肝炎病毒蛋白对肝细胞凋亡的调控

病毒感染引起的细胞凋亡是宿主通过主动死亡来阻止病毒复制和扩散的过程,而病毒也通过某些方式阻止凋亡的发生以利成功地复制,病毒蛋白就是其主要的调节因素。近年的研究发现,ＨＢＶ和ＨＣＶ的基因产物Ｘ蛋白和核心蛋白对肝细胞凋亡过程起着重要的调控作用,从而影响病程发展及治疗效果。本文就这方面的研究进展作一综述。     

丙型肝炎病毒结构蛋白对病毒细胞间传播的影响

目的 探究丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）结构蛋白对病毒细胞间传播的影响。方法 分别以HCV基因组电转后的Huh7.5.1细胞和未经电转的Huh7.5.1细胞作为供体细胞和受体细胞,同时加入中和抗体,建立HCV细胞间传播检测系统,应用已建立好的细胞间传播检测系统探究病毒结构蛋白对病毒细胞间传播的影响。结果 在HCV细胞间传播检测系统中,野生型病毒可进行正常的细胞间传播,结构蛋白缺失的缺陷型病毒不能进行细胞间传播。结论 HCV的结构蛋白对HCV进行细胞间传播至关重要。     

肝炎病毒蛋白对肝细胞凋亡的调控

病毒感染引起的细胞凋亡是宿主通过主动死亡来阻止病毒复制和扩散的过程,而病毒也通过某些方式阻止凋亡的发生以利成功地复制,病毒蛋白就是其主要的调节因素。近年的研究发现,HBV和HCV的基因产物X蛋白和核心蛋白对肝细胞凋亡过程起着重要的调控作用,从而影响病程发展及治疗效果。本文就这方面的研究进展作一综述。     

丙型肝炎病毒核心蛋白引发肝脂肪变性及其分子学机制

了解HCV核心蛋白在诱发肝脂肪变性中的分子学机制,对丙型肝炎相关性脂肪肝的病因学,预防和治疗等方面具有极大的促进作用。国内外学者通过大量的研究发现,核心蛋白可诱发肝脂肪变性,其机制可能涉及脂质积聚、与脂质代谢相关酶分子或载脂蛋白的结合、对脂转移蛋白酶活性的调节等方面。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白3稳定细胞系的建立

目的利用丙型肝炎病毒非结构基因NS3的真核表达载体（pCMV-Tag1-NS3）在HEK293细胞中进行表达。方法通过酶切分析和DNA序列分析鉴定pCMV-Tag1-NS3重组载体构建正确后,通过脂质体介导转染HEK293细胞,用RT-PCR和Western blotting证实丙型肝炎非结构蛋白NS3基因（HCV-NS3）表达。结果 RT-PCR结果显示HCV-NS3基因的mRNA在转染的HKK293细胞中表达,Western blotting结果也显示蛋白质能正确表达。结论成功构建了实现HCV-NS3过表达的稳定HEK293细胞系,为获得HCV非结构蛋白3的重组蛋白以及早期诊断试剂的研制与筛选药物提供了基础。     

二甲基甲酰胺对人肝细胞凋亡相关蛋白影响

目的探讨不同剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)激活的影响。方法以0,6.25,25,100 mmol/L的DMF染毒正常成人肝细胞12 h,100 mmol/L的DMF染毒肝细胞0,3,6,12 h,应用蛋白印记法(Western法)观察Caspase-3激活的变化。结果随着染毒剂量的增加,Caspase-3原酶形式(Procapase-3)表达水平呈下降趋势,但各染毒组间比较,差异无统计学意义(P0.05);100 mmol/L染毒组Caspase-3激活水平最高,灰度比值为0.55,各染毒组间比较差异有统计学意义(F=7.684,P0.01);随着染毒时间增加,Caspase-3激活水平逐渐增加,12 h染毒组灰度比值最高,达0.48,各组间比较,差异有统计学意义(F=9.351,P0.01)。结论 Caspase-3的激活参与了DMF致人肝细胞的凋亡过程,并呈现良好的时间-剂量效应关系。     

丙型肝炎病毒非结构基因NS5b研究进展

丙型肝炎病毒非结构基因5b(NS5b)区是RNA依赖的RNA聚合酶编码区,与HCV的复制及致病关系密切。同时,它也是设计抗病毒药物的重要靶分子区,特别是HBV聚合酶抑制剂拉米夫定成功的用于临床,使有关RNA依赖的RNA聚合酶表达、催化活性测定和特异性抑制位点等研究成为热点。本文就丙型肝炎病毒NS5b区有关的研究进展作了综述。     

丙型肝炎病毒基因分型及其临床意义的研究进展

研究者们分析了世界各地不同株HCV基因序列以后,发现株间变异很大,从而提出了HCV的分型问题。本文就HCV基因分型的方法、原理和命名,HCV基因型与疾病严重性,HCV基因型与IFN-α疗效,抗-HCV检测的敏感性与HCV基因分型的关系,HCV基因分型与疫苗的研制和HCV基因分型的流行病学意义等有关研究简况作一综述。     

