,LC3 Ⅱ的表达水平显著上升（P<0.01）,且加入自噬抑制剂后,A549细胞对DL作用的敏感性显著下降（P<0.01）,表明自噬参与了DL诱导的A549细胞死亡。与空白组比较,DL组（20 μmol·L^-1）能够使自噬相关蛋白3（Atg3）、自噬相关蛋白5（Atg5）的表达增加并使蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、信号传导与转录活化因子3（STAT3）的磷酸化水平下降（P<0.05,P<0.01）。结论 DL能够激活凋亡与自噬从而抑制人肺癌A549细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Akt/mTOR/STAT3信号通路有关。