Aurora激酶A调控卵母细胞减数分裂的分子机制

Aurora激酶A(AURKA)是Aurora激酶家族成员,其参与有丝分裂进入、中心体成熟和分离、双极纺锤体组装和稳定以及染色体的凝集和分离。AURKA在减数分裂过程中发挥的作用与有丝分裂类似,但其具体作用机制以及其与有丝分裂的异同尚不清楚。因此本文从AURKA在卵母细胞减数分裂中的定位与活化,及其在调控纺锤体形成、纺锤体组装检查点活化以及动粒-微管附着纠错等方面进行综述,对比AURKA在有丝分裂和卵母细胞减数分裂中的异同,为今后进一步揭示细胞分裂调控机制以及癌症和生殖等相关临床研究奠定理论基础。     

A激酶锚定蛋白9提高ERK通路活性促进肺腺癌细胞A549增殖和迁移

目的：探讨A激酶锚定蛋白9(AKAP9)对肺腺癌细胞A549的作用及其可能的分子机制。方法：通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）法检测shRNA的沉默效果;通过MTT和克隆形成实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549增殖的影响;Transwell实验检测AKAP9对肺腺癌细胞A549迁移的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测周期相关蛋白P27、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达和细胞外信号调节激酶（ERK）通路中表皮生长因子受体（EGFR）、ERK的磷酸化水平。结果：RT-q PCR和Western blot结果显示,shRNA可以有效地沉默肺腺癌细胞A549中AKAP9的表达（P<0.01）。MTT和克隆形成结果示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的增殖和克隆形成能力（P<0.01）。Transwell实验示,与对照组相比,沉默AKAP9显著抑制癌细胞A549的迁移能力（P<0.01）。流式细胞术结果示,与对照组相比,沉默AKAP9可以诱导...     

AKAP7γ在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的表达

 目的 研究小鼠卵母细胞减数分裂过程中AKAP7γ的表达情况。 方法 收集生发泡（GV）期及第2次减数分裂中期（MII期）小鼠卵母细胞,Western blot方法检测AKAP7γ 蛋白的表达及修饰情况。 结果 在小鼠卵母细胞减数分裂过程中,AKAP7γ在GV及MII期均有表达,且在MII期卵母细胞中,AKAP7γ电泳迁移率变慢,应用冈田酸及碱性磷酸酶（ALP）分别处理GV 及MII 期卵母细胞,AKAP7γ电泳迁移率差异消失。结论 随减数分裂进程,在MII期小鼠卵母细胞中,AKAP7γ发生磷酸化修饰,提示AKAP7γ不仅作为A型激酶锚定蛋白发挥支架蛋白的作用,其本身也可作为其他激酶的底物和效应分子。     

A型间隔支阻滞1例

患者男性,47岁,司机。该患于1989年10月因胸闷,心前区不适而就诊,病人发育正常,营养良好,血压17.3/12.0kPa,脉博72次/分,心界不扩大,心律整齐无杂音,胸片心影不大。心电图诊断:窦性心律,右室肥厚?1990年4月再发心前区疼痛持续10分钟,当即来我院查心电,诊断为窦性心律,间隔支阻滞A型。 讨论:左束支的间隔支阻滞近年来已日益受到临床和心电图工作者的重视。但单靠心电图难以做出诊断,应结合心电向量图及临床资料才能做出正确诊断。Demoulin等于1972年对20例正常心脏解剖学研究发现左室内传导束主要有三组,分别为左前支,左后支和抵达室间隔的中隔支。心电图诊断间隔支阻滞分A型和B型。A型:(1)右心     

绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响

目的　利用在培养液中添加绵羊卵泡液和次黄嘌呤 ,抑制卵母细胞GVBD发生 ,延长转录活性 ,从而使卵母细胞真正成熟 ,提高胚胎质量及生产效率。方法　利用体外成熟技术对有屠宰采集的绵羊卵母细胞进行培养 ,培养液中添加卵泡液及次黄嘌呤 ,检查成熟效果。结果　将卵母细胞培养在 5 0 %和 10 0 %的卵泡液中 ,2 4h后处于GV期的卵母细胞分别为 19% (8 4 2 )和 33 3% (13 39)。在含有 4mmol L次黄嘌呤的培养液中 ,2 4h后有2 1 6 % (16 74 )的卵母细胞处GV期 ,而对照组中只有 6 % (3 5 0 ) ,经过次黄嘌呤处理的卵母细胞多数都停滞于PⅠ期(44 6 % ,33 74 )。在 4mmol L次黄嘌呤培养液中添加FSH并未使受到抑制的卵母细胞诱导成熟。结论　卵泡液和次黄嘌呤只能在有限的程度上抑制减数分裂的重新启动 ,并对减数分裂的全过程都有影响 ,这种影响程度与抑制因子的浓度相关 ,存在明显的剂量效应。     

m6A修饰调控卵母细胞及早期胚胎发育的研究进展

N6-甲基腺苷(m6 A)修饰是广泛存在的一种表观修饰,在有性生殖卵子的发育与早期胚胎成熟中发挥重要作用.m6 A修饰呈现出动态变化,m6 A及相关甲基化酶、去甲基化酶和甲基化识别酶的表达参与各种生理活动,主要在调节转录、调控相关蛋白质翻译、影响mRNA稳定性及降解等方面发挥作用.围绕m6 A修饰在生殖领域的研究大多围...     

