白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM 0．8％BSA 1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液，分别添加LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ，以研究LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明，LIF促进2—8细胞胚胎发育至桑椹胚，同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎体外发育的影响

将从绵羊卵巢采集的卵母细胞成熟培养22~24h;成熟卵母细胞去除颗粒细胞,选择排出第一极体的卵母细胞,用5μmol/L A23187(5min)联合2mmol/L 6-DMAP(4h)进行孤雌激活;激活后的卵母细胞在培养液中进行培养。研究氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎早期体外发育的影响。结果显示:(1)氨基酸能促进胚胎体外发育,0~24h培养添加抑制卵母细胞的卵裂,24h后培养添加比全过程培养添加更能促进胚胎体外发育;(2)24~72h培养添加必需氨基酸(EAA),能促进胚胎体外发育;(3)半胱胺添加量0~100μmol/L,随浓度增高各项发育指标呈增高趋势,添加100~200μmol/L,随浓度增高各项发育指标呈下降趋势。     

氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎体外发育的影响

将从绵羊卵巢采集的卵母细胞成熟培养22-24h;成熟卵母细胞去除颗粒细胞,选择排出第一极体的卵母细胞,用5μmol／LA23187（5min）联合2mmol／L 6-DMAP（4h）进行孤雌激活;激活后的卵母细胞在培养液中进行培养。研究氨基酸和半胱胺对绵羊胚胎早期体外发育的影响。结果显示：（1）氨基酸能促进胚胎体外发育,0-24h培养添加抑制卵母细胞的卵裂,24h后培养添加比全过程培养添加更能促进胚胎体外发育;（2）24～72h培养添加必需氨基酸（EAA）,能促进胚胎体外发育;（3）半胱胺添加量0～100μmol／L,随浓度增高各项发育指标呈增高趋势,添加100～200μmol／L,随浓度增高各项发育指标呈下降趋势。     

氨基酸和牛磺酸对绵羊体外受精胚胎体外培养的影响

本文在KSOM培养液中添加牛磺酸和NEAA、EAA ,研究氨基酸对绵羊胚胎体外培养的影响。研究表明 :①牛磺酸、NEAA可以显著提高胚胎的桑椹胚和囊胚发育率 ;②EAA能促进胚胎由囊胚向孵化囊胚发育 ;③NEAA和EAA可促进胚胎的囊胚发育和孵化囊胚的发育。     

PLCγ1基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响

旨在探究磷脂酶Cγ1（phospholipase Cgamma 1,PLCγ1）基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响,为揭示PLCγ1基因在早期胚胎发育过程中的作用机制奠定基础。本研究选取包裹3层以上颗粒细胞的绵羊卵母细胞为试验材料,体外培养成熟后将其分为两组,利用显微注射技术将PLCγ1基因导入MⅡ期（减数第二次分裂中期）卵母细胞（n=127）中为试验组,以显微注射空载体pcDNA3.1-EGFP作为对照组（n=120）,经48 h后统计其卵裂率;并利用Ca²⁺探针Rhod 2-AM监测MⅡ卵母细胞和显微注射后16、48、72、96、120 h时各时期卵母细胞以及早期胚胎内Ca²⁺波动。结果显示,PLCγ1基因显微注射后卵母细胞被激活,卵裂率为（（19.67±0.2）%,P<0.01）,桑椹胚发育率为（（9.00±0.17）%,P<0.05）;PLCγ1基因注射后,卵母细胞和早期胚胎不同发育时期有Ca²⁺浓度变化,可观察发现Ca²⁺主要分布在胞质中且注射48 h时可达到峰值（P<0.01）。结果表明,PLCγ1基因可以引起绵羊卵母细胞发育过程中发生Ca²⁺振荡,启动其卵裂,并促使早期胚胎的继续发育。     

PGI2对缺少内源性PGs的绵羊早期胚胎体外发育的影响

试验旨在探讨添加外源Iloprost（PGI₂的稳定类似物）对缺少内源性前列腺素（PGs）的绵羊早期胚胎体外发育的影响。常规体外受精,通过在体外培养液中单独或联合添加前列腺素合成限速酶COX-1和COX-2的特异性抑制剂SC560和NS398,观察COX-1和COX-2对绵羊早期受精胚胎体外发育的影响。添加抑制剂NS398后,再协同添加不同浓度Iloprost,观察PGI₂对绵羊早期体外胚胎发育的具体作用,并对孵化囊胚的细胞数进行分析。结果显示,在卵裂率和囊胚率方面,单独添加NS398与同时添加SC560和NS398组间差异不显著（P>0.05）,而与对照组间差异显著（P<0.05）。添加NS398后,再添加不同浓度的外源性Iloprost可代替胚胎内源性PGI₂的作用,基本消除COX-2抑制剂对绵羊早期胚胎体外发育的不利影响。Iloprost的浓度以1×10^-6 mol/L为宜,H33342染色结果差异不显著（P>0.05）。本试验结果表明,胚胎内源性COX-2对绵羊早期胚胎中PGI₂的合成起主要调控作用。外源添加Iloprost可补偿胚胎内源性PGI₂的缺失作用,解除NS398对COX-2的特异性抑制作用,最终促进绵羊早期胚胎的体外发育。     