出入境人员丙型肝炎病毒核心蛋白基因巢式RT-PCR检测及分型研究

目的建立一种检测丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因的巢式RT-PCR方法,以及HCV核心蛋白基因区测序分型方法。方法从国际HCV数据库查找HCV核心蛋白基因序列,设计HCV RNA巢式RT-PCR引物及测序引物,并建立巢式RT-PCR反应体系。采用出入境人员抗-HCV阳性血清60份,及50份标本为HCV抗体检测阴性,且谷丙转氨酶(ALT)>100U/L的血清进行巢式RT-PCR检测,阳性结果使用本研究建立的测序引物进行基因测序以确定HCV基因型。结果 60份抗-HCV阳性血清中,42份(70.0%)核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,其中1b型27例、1a型12例、6a型1例、3a型1例、2a型1例。50份ALT>100U/LR抗-HCV阴性标本中,1份HCV核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,测序鉴定为3a型。结论本研究建立了一种HCV RNA核心蛋白基因的巢式RT-PCR检测和分型方法,为出入境人员HCV的诊断和监测提供重要依据。     

携带丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的重组腺病毒构建研究

目的构建表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3 (NS3)的复制缺陷型重组腺病毒,为防治HCV感染的基因免疫和基因治疗提供实验基础. 方法将HCV NS3基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增. 结果通过PCR扩增、酶切、核酸测序及Western杂交法检测鉴定,均证实插入穿梭质粒中的片段为HCV NS3基因(基因型1b);所包装出的复制缺陷型重组腺病毒AdEasy-GFP-NS3具有良好的感染能力,并可在293细胞中表达HCV NS3蛋白. 结论 AdEasy-GFP-NS3携带有HCV NS3基因,能有效地感染293细胞并高效表达,从而为丙型肝炎基因疫苗的进一步研究奠定了基础.     

江苏省宜兴地区丙型肝炎病毒F蛋白抗体检测

目的检测江苏省宜兴地区丙型肝炎（丙肝）患者血清丙肝病毒（HCV）-F抗体及其分布。方法利用基因重组获得的HCV—F／GST蛋白作为抗原，包被酶联反应板，ELISA间接法检测120例丙肝患者、15例乙肝患者、3例戊肝患者及10份正常人血清HCV—F抗体，结合丙肝患者的临床资料及疾病特征，统计分析HCV—F抗体的分布情况及与HCV感染的关系。结果120例丙肝患者血清HCV—F抗体阳性82例，阳性率68％，而15例乙肝、3例戊肝患者及10份正常人血清标本均未检出阳性；资料分析显示HCV—F抗体阳性率与HCV患者年龄、临床类型之间差异有统计学意义，51岁以上年龄组的HCV—F抗体阳性率是20～50岁组的6．675倍（95％CI：2．407～19．071），并且随着病程进展，阳性率也随之增高（OR=2．749，95％CI：1．470～5．141）。结论江苏省宜兴地区HCV感染者血清中存在HCV—F抗体，并可能与病程相关。     

TNFRSF11A和TNFRSF11B基因多态性与HCV感染转归的关系

目的 探索肿瘤坏死因子受体超家族成员11A（TNFRSF11A）和11B（TNFRSF11B）基因多态性与丙型肝炎病毒（HCV）感染转归的关系。方法 以2008－2016年纳入的749例持续感染者、494例自限清除者和1 486例对照者作为研究对象开展病例对照研究,利用TaqMan-MGB探针法检测TNFRSF11A rs1805034和TNFRSF11B rs2073617两个位点的基因型,分析它们在不同人群中的分布情况。结果 共显性模型结果显示,与携带TNFRSF11B rs2073617 TT基因型的个体相比,携带CC基因的个体易发生HCV感染慢性化（OR=1.517,95% CI：1.055～2.181,P=0.024）。隐性模型结果显示,与携带rs2073617 TT或TC基因型的个体相比,携带CC基因的个体易发生HCV感染慢性化（OR=1.435,95% CI：1.033～1.996,P=0.032）;相加模型显示,随着携带C等位基因个数的增加,个体发生HCV感染慢性化的风险亦可增加（OR=1.204,95% CI：1.013～1.431,P=0.035）。结论 TNFRSF11B rs2073617的基因多态性与HCV感染慢性化可能存在关联。     

