槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用

目的研究槲皮素对裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤生长的影响。方法建立SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,通过比较肿瘤体积（TV）、相对肿瘤体积（RTV）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）]变化检测槲皮素对肿瘤生长的影响;采用免疫组织化学方法测试槲皮素对移植瘤微血管密度（microvessel density,MVD）的影响。结果槲皮素治疗组不同程度抑制裸鼠移植瘤的生长,腹腔注射给药4周后,TV、RTV和T/C%明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;槲皮素50 mg/kg处理组MVD值（19.35±2.88）与对照组的MVD值（42.56±4.98）比较明显降低,差异有统计学意义。结论槲皮素可抑制裸鼠人肝癌SMMC-7721移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移。     

YC-1对人肝细胞癌裸鼠移植瘤的影响及其机制

目的探讨缺氧诱导因子抑制剂（YC-1）对人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至约（100~150）mm3时,将荷瘤裸鼠随机分为两组：实验组和对照组,分别给予YC-1和二甲基亚砜,观察两组裸鼠肿瘤生长情况;应用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学方法检测移植瘤组织HIF-1α和VEGF表达。结果YC-1治疗组各时点肿瘤体积显著低于对照组(P<0. 05 );与对照组比较,实验组移植瘤组织HIF-1α mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而HIF-1α蛋白的表达显著降低 (P<0. 05 );移植瘤组织VEGFmRNA及蛋白表达均显著低于对照组 (P<0. 05 )。结论YC-1可能通过下调HIF-1α和VEGF的表达来抑制肝癌的生长。     

RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究

目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。     

牛蒡子苷元对肿瘤血管生成抑制作用的观察

目的:观察牛蒡子苷元(ARG)对裸鼠体内、体外肿瘤血管生成的影响,并探讨其作用机制。方法:利用人肝癌SMMC-7721细胞进行体内、外实验。体外实验分别采用RT-PCR、细胞免疫组化检测ARG作用前后SMMC-7721细胞中血管内皮生长因子(VEGF)基因及蛋白的表达;体内实验建立裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤模型,成瘤后ARG干预,第30天取出肿瘤组织,免疫组化检测裸鼠瘤体CD34标记的血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果:VEGF mRNA表达量经ARG及5-FU作用后,阴性对照组、3个药物组及阳性对照组依次为1.01±0.03、0.92±0.02、0.81±0.15、0.72±0.03和0.82±0.26;实验组VEGF蛋白表达率为44.16%,明显低于对照组的82.13%。ARG作用后VEGF mRNA及蛋白表达水平下降,P<0.05。裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤的MVD减少,空白对照组、药物组和5-FU组裸鼠MVD值分别为39.43±3.31、19.29±2.06和21.57±2.82,P<0.01。结论:ARG通过下调裸鼠VEGF mRNA及蛋白的表达,抑制裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤的血管生成。     

ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法 研究分为对照组和实验组。在转染后72 h采用RT-PCR和Western blot法检测细胞ILK mRNA及蛋白表达量;运用流式细胞术评价ILK-ASODN转染对肿瘤细胞周期的影响;同时将转染后的HO-8910细胞接种于裸鼠皮下,观察裸鼠体重变化、体内成瘤率、肿瘤出现的时间、肿瘤体积及重量的变化,并计算抑瘤率。结果 实验组与对照组比较,细胞的ILK mRNA及蛋白表达量显著下降、G₀/G₁期细胞明显增多,差异具有统计学意义(P＜0.01);实验组裸鼠肿瘤出现时间明显晚于对照组,肿瘤体积及重量增长速度显著减缓,差异有显著统计学意义(P＜0.01)。结论 ASODN可以阻断人卵巢癌细胞ILK基因表达,抑制细胞生长;而 ILK基因的表达沉默对裸鼠皮下移植瘤的形成具有明显抑制作用。     

肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响

目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12（TAMP12）对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721，经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株（SMMC-7721-TAMP12）及对照细胞（SMMC-7721-pcDNA3.1），实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达。将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3．1三组细胞分别接种于BALB／C^nu/nu小鼠的前肢腋下，连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况。接种4周后处死小鼠，取瘤块分别测量瘤体质量和体积，应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达：透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态；并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达。结果将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后，三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异，转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠。肉眼以察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富；电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显。基因芯片显示，该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调。结论TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用，其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关。     