氨基酸对哺乳动物胚胎体外发育的影响

在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育,提高囊胚率和孵化率,增加胚胎的细胞数。本文对氨基酸在胚胎体外发育中的作用进行了综述,并对生殖道液、胚胎体外培养液和胚胎内氨基酸浓度的差异进行了比较。     

体外培养体系对牛体外受精胚胎性比的影响

研究了不同体外培养体系对牛体外受精胚胎性比的影响。结果表明，添加血清的2组培养系统中所得雄性囊胚与雌性囊胚的性比虽偏离了1：1，但差异不显著（P〉0．05），而总的体外胚胎的性比则显著偏离了1：1（P〈0．05）。这说明在体外培养系统中雄性胚胎比雌性胚胎发育能力更强，并且血清的存在对于雄性胚胎的发育有明显的促进作用。     

超数排卵对家兔早期胚胎体外发育的影响

为探讨超数排卵对家兔早期胚胎体外发育能力的影响,收集自然发情组和超数排卵处理组交配72 h后家兔胚胎,对经筛选合格的胚胎以小鼠成纤维细胞为饲养层进行体外培养,以自然发情交配的家兔胚胎为对照,观察培养96 h贴壁情况和内细胞团传代能力.超数排卵处理的家兔交配后经筛选所获得的可用胚胎数量增多;其96 h贴壁率和成功传代内细...     

Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响

本研究旨在探讨PGI2类似物iloprost对猪胚胎体外发育的影响。试验以IVF胚胎为研究对象,分别在不同时期(0、24、48、72h)将不同浓度(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol.L-1)iloprost加入到猪胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方案,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb、pparδ、pdk、cpt2)的表达水平,分析iloprost影响胚胎发育的机制。结果显示,最佳的添加方案为,在受精后48h加入2.0μmol.L-1 iloprost,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著高于(P<0.05)对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22);添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度也显著加快(P<0.05),脂肪酸代谢相关基因cox2、creb、pparδ、cpt2的表达量上升,糖代谢相关基因pdk表达量无显著变化。结果表明,PGI2类似物iloprost可以促进胚胎降解脂肪酸,为胚胎发育提供能量,提高了胚胎体外发育能力。     

提高绵羊早期体外胚胎发育效率的研究

哺乳动物胚胎体外发育培养技术是胚胎发育生物学、转基因、动物克隆等研究的重要技术平台.因此,建立稳定的体外胚胎培养体系和提高胚胎发育效果显得尤为重要.     

添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响

为了提高牛体外胚胎囊胚发育率,添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎进行体外培养。分别采集发情周期D0、D2、D4和D7山羊血清（发情当天为D0）,灭活除菌备用。结果表明不同发情时期羊血清对孤紫激活胚胎孵裂率影响差异不显著,囊胚发育率分别为29.5%、32.4%、33.9%和41.3%,D7血清能显著提高囊胚发育率（P＜0.05）,且扩张和孵化胚出现较早。添加D0血清体外受精胚胎卵裂率较高,但对囊胚发育率影响差异不显著。说明孤紫激活和体外受精胚胎发育有差异,D7血清对胚胎后期发育有利。受精胚无血清培养3d后添加D7血清,囊胚发育率为42.9%,是较为理想的培养方法。     

广西沼泽型水牛白细胞介素-10和干扰素-γ基因的克隆及其序列分析

将本地沼泽型成年水牛外周血单核细胞(PBMC)在刀豆素A(ConA)的刺激下体外培养,提取培养的单核细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增水牛白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ),并克隆到pMD18-T载体上,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定筛选阳性克隆,然后进行测序。序列分析结果显示:IL-10开放阅读框(ORF)由536个核苷酸组成,共编码178个氨基酸;在核苷酸水平上与印度水牛、牛、绵羊、猪、马、人和鼠的IL-10基因的同源性为75.9%～99.6%;氨基酸的同源性为74.2%～100%。IFN-γ的ORF由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸;在核苷酸水平上与印度水牛、牛、绵羊、猪、马、人和鼠的IFN-γ基因的同源性为60.7%～99.6%;氨基酸的同源性为40.6%～100%。     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

氨基酸对胚胎体外发育的影响

1 前言 氨基酸是胚胎培养液的重要成分,在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育[1],提高囊胚率、孵化率和胚胎质量,使胚胎的细胞数增加[2].但不同氨基酸对胚胎发育的作用不同,不同添加方式其效果也不一样.Bavister和他的同事对小鼠的研究工作,第一次揭示了氨基酸在体外胚胎培养中的作用.     

