MTS1基因β启动子转录活性研究

目的 研究IMTSl基因β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况，鉴定β启动子转录活性的功能片段区。方法 用DNA重组方法，构建MTS1基因口启动子3′端转录起始点相同，而5′端序列不同的7种pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将构建的重组质粒分别转染MTSl基因双等位缺失的Jurkat细胞株，检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达，观察β启动子在Jurkat细胞中的激活情况及其基础转录活性片段区。结果 成功构建了MTSI基因β启动子7种不同片段的重组质粒，它们在Jurkat细胞中均有转录活性，其中0．38kb Sac Ⅱ-Sac Ⅰ酶切片段是MTSl基因β启动子转录活性的基础片段。结论 IMTSlβ启动子可在Jurkat细胞中被激活。     

WT1介导的转录调控通路与白血病

WT1基因编码的锌指转录因子能调控下游基因的转录，其中很多靶基因涉及调节细胞周期和增殖分化，而WT1本身也接受其上游基因的调控，如NF-кB和GATA-1等，这样便构成WT1介导的转录调控通路，参与造血系统发育的调控，如果转录因子的表达脱调控以及随之而来的正常基因表达态势受干扰，常会引起造血细胞的增殖，分化及凋亡动态平衡的紊乱，最终导致白血病，本就WT1介导的转录调控通路与白血病的关系作一综述。     

AML1B和AML1/ETO对TSC基因启动子的转录调节作用

目的 观察AML1B、AML1/ETO对TSC基因、TSC1和TSC2启动子的转录调节作用,探讨其在白血病发生中的作用.方法 构建TSC基因启动子/增强子区包含AML1基因结合位点的荧光素酶报告基因质粒,与AML1B、AML1/ETO表达质粒共转染非洲绿猴肾细胞系CV-1细胞,测定荧光素酶的活性,分析其对TSC基因启动子转录活性的影响.结果 在CV-1细胞中,AML1B对TSC1基因启动子的转录没有明显的作用.而对于TSC2基因启动子的转录活性具有明显的促进作用.在pCMV5-AML1B的剂量为75 ng时,TSC2启动子的转录活性上升为对照组的8.55倍,且这种作用具有一定的剂量依赖性;相反,AML1/ETO对TSC1基冈启动子转录活性具有明显的促进作用而对于TSC2基因启动子的转录活性没有明显的作用,但是可以抑制AML1B对TSC2基因启动子的反义启动作用.结论 AML1B和AML1/ETO能够调控TSC基因的转录.     

AML1-ETO对p21 WAF1/CIP1启动子转录活性作用的研究

目的观察AML1-ETO融合基因对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的影响，探讨AML1-ETO促进白血病发生的机制。方法构建p21WAF1／CIP1基因启动子的报告质粒，与AML1-ETO、AML1b和AML1a的表达质粒共转染非洲绿猴肾细胞系CV—1细胞，测定荧光素酶的活性，分析AML1-ETO、AML1b和AML1a对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的影响。结果在CV—1细胞中，AML1-ETO对p21WAF1／CIP1基因启动子的转录具有明显的抑制作用，在pCMV5-AML1-ETO的剂量为1000ng时，p21WAF1／CIP1启动子的转录活性下降为对照组的（19±4）％，这种作用具有序列特异性和剂量依赖性；AML1b和AML1a对p21WAF1／CIP1基因启动子转录活性的抑制作用不明显，在剂量为1000ng时，p21WAF1／CIP1启动子的转录活性分别下降为对照组的（61±16）％和（594-16）％。结论AML1在与ETO形成融合基因后，其产物由于ETO蛋白能够更有效地募集转录共抑制复合物，其转录抑制活性要比AML1a和AML1b更强；外源的AML1-ETO对p21WAF1／CIP1的作用可能也与细胞系有关。     

儿童急性白血病患者MTS1基因检测及其临床意义

我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)和ＰＣＲ单链构象多态性分析(ＳＳＣＰ)技术研究了国内儿童急性白血病细胞中ＭＴＳ1基因的纯合性缺失和突变情况,以探讨ＭＴＳ1基因在儿童急性白血病发生、发展中的变化规律和意义。对象和方法1　研究对象　儿童急性白血病患者79例,均为1988年8月～1997年8月在我院初治的住院患儿。其中急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)50例,男34例,女16例,年龄6个月～14岁,平均56岁。按全国血液学会议诊疗建议[1]分型:高危型32例,标危型18例。截止1997年8月,27例已死亡。急性非淋巴细胞白血病(ＡＮＬＬ)29例,男13例,女16例,年龄8个…     

人PNPLA3基因启动子转录调控的初步分析

目的构建人PNPLA3基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因裁体,在LO2细胞中比较不同长度启动子片段的活性,为研究PNPLA3基因的转录调控机制提供初步依据。方法对PNPLA3基因5’侧翼区约1 400个碱基进行生物信息学分析,预测其转录调控区域;利用PCR及酶切方法,以人外周血中全基因组DNA为模版扩增不同长度的PNPLA3基因上游启动子区序列,分别构建荧光素酶基因报告载体。瞬时转染LO2细胞,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测各启动子的转录活性。利用在线分析软件预测PNPLA3基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果成功构建5段不同长度的PNPLA3基因上游启动子区的报告载体;在LO2细胞内启动子活性随片段长度变化,表现为当PNPLA3启动子片段从-1015截短到-647,从-647截短至-553,从-553截短至-333时活性变化不大,而从-333截短至-8时活性显著下降(P<0.05);Match分析显示-333～-8片段具有多个转录因子结合位点。结论初步判断-333～-8区是PNPLA3基因的主要转录调控区。     

