正常人成纤维细胞老化过程中活性氧水平的变化

目的研究正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平的变化. 方法取常规体外培养的原代人成纤维细胞,按不同传代数(PD22-24和PD50-52)分为两组,代表老化过程中两个阶段(早期和中-晚期),用流式细胞仪检测罗丹明123显示细胞活性氧水平,同时用β-半乳糖苷酶组化染色,形态观察衰老细胞,用群体倍增时间和流式细胞周期分析显示细胞增殖情况. 结果中-晚期细胞中衰老细胞增多,活性氧水平增高,未出现增殖阻滞. 结论正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平呈升高趋势.     

成纤维细胞体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化

目的 观察正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的变化规律。方法 取正常人二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次的细胞为实验对象，通过细胞生长曲线、群体倍增时间和β-半乳糖苷酶染色等一系列检测方法，对成纤维细胞老化过程进行了观察。结果 随着成纤维细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占4％)到强(在老化细胞中占60％)的趋势、结论 为建立成纤维细胞衰老模型提供了实验依据。     

逆转录病毒转移的β—半乳糖苷酶基因在成纤维细胞中的表达

为了研究逆转录病毒载体转移外源基因的实用性，我们采用小鼠白血病病毒（ＭｏＭＬＶ）载体将大肠杆菌的β－半乳糖苷酶基因（ｌａｃＺ）和抗新霉素（Ｎｅｏ＾Ｒ）基因转移到大鼠成纤维细胞内，对整合后的前病毒结构和基因表达进行了酶活性测定和ＤＮＡ分析。结果表明：ｌａｃＺ基因可以在大鼠皮肤成纤维细胞和２０８Ｆ细胞株中较长时间地表达；前病毒整合位点。靶细胞特性和整合后的载体结构与转入基因表达的稳定性紧密相关。     

不同类型标本的衰老相关—β—半乳糖酸苷酶染色方法

目的：研究衰老相关－β－半乳糖苷酶（ＳＡ－β－Ｇａｌ）组化染色在不同类型组织切片中的应用。方法：比较血涂片、冰冻切片及石蜡切片在不同条件下ＳＡ－β－Ｇａｌ的显色效果。结果与结论：冰冻切片结果良好；石蜡切片经抗原修复后，结果不及未经抗原修复者；血涂片以４０ｇ／Ｌ多聚甲醛固４５ｍｉｎ者效果最佳。ＳＡ－β－Ｇａｌ可用于不同类型的组织标本。     

长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用

目的 :分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用。方法 :用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞 ,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 ,荧光分光光度计检测活性氧 ,电子自旋共振波谱仪检测自由基。结果 :110～ 12 0kJ·m-2 的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡 ,甘露醇能够拮抗这种作用 ,照射样品中发现活性氧生成增加 ,并检测到了羟自由基信号。结论 :低辐照度UVA(0 .6mW·cm-2 )照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡 ,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用。     

不同浓度葡萄糖诱导皮肤成纤维细胞老化的实验观察

背景 衰老是生理或病理过程综合作用的必然结果.研究如何延缓衰老,尤其是病理性衰老,可为许多疾病的治疗提供新的思路.而建立老化细胞模型正是衰老相关研究的基石.目的 探究含不同浓度葡萄糖的DMEM培养液诱导皮肤成纤维细胞老化的效果,为衰老研究提供实验基础.方法 分别采用含5.5 mmol/L、15 mmol/L、25 mm...     

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ作用中活性氧水平及p22phox的表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预心肌成纤维细胞时活性氧的改变及可能的产生途径,为防治心室重塑发展提供思路.方法 培养出生2～3 d大鼠心肌成纤维细胞,分为正常对照组,Ang Ⅱ(10-7mol/L)组,APO(100 μmol/L)组,APo+AngⅡ(APO 100 μmol/L培养1 h后加入终浓度10-7mol/L AngⅡ)组.干预48 h后应用荧光显微镜观测活性氧水平;免疫组织化学法检测p22phox蛋白表达.结果 AngⅡ组活性氧荧光最强,APO+AngⅡ组明显减弱,对照组和APO组最弱.组化染色结果显示对照组和APO组几乎未见p22phox蛋白阳性表达;AngⅡ组细胞普遍阳性表达,显著高于其他3组;APO+AngⅡ组稍强于对照组和APO组,但无显著性差异.结论 AngU可能通过增强p22phox蛋白表达,导致NADPH氧化酶途径产生活性氧增多.     