绵羊磷脂酶C-γ1对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞成熟率可作为衡量体外培养卵母细胞质量和发育能力的指标。本研究旨在探讨PLC-γ1是否参与了绵羊卵母细胞的体外成熟及其影响。将绵羊卵母细胞在含有不同浓度的U73122（PLC抑制剂））及m-3M3FBS （PLC激活剂）的成熟培养液中进行培养,每个浓度150个细胞,重复试验3次,统计细胞成熟率、卵裂率及桑葚胚率以供筛选出PLC-γ1的最佳抑制及促进浓度。qPCR检测0.5 μmol·L^-1 U73122及0.5 μmol·L^-1 m-3M3FBS处理后48 h的卵母细胞中PLC-γ1、BAK、BAX、CASP3、CASP8、P53、BCL6基因mRNA水平表达情况,Western blot检测0.5 μmol·L^-1 U73122及0.5 μmol·L^-1 m-3M3FBS处理后48 h的卵母细胞中PLC-γ1、BAK、BAX、CASP3、CASP8、P53、BCL6蛋白的表达情况。每个浓度150个细胞,重复试验3次。在绵羊卵母细胞中,0.5 μmol·L^-1 U73122是促进成熟的最佳浓度,0.5 μmol·L^-1 m-3M3FBS是抑制成熟的最佳浓度。0.5 μmol·L^-1 U73122处理组卵裂率和囊胚率均显著低于对照组。0.5 μmol·L^-1 m-3M3FBS处理组卵裂率和囊胚率均显著高于对照组。通过qPCR检测结果显示,与对照组相比,U73122组中BAK、BAX、CASP3、CASP8、P53基因mRNA表达量显著上升,PLC-γ1、BCL6基因mRNA表达量显著下降;m-3M3FBS组则与之相反。Western blot结果显示,与对照组相比,U73122组中BAK、BAX、CASP8蛋白表达量显著增多,PLC-γ1、BCL6蛋白表达量显著减少,P53和CASP3蛋白表达量无明显变化。m-3M3FBS组中PLC-γ1、BCL6蛋白表达量显著增多,BAX、CASP3、P53蛋白表达量显著减少,BAK、CASP8蛋白表达量无明显变化。综上所述,本研究表明PLC-γ1在绵羊卵母细胞的体外成熟培养中发挥重要作用,其可调节卵母细胞的成熟以及早期胚胎的发育能力。     

绵羊白细胞介素2基因的克隆与表达载体构建

从绵羊血中分离白细胞,提取绵羊白细胞RNA,利用RT-PCR、PCR扩增绵羊白细胞介素2(OvineIL-2)基因。将OvineIL-2PCR产物与TE载体定向连接,用SaLI和BamHI双酶切重组TE,利用低溶点胶回收500bp大小的片段;将其补平后与PPSD质粒连接,用EcoRI酶切鉴定,找出正向连接重组质粒。用BamHI酶切重组PPSD质粒,低熔点胶回收2500bp大小的片段;将其与经BamHI酶切去磷酸化的PME290表达质粒连接,筛选出阳性重组PME290,即为OvineIL-2基因表达载体。     

兔超数排卵效果及早期胚胎体外发育的研究

实验分30、40、50和60 IU PMSG和150 IU hCG 4组超数排卵处理,对卵巢进行组织学观察,获得胚胎进行体外培养,研究其发育形态学变化。结果表明:注射30 IU PMSG超排效果较好,平均回收卵(18.4±11.1)枚,回收率89.7%;4种剂量显著(P<0.05)影响充血卵泡中颗粒细胞层数和直径,对原始卵泡没有显著影响(P>0.05),对次级卵泡的颗粒细胞层厚、颗粒细胞层数和颗粒细胞直径有极影响显著(P<0.01);30 IU组初级卵泡中颗粒细胞直径显著(P<0.05)小于40 IU和60 IU组;实验所采用的培养体系可以使胚胎正常发育至孵化囊胚,胚胎发育速度与在体内相近,受精后62～74 h开始进入囊胚期,受精后86～98 h囊胚开始孵化,15 h所有存活胚胎全部进入孵化胚阶段,囊胚发育率85.4%,孵化率70.7%。     

活性氧对兔早期胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨活性氧-过氧化氢(H2O2)对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响。在添加不同浓度过氧化氢的含胎牛血清的TCM-199培养液中,培养兔2-细胞期胚胎的对照组、≤88μmol/L、94μmol/L、103μmol/L≥118μmol/L组的囊胚发育率分别为86%、75%、34%、26%和5%;不同发育时间添加H2O2时对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天处理组(37.14%)、第2天处理组(54.29%)与对照组(91.42%)差异显著。不同发育时间停止H2O2处理对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天不处理组(82.26%)与对照组(97.14%)无显著性差异,但与第2天不处理组(52.50%)和第3天不处理组(30.00%)有差异。可以抑制兔2-细胞期胚胎体外发育的最低过氧化氢浓度为94μmol/L。兔2-细胞胚胎体外发育过程中,16-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢都敏感,尤其是8-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢更为敏感。