CCR4对肝癌细胞索拉非尼放射敏感性及裸鼠成瘤的影响

目的 探讨CC趋化因子受体4(CCR4)对肝癌细胞索拉非尼放射敏感性及裸鼠成瘤的影响。方法 采用Western blot检测CCR4在肝癌细胞系中的表达。利用慢病毒感染构建过表达及敲减CCR4的PLC/PRF/5和SMMC-7721稳转株,并采用Western blot进行验证。采用平板克隆形成实验检测CCR4对肝癌细胞放射敏感性的影响。通过裸鼠成瘤实验检测CCR4对肝癌细胞体内成瘤的影响。结果 高转移肝癌细胞中CCR4呈高表达,低转移肝癌细胞中CCR4呈低表达。成功构建稳定过表达CCR4的PLC/PRF/5和敲减CCR4的SMMC-7721肝癌稳转株,过表达CCR4可逆转索拉非尼放疗对PLC/PEF/5的抑制作用,而敲减CCR4可增加SMMC-7721对索拉非尼放射敏感性。过表达CCR4可促进PLC/PEF/5裸鼠体内成瘤能力,而敲减CCR4可抑制SMMC-7721裸鼠体内成瘤能力。结论 CCR4高表达能显著增强肝癌PLC/PEF/5细胞对索拉非尼放射抵抗及裸鼠体内成瘤能力,而敲减CCR4则可显著增加肝癌SMMC-7721细胞对索拉非尼放射敏感性并抑制其裸鼠体内成瘤能力     

人剪切修复基因XPD转染对人肝癌细胞SMMC-7721的生物学影响

目的 将人剪切修复基因XPD稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞,观察转染后细胞内野生型p53、XPD、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)7、c-myc等基因表达的变化以及对细胞生长的影响,探讨野生型XPD基因与p53、CDK7、c-myc的相互作用及细胞凋亡机制.方法 将表达绿色荧光蛋白并含有人类全长野生型XPD的pEGFP-N2-XPD重组体质粒稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞中,选择培养基筛选单克隆稳定转染重组质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD)和稳定转染空载质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC.7721-pEGFP-N2),并将人SMMC-7721肝癌细胞作为空白对照,利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem blot法检测转染XPD基因后细胞内XPD、p53、CDK7、c-myc的表达量变化,并用细胞增殖力检测(MTT)法及流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡和细胞周期变化.结果 ①免疫荧光显微镜下,SMMC.7721.pEGFP.N2.XPD和SMMC-7721-pEGFP-N2细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明pEGFP-N2-XPD重组质粒和pEGFP-N2空载质粒成功转染.②RT-PCR检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD中p53 mRNA、XPD mR-NA表达量与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721相比均明显增高(P<0.01),CDK7 mRNA、c-myc mRNA在SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的表达量比两对照组明显降低(P<0.01),而两对照组各个基因的表达没有明显差异(P>0.05).③Western blot检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞的p53、XPD蛋白表达最较两对照组升高(P<0.01),CDK7、c-myc的蛋白相对表达量比两对照组降低(P<0.01),两对照组差异没有统计学意义(P>0.05).④M1Tr检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的细胞增殖力较对照组减弱(P<0.05),两对照组筹异没有统计学意义(P>0.05).⑤流式细胞仪检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞进入s期出现障碍,停滞在G1期的细胞增多.结论 将XPD成功稳定转染到人SMMC-7721肝癌细胞中,XPD、p53在转录和蛋白水平的表达明显升高,CDK7、c-myc表达明显降低,野生型XPD基因的过表达可能抑制CDK7、c-myc表达,改变细胞周期,并促进p53抑制肝癌细胞增长,促进细胞凋亡.     

人血管内皮生长因子shRNA对小鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的:使用VEGF shRNA真核表达载体对裸鼠的负瘤局部注射,观察对其生长影响.方法:使用VEGF shRNA 真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,观察VEGF shRNA 真核表达载体对裸鼠的负瘤局部注射后负瘤的生长变化.结果:VEGF shRNA大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,裸鼠的负瘤生长速度变慢.结论:VEGF shRNA可明显使裸鼠的负瘤生长速度变慢,为将VEGF shRNA 真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据.     