间充质干细胞培养上清液抑制成纤维细胞的衰老

目的: 探讨人脐带间充质干细胞培养上清液对人皮肤成纤维细胞的抗衰老作用。方法: 将原代人皮肤成纤维细胞分为正常对照组、H2O2组、培养上清液组和H2O2+培养上清液组。其中,H2O2组和H2O2+培养上清液组中细胞皆采用200 μmol/L H2O2预先处理,以诱导细胞衰老模型。采用β 半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞β 半乳糖苷酶活性;DAPI染色检测细胞核体积变化;采用实时荧光定量PCR法（RT qPCR）检测细胞中P53和P21的 mRNA转录水平;蛋白质印迹检测P53 蛋白表达。结果： 与正常对照组相比,H2O2处理后与细胞衰老相关的β 半乳糖苷酶活性明显增强、β 半乳糖苷酶阳性细胞百分比明显增多（P＜0.05）;细胞核体积明显变大,衰老细胞明显增多（P＜0.05）;P53和P21 mRNA转录水平明显升高（P＜0.05）,并且P53蛋白表达增强。经间充质干细胞培养上清液处理后,上述衰老相关指标均明显改善（P＜0.05）。 结论： 人脐带间充质干细胞培养上清液可抑制H2O2诱导的成纤维细胞衰老进程。     

玉屏风散对紫外线致人皮肤成纤维细胞光老化的防护作用

目的研究玉屏风散对人皮肤成纤维细胞光老化的保护作用及其作用机制。方法紫外线(UVA+UVB)照射人皮肤成纤维细胞,建立光老化模型,使用三种不同浓度的玉屏风散含药血清进行干预,通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老情况,ELISA法检测细胞DNA总体甲基化水平,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果与正常组相比,模型组细胞β-半乳糖苷酶染色结果阳性率明显上升,DNA总体甲基化水平降低,细胞形态发生明显改变,胞浆中可见大量空泡形成,线粒体显著肿胀变形,形态不规则。经玉屏风散干预后,人皮肤成纤维细胞的衰老程度有所减轻,β-半乳糖苷酶染色结果细胞阳性率明显下降,细胞的DNA总体甲基化水平有所升高,对成纤维细胞内细胞器尤其是线粒体的破坏明显减轻,细胞形态也有明显的改善。结论玉屏风散可能通过调控细胞DNA总体甲基化水平,保护细胞的形态,进而对于人皮肤成纤维细胞的光老化具有防护作用,其中又以大剂量玉屏风散的抗衰效果为佳。     

成纤维细胞体外培养过程中超微结构改变的观察

目的 观察正常人成纤维细胞体外培养过程中超微结构的变化规律。方法 将正常人二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次的细胞为实验对象，通过倒置相差显微镜与透射电镜对各代细胞进行了观察。结果 45代以内的细胞生长较迅速，45代后的细胞生长逐渐缓慢，65代细胞几乎无增殖趋势。40代以内细胞的超微结构无明显变化，41—65代细胞出现核膜内折，细胞核／浆比例减小，细胞表面突起和微绒毛减少。结论 各代成纤维细胞超微结构改变程度不同。41代后变化明显。     

表皮细胞体外培养过程中生物学特性改变的观察

目的 通过观察表皮细胞体外增殖与老化规律，为选择合适的纽织工程化皮肤种子细胞提供依据。方法 取正常年轻人表皮细胞进行传代培养，以不同代龄细胞为实验对象，采用形态学观察、群体倍增时间(PDT)、免疫细胞化学及β-半乳糖苷酶染色等一系列方法，检测表皮细胞老化规律。结果 体外单层培养9代，P2的PDT最短，前5代增殖能力较强，P5以后PDT明显延长，P8细胞不再增殖；随着细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占9％)到强(在老化细胞中占65％)的趋势。结论 建立了体外培养正常人表皮细臆的衰老模型，第1-5代表皮细胞(拱者年龄16～18岁)可作为构建组织工程化皮肤的种子细胞。     