小鼠窦前卵泡培养成熟后卵母细胞纺锤体的变化

目的小鼠窦前卵泡体外培养得到成熟卵母细胞,观察卵母细胞的染色体和纺锤体形态,分析其变化及原因。方法完整小鼠窦前卵泡培养12 d,得到的卵母细胞进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察纺锤体和染色体的形态和分布。结果经过体外培养,得到GV、M I、MⅡ期卵母细胞分别占总数27.9%、37.2%、34.9%;GV期卵母细胞存在完整的染色质圆环,11.8%的M I期卵母细胞显示正常纺锤体和染色体;38.5%的MⅡ期卵母细胞显示正常的纺锤体和染色体。结论小鼠窦前卵泡经体外培养后能够得到成熟的MⅡ期卵母细胞,但是其效率较低。原因可能是卵母细胞骨架结构的异常使染色体分离障碍,部分卵母细胞停留于M I期;同时成熟卵母细胞的受精率低也与纺锤体异常有关。     

PLCγ1在小鼠卵母细胞减数分裂恢复中的作用

目的探究磷脂酶(PLC) Cγ1在卵母细胞减数分裂恢复中的作用及机制,进一步阐明卵母细胞成熟的分子机理,为与相关的人体临床应用提供理论基础。方法利用Real-time PCR检测PLC不同亚型在颗粒细胞与卵丘细胞中的表达情况,构建体外卵泡培养模型及COC培养模型研究PLCγ1特异抑制剂U73122对LH及EGF诱导的减数分裂恢复的影响,利用钙离子荧光探针Fluo 3-AM检测胞内钙离子水平变化,酶联免疫法检测胞内cGMP水平变化,利用Real-time PCR、Western blot以及免疫组化检测不同亚型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP_3R)的表达变化情况。结果研究表明,颗粒细胞与卵丘细胞中Plcγ1 mRNA的表达均显著高于其它亚型(P0.05),U73122能够有效抑制LH和EGF诱导的卵母细胞减数分裂恢复(P0.05)以及EGF诱导的卵丘细胞内钙离子水平升高(P0.05),U73122还显著逆转了EGF介导的胞内c GMP水平下降(P0.05),此外,研究还发现在颗粒细胞,卵丘细胞与卵母细胞中Itpr1 mRNA的表达量显著高于其它亚型(P0.05),Western blot与免疫组化的结果也表明IP3R1在三种细胞中均有表达。结论 LH-EGFR信号通过PLCγ1-IP_3R1升高胞内钙离子水平诱导卵母细胞减数分裂恢复。     

激活素A、抑制素A对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的探讨激活素A(activin A,ACTA)、抑制素A(inhibin A,INHA)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)及早期胚胎发育的影响。方法①分别将ACTA、INHA分3个浓度水平(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)进行卵母细胞体外成熟培养,寻找ACTA、INHA最佳的卵母细胞体外成熟培养浓度;②比较ACTA、INHA、ACTA+INHA与对照组对卵母细胞体外成熟的影响;③比较对照组与ACTA组、INHA组和ACTA+INHA组对小鼠卵母细胞受精率及囊胚形成率的影响。结果不同浓度组之间相较,无论是ACTA还是INHA,100ng/mL和200ng/mL组的卵母细胞成熟率均比50ng/mL组高(P<0.05);100ng/mL、200ng/mL浓度间差异无统计学意义。ACTA组(100ng/mL)、INHA组(100ng/mL)和ACTA(100ng/mL)+INHA(100ng/mL)组的卵母细胞成熟率、成熟卵母细胞受精率、囊胚形成率均高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ACTA和INHA均对卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育潜能具有明显的促进作用。卵母细胞体外成熟培养的添加浓度以100ng/mL为宜。     

Experimental Study on Meiotic Spindles and Chromosomes of Mouse Mature (MⅡ) Stage Oocytes under Laser Scanning Confocal Microscopy

Taking the mouse as a model, the experimental method of observing the morphology of meiotic spindles and chromosomes in mature oocytes were investigated in order to evaluate the effects of various interventions on the quality of oocytes accurately and rapidly. Laser scanning confocal microscope (LSCM) was used to examine the meiotic spindles and chromosomes by the technologies of optical section and three-dimensional (3D) image reconstruction. The results showed that the configurations of meiotic spindles and chromosomes could be observed clearly by LSCM.The normal rate of meiotic spindles and chromosomes was 82% and 86% respectively. It was concluded that the LSCM was a valid instrument to observe the meiotic spindles and chromosomes of mature oocytes and could be used as a valid method to evaluate the quality of M Ⅱ oocytes.