牛卵丘卵母细胞体外成熟的研究进展

牛体外受精技术是胚胎生物工程技术研究的基础,其中牛卵丘卵母细胞体外成熟培养是体外受精技术的关键,也是重要环节。自上世纪三十年代以来,国内外研究者们都付出了大量的研究工作,并取得了较大研究进展。目前,牛卵丘卵母细胞体外成熟培养体系已经确立,但其中的卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育阻滞,卵母细胞的成熟调控机理等问题,还有待研究者们进一步深入探讨。本文主要从牛卵丘卵母细胞的获得方法、体外培养条件、体外培养液及添加物、存在问题等几方面来综述其研究进展。     

不同浓度半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

近年来,随着卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)以及细胞核移植技术的不断发展,牛胚胎的体外生产已经在几个不同的培养体系中获得了成功.但是,卵母细胞生长发育是一个非常复杂的过程,受多种因素的影响,有些因素的作用对于同种类动物的卵母细胞或体外/体内培养条件下的卵母细胞有着较大的差别.要找出各种动物卵母细胞体外培养的最佳方案以提高卵母细胞体外成熟率,尚有许多工作需要做.研究以延边黄牛卵母细胞为试验材料,试图探明不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响,现报道如下.     

牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术

文章从卵母细胞的来源、精子体外获能、卵母细胞体外成熟、体外受精和体外受精早期胚胎培养五个方面综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展.同时指出了影响精子体外获能的因素、影响卵母细胞成熟培养的因素、体外受精存在的问题及解决办法等.并且对影响该技术的主要因素进行了系统分析.     

Kisspeptin在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达和功能研究

Kisspeptin(Kp)是KiSS-1基因编码的产物,为明确Kp在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达和功能,本文首先利用免疫荧光技术研究了Kp在牛卵母细胞体外成熟0、6、12、18、24 h的表达规律,随后利用体外培养技术研究了添加Kp对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:Kp在牛卵母细胞体外成熟0、6、12、18、24 h均有表达,且0~12 h表达量呈递增趋势,12~24 h下降并达到最低;在TCM-199溶液中添加10 nmol/L的Kp可使卵母细胞的成熟率达到80.3%,与同时添加FSH和FBS处理组的结果差异不显著。研究结果提示,Kp在牛卵母细胞中有表达,且在体外成熟过程中呈现规律性变化,其可提高牛卵母细胞体外成熟效率。     

牛卵母细胞体外成熟的培养体系及影响因素研究

目前牛卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术体系已经建立起来，并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上，尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究，突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理，促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展，在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。     

奶牛卵母细胞化学激活与电激活比较研究

目前,体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物上获得成功, 然而该技术还存在许多问题,如核移植成功率普遍比较低、重构胚的发育率低、畸形胚的比率高等.影响这些问题的因素很多,其中就包括受体卵母细胞的体外培养成熟率和成熟质量[1]以及激活率[2]低下,本研究的目的就是探索出一套有效的牛卵母细胞体外成熟和激活的方法,为进一步的胚胎工程技术研究提供实验基础.     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

不同浓度白术多糖及培养温度对牛卵母细胞体外成熟的影响

据大量学者研究表明中药多糖对细胞的生长、分化及增值都具有明显的促进作用.本试验试图通过在牛卵母细胞体外成熟培养液中加入不同浓度梯度的白术多糖溶液,进而对卵母细胞进行体外成熟培养,从中研究不同浓度白术多糖对卵母细胞体外成熟效果的影响,结果发现低剂量:10~50μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟有促进作用;中剂量:50~100μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟作用不明显;高剂量:150~200μg/ml白术多糖严重抑制牛卵母细胞的成熟,甚至使卵母细胞细胞质皱缩.其二试验通过提高卵母细胞的培养温度探索白术多糖对卵母细胞热应激的作用,结果发现最适浓度白术多糖对卵母细胞高温培养有一定的保护作用.     

影响牛卵母细胞孤雌激活胚胎发育的因素

卵母细胞体外成熟后孤雌激活发育是一个新兴的研究方向,影响牛卵母细胞孤雌激活发育因素很多,国内此方面的报道较少,文中就牛卵母细胞体外成熟后孤雌激活胚胎发育的影响因素进行总结。旨在为研究体外孤雌胚发育和孤雌胚胎的培养提供参考。     

牛卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞的体外成熟受多种因素的干扰和制约,不同种类、不同因素、不同的实验室条件等对卵母细胞的生长发育影响均很大。随着卵母细胞体外成熟技术的不断改进和完善,提高牛卵母细胞体外成熟的数量和质量以及充分利用良种资源等的研究就具有十分重要的意义。从体外成熟的作用机制、卵母细胞的获取、激素、成熟时间及人为操作等因素对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了综述。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘卵母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟，以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞体外成熟状态与标志的某些理论上的突破；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择、冷冻解冻精液的体外获能、精子的体外受精力，以及体外的异常受精；还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种和胚胎克隆等方面的应用前景     

影响牛精子体外获能的因素

本文针对牛胚胎体外生产的关键技术环节体外受精，从温度、卵母细胞、公牛个体、培养液组成、渗透压及pH值等方面阐述了影响牛精子体外获能的因素。     

Effects of UCHL1 Inhibition on Porcine Oocyte Matuation in vitro,Zona Pellucida Ubiquitination and Polyspermy