茯苓蜂皇浆对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF 2BS株)为材料。当细胞培养至25代时,将细胞分为加茯苓蜂皇浆的给药组和不加茯苓蜂皇浆的对照组。2组在相同条件下传代培养,直至细胞停止增殖。结果表明:给药组细胞能生长到65代,而对照组细胞仅存活至55代。实验组细胞寿命比对照组提高18％。提示茯苓蜂皇浆对人胚肺二倍体成纤维细胞有一定的抗衰老作用。     

外源性类活性氧诱导直肠癌细胞凋亡的机制

目的:探究类活性氧HClO诱导正常细胞和直肠癌细胞凋亡的潜在机制。方法:用不同浓度的次氯酸干预内皮细胞Ealy926和直肠癌细胞HCT-8,通过MTT法检测细胞增殖率;吉姆萨染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:MTT结果显示HClO抑制Ealy926和HCT-8的增殖(P均<0.05),呈浓度依赖性;吉姆萨染色显示,Ealy926和HCT-8细胞经不同浓度HClO干预后细胞的形态学发生明显的变化,如细胞皱缩、细胞核边缘化、细胞碎裂等;流式细胞术检测结果显示,HClO使内皮细胞Ealy926和直肠癌细胞HCT-8的凋亡率增加(P均<0.05),呈浓度依赖性。结论:添加外源性类活性氧(HClO)能够抑制内皮细胞Ealy926和直肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞内ROS释放,造成细胞的氧化损伤,使细胞凋亡,高浓度直接导致细胞坏死。分析结果发现直肠癌细胞HCT-8对类活性氧HClO的敏感性高于内皮细胞Ealy926。     

人眶后成纤维细胞和皮肤成纤维细胞超微结构的比较

目的：为解释甲状腺相关眼病的器官特异性,建立体外人眶后成纤维细胞（ＲＦ）和皮肤成纤维细胞（ＤＦ）的培养方法,并在形态和超微结构上比较两种细胞的差异。方法：采用扫描电镜和透射电镜技术进行观察比较。结果：ＲＦ除生长速度较慢,光镜下细胞多形性和胞浆富颗粒性与ＤＦ不同外,其在扫描电镜和透射电镜下的超微结构间未见明显差异。结论：不同组织来源的成纤维细胞具有不同的生物活性,推测可能与其不同的表现型有关。     

反应氧族促进血管生成的作用及其脑内意义

反应氧族（reactive oxygen specise,ROS）是细胞有氧代谢产生的物质,在脑缺血发生与进展的过程中扮演着重要角色。以往研究多以消除ROS 作为神经保护的重要途径。近年研究表明ROS 不只介导缺血后脑组织的损伤,更是重要的信号通路分子﹑参与调控缺血后的组织修复。一定含量的ROS 可激活细胞增殖、细胞迁移,激活血管生成的相关通路,促进血管生成。因此,全面了解ROS 在脑缺血后动态过程中的作用,合理调控脑缺血后组织中ROS 的含量,可促进受损区域的血管生成,对及时恢复血供、保护神经功能具有重要意义。     

流式细胞术检测细胞内活性氧的方法

目的：流式细胞术检测NB4和U937细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS)的水平。方法双氢罗丹明123（DHR）以不同的时间孵育细胞（1、6、24h）,DHR可被细胞内ROS氧化为罗丹明123,通过流式细胞仪来检测细胞内罗丹明123的荧光,同时设立阴性及阳性对照。结果1μmol/L DHR孵育细胞,1－24h NB4和U937细胞内的平均荧光强度分别从19．20增加到384．38和12．31增加到97．15。结论适当延长DHR孵育时间可检测不同细胞系ROS基准水平的差异。     

流式细胞术检测细胞内活性氧的方法

目的流式细胞术检测NB4和U937细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。方法双氢罗丹明123(DHR)以不同的时间孵育细胞(1、6、24h),DHR可被细胞内ROS氧化为罗丹明123,通过流式细胞仪来检测细胞内罗丹明123的荧光,同时设立阴性及阳性对照。结果 1μmol/L DHR孵育细胞,1～24h NB4和U937细胞内的平均荧光强度分别从19.20增加到384.38和12.31增加到97.15。结论适当延长DHR孵育时间可检测不同细胞系ROS基准水平的差异。