联合检测丙肝病毒核心抗原和抗体在丙型肝炎早期诊断中的价值

目的:通过检测丙型肝炎抗体(HCV-Ab),同时对其进行丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)和丙肝病毒RNA(HCV-RNA)两项指标进行检测,探讨HCV-cAg检测在丙型肝炎早期诊断中的意义。方法:对104例HCV-Ab阳性标本及108例高危人群但HCV-Ab阴性标本(包括血液透析患者55例、医务人员20例和丙型肝炎病人的家庭密切接触者33例)及健康对照组同时进行HCV-cAg和HCV-RNA的检测。结果:104例HCV-Ab阳性组中,HCV-cAg阳性25例,HCV-RNA阳性27例;108例HCV-Ab阴性组中,HCV-cAg阳性2例,HCV-RNA阳性1例;健康对照组全阴性。结论:HCV-cAg和HCV-RNA在丙型肝炎早期诊断上无显著性差异,但HCV-cAg检测在临床的应用前景上具有更大的优势,故可在临床推广HCV-Ab和HCV-cAg联合检测,有条件者可联合检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。     

丙型肝炎病毒全基因组感染细胞模型研究

HCV是导致慢性肝炎、肝纤维化、肝细胞癌的重要致病因子,建立HCV全基因组感染细胞模型对于研究HCV致病机制,研究抗HCV药物具有重要意义,此文试就该领域内目前研究成果进行综述。     

Spreading of hepatitis C virus subtypes 1a and 1b through the central region of Argentina

The recent history of the hepatitis C virus (HCV) subtypes 1a and 1b in the central region of Argentina is hypothesized by phylogeographic reconstruction using coalescent based Bayesian analyses. Direct partial E2 sequences from HCV 1a and 1b infected patients attending different health-care centers of the country were analyzed.The inferred date of the most recent common ancestor (t_MRCA) for HCV-1a was: 1962 (between 1943 and 1977) and for HCV-1b was earlier: 1929 (between 1895 and 1953). Diverse ancestral populations were inferred from both subtypes in Córdoba and in Buenos Aires cities and after that, HCV spread within and between larger cities and to other smaller cities. The analyses suggested that HCV-1b was dispersed first and it is currently in a stationary phase whereas HCV-1a was dispersed latter and it is still in a growth phase.Finally, as it was observed in the developed countries, while the transmission of HCV-1b appears to have been somehow prevented, the HCV-1a may still represent a concern in the public health. Further work should be carried out to address their current transmission rate (and its main transmission route) in the Argentinean population.     

静脉注射毒品人群中HIV、HBV和HCV感染的现况研究

目的了解静脉注射毒品人群中人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）的感染情况。方法从四川、湖南、广西和新疆等地静脉注射毒品人群中采集血液样本2025份，应用酶联免疫试剂盒检测抗-HIV、抗-HCV抗体和HBsAg。结果红静脉沣射毒品人群中，抗-HIV、抗-HCV及HBsAg的阳性率分别为14．7％～30．4％、60．7％～85．5％和6．6％～22．4％，其HIV／HBV、HIV/HCV、HCV／HBV和HIV／HCV／HBV合并感染率分别为0％～0．4%、11．6％～27．2％、2．3％～14．3％和1．6％～4．8％。结论静脉注射毒品人群中HIV、HBV和HCV的感染率均高于正常人群，其中HIV与HCV合并感染率最高。     

Antigenicity of hepatitis C virus envelope proteins expressed in Chinese hamster ovary cells

A putative second envelope glycoprotein (E2) of hepatitis C virus (HCV) was constitutively produced in a Chinese hamster ovary cell line stably transformed with a plasmid expressing E2 protein under the control of an exogenous promoter and a signal sequence. E2 protein that lacked part of the C-terminal hydrophobic region was glycosylated with high-mannose type oligosaccharides and retained in the cells. On the other hand, E2 protein lacking the entire C-terminal hydrophobic region was glycosylated with complex type oligosaccharides (complex form) and excreted into the culture medium. Immunoreactivity of the high-mannose and complex forms of E2 proteins against sera from HCV infected patients were analyzed. We found that the antigenicity of the complex form of E2 protein was greater than that of the high-mannose form of E2 protein. This result indicated that the complex form of the E2 protein is superior for use in diagnosing HCV infection.     

T细胞应答在丙型肝炎病毒持续感染中的作用

HCV感染极易慢性化,已成为困扰全球人类健康的重要公共卫生问题。近年研究发现,T细胞应答可能在HCV感染慢性化中的发挥着重要作用,此文对T细胞应答与HCV持续感染的关系进行综述。     

乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

目的 调查中学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其乙型肝炎病毒C蛋白(HBc)特性变化,为了解乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据.方法 采用HBV-C基因特异性引物对23份义乌地区大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取21份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化.结果 23份标本中,HBV-C DNA阳性率91.30％;与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3％～95.1％;分别形成54种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(P)突变为苏氨酸(T),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化.结论 义乌市大学生HBV携带者HBV-C基因序列有一定程度的变异.     

乙型肝炎病毒X蛋白的生物学功能研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的X蛋白(HBx)是一种多功能病毒调节蛋白,具有广泛的基因转录调控作用,并能与宿主细胞的多种蛋白质直接作用,从而调节基因表达及宿主细胞蛋白质功能,进而影响病毒的复制、宿主细胞信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡及癌变等。