人血管内皮生长因子shRNA对小鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的：使用VEGF shRNA真核表达载体对裸鼠的负瘤局部注射,观察对其生长影响。方法：使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,观察VEGF shRNA真核表达载体对裸鼠的负瘤局部注射后负瘤的生长变化。结果：VEGF shRNA大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,裸鼠的负瘤生长速度变慢。结论：VEGF shRNA可明显使裸鼠的负瘤生长速度变慢,为将VEGF shRNA真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据。     

Ａｄ-ＩＮＧ４抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长的体内实验研究

目的　研究携带ＩＮＧ４基因的重组腺病毒（Ａｄ-ＩＮＧ４）对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１移植瘤生长的抑制作用及其潜在的分子机制。方法　将扩增的Ａｄ-ＩＮＧ４感染ＳＭＭＣ-７７２１细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中的转录。用ＳＭＭＣ-７７２１细胞建立裸鼠人肝癌移植瘤模型,予Ａｄ-ＩＮＧ４（１×１０^９ｐｆｕ／ｍｌ）５０μｌ对移植瘤瘤体注射治疗,观察肿瘤生长变化;３周后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;免疫组化法检测ｐ２１、ＣＯＸ-２、Ｆａｓ、Ｂｃｌ-２、Ｂａx、Ｃａｓｐａｓｅ-３、ＶＥＧＦ、ＣＤ３４等因子的表达。结果　Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中成功表达;Ａｄ-ＩＮＧ４对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,Ａｄ-ＩＮＧ４组瘤体显著减小（Ｐ＜０.０１）,抑瘤率达４１.６４％;免疫组化检测显示,Ａｄ-ＩＮＧ４抑癌的分子机制可能与上调ｐ２１、Ｆａｓ、Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ-３的表达及下调ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２、ＶＥＧＦ和ＣＤ３４的表达有关。结论　Ａｄ-ＩＮＧ４能有效抑制ＳＭＭＣ-７７２１裸鼠人肝癌移植瘤的生长,其机制可能通过抑制肿瘤细胞生长、血管形成和激活细胞凋亡等多个途径共同发挥抑癌效应。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤抑制作用的观察

目的 观察熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及其强度,为本药的进一步临床应用研究提供基础数据.方法 采用荷瘤裸小鼠作为移植性肿瘤实验动物模型.将裸鼠随机分为3组,每组8只,分别为阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组和熊果酸组.阳性对照组给予环磷酰胺20mg/kg,熊果酸组给药剂量为4.5mg/kg,阴性对照组给予等量无菌注射用水,每日一次腹腔注射,连续14天.给药期间定期测定动物体重和瘤体积.实验结束后处死裸鼠,取出瘤体称重,计算肿瘤抑制率.结果 给药期间动物一般状况未见明显改变,饮食未见异常,体重较实验前有所增加.熊果酸组瘤体积缩小,瘤株抑瘤率达53.7%,阳性对照组的抑瘤率为39.2%,两组与阴性对照组比较,均有显著差异(P<0.05).熊果酸组和阳性对照组的相对肿瘤体积(RTV)分别为33.16±22.36,21.61±12.88,明显低于阴性对照组(62.09±32.80)(P<0.05),两组的相对肿瘤增殖率均小于60%.结论 熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤有明显的抑制作用.     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤抑制作用的观察