This study was aimed to examine the effects of UCHL1 inhibition on porcine oocyte maturation in vitro, zona pellucida (ZP) ubiquitination and polyspermy. DAPI staining, Hoechst staining and SDS-PAGE methods were used to detect the matuation rate of porcine oocytes in vitro, the level of ubiquitination of zona pellucida (ZP) and polyspermy. The results showed that after different concentrations UCHL1 inhibitor (10, 20, 25 and 30 μmol/L, DMSO and control group) were added into maturation medium for culturing 46 h in vitro, the mature rate of control group was 86.22%, while the maturation rate of 30 μmol/L group was 15.30%, and the maturation rate of every treatment group had significant difference (P<0.05). Western blotting result showed that every group generated ubiquitin markers of ZP were about 61, 80 and 106 ku in different degree. According to the analysis of gray value, the result had significant difference (P<0.05). Conducting fertilization in vitro, the number of sperm adhered on oocyte ZP in control group was the most, the number of sperm running into oocyte was fewer, the number of sperm adhered on oocyte ZP with 30 μmol/L UCHL1 inhibitor was the fewest, and there was almost no sperm running into the oocyte. The results showed that UCHL1 inhibitor had an impact on maturation of porcine oocytes in vitro. With the higher concentration of UCHL1, the lower degree of ZP protein ubiquitinated, UCHL1 could regulate sperm attachment and polyspermy.     

抑制UCHL1对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响

试验旨在研究抑制泛素羧基末端水解酶-1（UCHL1）对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响。利用DAPI染色、Hoechst染色及SDS-PAGE等方法检测猪卵母细胞体外成熟率、透明带泛素化水平及多精入卵等情况。结果表明,添加不同浓度UCHL1抑制剂（10、20、25、30 μmol/L,二甲基亚砜（DMSO）及对照组）体外培养猪卵母细胞46 h后,对照组成熟率为86.22%,而30 μmol/L UCHL1抑制剂组的成熟率为15.30%,且各处理组间成熟率差异显著（P<0.05）;经Western blotting检测,各处理组的透明带在约61、80、106 ku处均发生不同程度的泛素标记,通过灰度值分析差异显著（P<0.05）;进行体外受精试验后,发现对照组透明带精子黏附数最多,精子入卵数较少,添加30 μmol/L UCHL1抑制剂组的透明带精子黏附数最少,几乎没有精子入卵。结果显示,UCHL1抑制剂对猪卵母细胞的体外成熟有一定影响,随着UCHL1抑制剂浓度的增加,透明带发生泛素化的程度逐渐降低,且UCHL1可调节透明带精子黏附及多精入卵。     

牛卵母细胞体外成熟培养

本文着重探讨了牛卵母细胞的体外成熟培养，对卵子的发生、卵母细胞体外成熟的原理进行了阐述，叙述了从卵母细胞的回收、选择到成熟等步骤。本实验采用磷酸缓冲液(PBS)冲洗卵巢、吸卵，以含有FSH、LH、雌二醇等成分的成熟液对卵母细胞进行体外成熟培养，使卵丘细胞扩散，第一极体排出，卵母细胞达到成熟。     

绵羊卵母细胞采集、体外成熟和胚胎体外培养对体外受精技术效率的影响

利用屠宰场采集的绵羊卵巢作为试验材料,研究了不同卵母细胞采集方法(卵泡冲洗法、剖切法、注射器抽吸法和真空泵抽吸法)、成熟液中添加不同来源激素(BIONICHE或宁波激素厂生产 FSH/LH)和血清(发情绵羊血清或胎牛血清),以及mSOF和mCR胚胎培养体系对绵羊体外受精各环节效率的影响。结果表明,卵泡冲洗法获得A、B两级卵母细胞比例为77.1%,显著高于其他3种方法(P＜0.05),添加BIONICHE FSH/LH+ESS成熟液中,卵母细胞成熟率显著高于其他添加方式(P＜0.05),mSOF和mCR胚胎培养体系在卵裂率上无显著差异(P＞0.05),但mSOF组中囊胚率和孵化率均显著高于mCR组(P＜0.05)。综上所述,本研究中卵泡冲洗法更适合绵羊卵母细胞采集,成熟液中添加BIONICHE FSH/LH和ESS可显著促进绵羊卵母细胞成熟;与mCR培养体系相比,mSOF培养体系更适合绵羊体外受精胚胎的发育。     

影响牦牛卵母细胞体外成熟的因素分析

牦牛是青藏高原地区的重要畜种,为牧民提供生产和生活资料。但是牦牛的繁殖力较低,通常为2年1胎或3年2胎,选育改良进展缓慢。卵母细胞体外成熟培养作为体外受精和胚胎发育必不可少的步骤,已被应用于牦牛科学研究和繁殖生产上。由于牦牛卵母细胞体外成熟能力远远低于体内,因此完善体外培养条件,提高牦牛卵母细胞体外培养的成熟率,对牦牛繁育技术研发和育种生产都有重要的意义。本文从卵巢保存、卵母细胞采集、卵母细胞培养、培养基添加剂等方面对卵母细胞体外成熟的影响因素进行了分析,旨在提高卵母细胞体外成熟发育质量,为牦牛体外受精技术提供技术参考。     

半胱胺对牛卵母细胞早期胚胎发育能力的影响

半胱胺（Cysteamine）是一种重要的巯基物,在体外培养体系中添加半胱胺能够增强谷胱甘肽（GSH）的合成和胚胎发育能力。本研究旨在探讨不同浓度半胱胺处理对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育能力的影响。结果表明,在牛卵母细胞体外成熟液中添加100μM的半胱胺,其囊胚率与对照组有显著差异;但是,与同时在成熟液和发育液中都添加100μM的半胱胺组差异不显著。研究结果也表明,在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加半胱胺会提高牛卵母细胞的囊胚发育率,而且随着浓度的增加这种作用将达到饱和,其最佳作用浓度为100μM。