目的：观察熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及其强度,为本药的进一步临床应用研究提供基础数据。方法：采用荷瘤裸小鼠作为移植性肿瘤实验动物模型。将裸鼠随机分为3组,每组8只,分别为阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组和熊果酸组。阳性对照组给予环磷酰胺20mg/kg,熊果酸组给药剂量为4.5mg/kg,阴性对照组给予等量无菌注射用水,每日一次腹腔注射,连续14天。给药期间定期测定动物体重和瘤体积。实验结束后处死裸鼠,取出瘤体称重,计算肿瘤抑制率。结果：给药期间动物一般状况未见明显改变,饮食未见异常,体重较实验前有所增加。熊果酸组瘤体积缩小,瘤株抑瘤率达53.7%,阳性对照组的抑瘤率为39.2%,两组与阴性对照组比较,均有显著差异（P〈0.05）。熊果酸组和阳性对照组的相对肿瘤体积（RTV）分别为33.16±22.36,21.61±12.88,明显低于阴性对照组（62.09±32.80）（P〈0.05）,两组的相对肿瘤增殖率均小于60%。结论：熊果酸对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤有明显的抑制作用。     

lncRNA SNHG14在甲状腺乳头状癌组织中的表达及对其癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）核内小RNA宿主基因14（small nucleolar RNA host gene 14,SNHG14）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）组织中的表达情况及对PTC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:选取2019年10月至2020年01月期间于我院甲状腺外科行手术切除的37例患者的PTC组织及配对癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测SNHG14在PTC组织和癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征的相关性,同时检测SNHG14在PTC细胞TPC-1及人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1中的表达。采用si-RNA技术下调PTC细胞TPC-1中SNHG14的表达,通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕实验和Transwell实验研究SNHG14在TPC-1细胞中的生物学功能。结果:SNHG14在PTC组织中的表达高于癌旁组织（P＜0.05）,并与淋巴结转移、病灶数有关（P均<0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期无关（P均>0.05）,同时,SNHG14在TPC-1细胞中的表达高于Nthy-ori3-1细胞（P＜0.05）。下调SNHG14后,相较于空白对照组、阴性对照组,si-SNHG14组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低（P均<0.05）。结论:SNHG14可能参与PTC的发生发展,有望成为PTC患者新的诊断标记物及治疗靶点。     

克隆化人肝癌裸鼠移植瘤株的建立及其转移性状观察

应用单个细胞克隆化技术，从已建系的人肝癌细胞（ＳＭＭＣ－７７２１）中选育出３个亚系７７２１－ＣＡ，７７２１－ＣＢ，７７２１－ＣＳ（ＣＡ、ＣＢ、ＣＳ），并进行扩大培养，将上述各亚系肝癌细胞接种到裸鼠体内，成瘤率与自发转移率以ＣＳ组最高，ＣＢ组最低。主要的转移器官是肺。原发灶和转移灶肿瘤形态结构一致。ＣＳ细胞形态及其接种的裸鼠移植瘤形态结构和ＳＭＭＣ－７７２１母系细胞基本相似。用ＡＢＣ免疫酶标法检测ＨＢｓＡｇ、ｋｅｒａｔｉｎ、ＡＦＰ、Ｈ－ｒａｓ、Ｃ－ｅｒｂ－２、Ｐ５３癌基因蛋白等肿瘤标记物，ＣＳ组裸鼠移植瘤对Ｈ－ｒａｓ、Ｃ－ｅｒｂ－２癌基因蛋白呈阳性反应，对ＡＦＰ、Ｐ５３呈弱阳性反应，而ＣＢ组裸鼠移植瘤仅对Ｋｅｒａｔｉｎ、Ｃ－ｅｒｂ－２呈弱阳性反应，对其它肿瘤标记物均呈阴性反应。     

Effects of silencing cyclooxygenase-2 expression via RNA interference on the tumorigenicity of the SMMC-7721 human hepatocarcinoma cell line

We constructed a vector carrying a shRNA sequence against cyclooxygenase-2 (COX-2) that was subsequently transfected into the human hepatocarcinoma cell line SMMC?7721. Furthermore, we established a COX-2-deficient stable cell line and a model of tumor-shRNA transplantation in nude mice. Negative shRNA was used as the control. The tumor volume in the experimental group was smaller compared to that in the control group. Hematoxylin and eosin staining indicated that the cells in the experimental group differentiated better than those in the control group. The COX-2 mRNA level in the tumor tissues injected with SMMC-7721/COX-2i was markedly downregulated compared to that in the tumor tissues injected with SMMC-7721/negative shRNA. The inhibition rate reached 68.6%. Immunohistological study showed a significantly strong COX-2 expression in the control group tumor cells, whereas the experimental group exhibited moderate expression, indicating the inhibition of COX-2 expression after transfection of cells with shRNA against COX-2. Western blot analysis further proved the inhibition of COX-2 expression. In conclusion, RNAi-mediated regulation of COX-2 expression could efficiently inhibit liver-transplanted tumor growth in BALB/c nude mice.     

腺病毒介导的肝癌自杀基因疗法的实验研究

本文观察了胞嘧啶脱氨酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5FC)自杀基因疗法对肝癌模型的治疗作用。以CMV启动子调控CD基因的重组腺病毒载体AdexCMV.CD在体外能有效转染人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,转染后的细胞体外生长能力无明显变化,对5FC的敏感性明显增高。当以AFP上游调控序列驱动CD基因的重组腺病毒载体AdexAFP.CD分别转染SMMC-7721和HepG2时,CD基因能在HepG2中表达,使HepG2对5FC的敏感性增高,但不能使SMMC-7721的生长受到5FC的抑制。[~3H]TdR掺入法观察体外旁观者效应时发现,当细胞总数中转染细胞数超过20％时,其生长明显被5FC抑制。将AdexCMV.CD直接注射入裸鼠接种SMMC-7721细胞形成的皮下肿瘤中,并全身应用5FC后,与对照组相比,肿瘤大小在开始治疗后第8天约缩小3倍,第18天约缩小4倍,以上结果表明,腺病毒介导的CD/5FC自杀基因系统能在体内、外有效地抑制肝癌的生长。以AFP上游调控序列驱动CD基因的腺病毒载体介导的基因转染能在AFP阳性的肝癌细胞中特异表达。     

ANGPTL4基因及缺失突变体对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响。方法:构建ANGPTL4基因全长及其功能结构域缺失突变体的融合表达载体,即ANGPTL4-GFP-N1、ANGPTL4-del1-GFP-N1、ANGPTL4-del2-GFP-N1、ANGPTL4-del3-GFP-N1,脂质体法将EGFP-N1空载体、ANGPTL4基因及其缺失突变体分别转染肝癌细胞SMMC-7721,G418筛选,建立稳定细胞系,用MTT试验法、细胞集落形成试验检测细胞体外生长活性和增殖能力;流式细胞仪检测ANGPTL4基因对细胞凋亡的影响;裸鼠移植瘤试验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果:ANGPTL4基因及其缺失突变体体外对肝癌细胞SMMC-7721的生长、集落形成具有明显的抑制作用(均为P<0.01);ANGPTL4全长基因及其缺失突变体ANGPTL4-del1-GFP-N1和ANGPTL4-del2-GFP-N1均对SMMC-7721细胞体内成瘤有明显抑制作用(均为P<0.01)。但转染ANGPTL4全长基因及其缺失突变体的SMMC-7721细胞的细胞凋亡发生率与转染空载体组相比没有明显差别(均为P>0.05)。结论:ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌SMMC-7721细胞体内、外生长均具有明显抑制作用,但该抑制作用不是通过促进细胞凋亡实现的。     

抗VEGF发卡状核酶抑制肝癌VEGF表达和移植瘤生长

目的:采用抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发卡状核酶基因转染肝癌细胞,观察核酶对VEGF表达及肿瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导的方法,将人工合成的抗VEGF发卡状核酶基因转染肝癌细胞SMMC-7721,同时制备空载体和细胞对照,经G418筛选获得阳性克隆,基因组水平鉴定核酶在细胞中的表达,半定量RT-PCR法和免疫组化法观察核酶对SMMC-7721细胞VEGF表达的影响。接种各组细胞于裸鼠皮下,观察瘤体体积大小和质量,免疫组化法观测各组肿瘤微血管变化和VEGF的表达。结果:核酶基因成功导入到肿瘤细胞中,转基因细胞的增殖速率明显下降(P<0.01),转染核酶组细胞VEGF水平明显下降(P<0.01)。移植瘤成瘤率和生长速度减慢(P<0.01),肿瘤组织VEGF表达和血管形成减少(P<0.01)。结论:抗人VEGF发卡状核酶基因在体内、体外均可抑制肝癌VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肝癌血管靶向基因治疗提供实验依据。