AML1、AML1-ETO对nucb2基因转录调控活性的影响

本研究旨在探讨造血特异转录因子AML1及M2b型急性髓系白血病（AML-M2b）累及的异常融合蛋白AML1-ETO对凋亡相关基因nucb2（nucleobindin-2）启动子转录活性的影响,探索AML1-ETO对AML—M2h型白血病的分子致病机制。利用实时RT-PCR方法在AML1-ETO诱导型白血病细胞株中研究AML1-ETO在转录水平对于nucb2的调控情况;利用ChIP—qPCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株中研究AML1、AML1-ETO与nucb2基因启动子之间直接的体内相互作用情况;采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1、AML1-ETO对nucb2启动子转录活性的调节作用。结果表明：AML1-ETO的表达与nucb2的表达呈负相关;nucb2可能是AML1、AML1-ETO的靶基因;AML1、AMLI—ETO皆对nucb2启动子具有转录抑制作用,且AML1-ETO对nucb2抑制更强。结论：nucb2是AML1、AML1-ETO的直接靶基因,AML1、AML1-ETO通过抑制nucb2启动子的活性对其进行转录调控。     

非霍奇金淋巴瘤患者MTS1/p16基因的缺失

我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了３４例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）患者外周血ＤＮＡｐ１６基因的缺失情况,现将结果报告如下。材料和方法１标本来源非霍奇金淋巴瘤患者３４例,均为我院血液科及化疗科住院患者,男２５例,女９例,年龄１７～６８岁,中位年龄４...     

血小板源生长因子及其B链基因转录调控

血小板源生长因子 (PDGF)是机体内主要的促分裂剂和趋化剂之一 ,PDGF是一个二聚体家族 ,至少由四种不同的基因表达产物组成。最近 ,PDGF B链的基因转录调控日益受到重视 ,一些顺式调控元件和相应的反式作用因子已被证实。     

血小板源生长因子及其B链基因转录调控

血小板源生长因子（PDGF）是机体内主要的促分裂剂和趋化剂之一，PDGF是一个二聚体家族，至少由四种不同的基因表达产物组成，最近，PDGF－B链的基因转录调控日益受到重视，一些顺式调控元件和相应的反式作用因子已被证实。     

小儿急性白血病MTS1基因缺失及点突变的研究

为探讨MTS1基因突变与恶性血液病的关系,应用PCR-SSCP和DNA印迹方法检测35例急性白血病(AL)患儿MTS1基因改变。结果显示:急性淋巴细胞白血病(ALL)缺失(包括点突变)为25.8％(8/31)。B-ALL纯合缺失为16％(4/25),T-ALL为33％(2/6)。点突变则两型各1例。结果证明:我国儿童ALL有MTS1基因失活的存在,T-ALL高于B-ALL,点突变仅见于少数病例。该基因失活与AL的发生发展及临床预后有密切关系。     

CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病的相关性分析

目的研究CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病(AML)发生的相关性。方法选取180例AML患者骨髓标本及24例健康供者骨髓标本,通过甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)进行CTNNA1基因启动子区异常甲基化阳性率进行检测,提取基因组DNA,设计硫化测序PCR(BS-PCR)引物及甲基化特异性PCR(MS-PCR)引物,进行PCR扩增及测序分析。结果 5例健康者标本及5例AML患者标本DNA经硫化且BS-PCR测序分析,其健康者标本甲基化率分别为1.5%、1.0%、1.0%、1.5%、1.0%,而AML患者CTNNA1甲基化率分别为92.0%、78.5%、86.0%、56.0%、90.0%,远远高于健康供者。MS-PCR分析结果显示,CTNNA1基因在24例健康人中呈完全非甲基化状态,在180例AML患者中其甲基化阳性率为37.2%(P0.05)。结论 CTNNA1基因启动子区异常甲基化可能参与AML的发生,为疾病的早期监测提供分子理论依据。     

细胞程序性死亡-配体1基因启动子区rs10815225多态性与结直肠癌的关联研究

目的探讨位于细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)基因启动子区的rs10815225多态性与结直肠癌的相关性。方法直接测序法分析215例结直肠癌患者和236例体检健康者rs10815225多态性,定量PCR检测65例结直肠癌组织中PD-L1 mRNA的表达变化。结果与GG基因型相比,CG基因型显著降低了结直肠癌的发病风险(OR=0.48,95%CI 0.28~0.83,P=0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示,与rs10815225G等位基因相比,rs10815225C对应的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。基因型—表型结果显示,携带rs10815225CG基因型结直肠癌患者中PD-L1 mRNA表达明显低于GG基因型携带者(P<0.05)。结论PD-L1基因启动子区rs10815225CG基因型可能通过降低基因转录活性和PD-L1 mRNA表达,从而降低中国汉族人群结直肠癌的发病风险。     

miR-182受TEAD1转录调控参与黑素瘤细胞转移

目的:探讨黑素瘤中microRNA(miRNA)-183/96/182同源簇的表达丰度及可能的调控机制。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测黑素瘤细胞系(A375、WM35)与黑素瘤样本中miR-183/96/182的表达丰度与差异。JASPAR数据库分析miR-183/96/182启动子区域可能存在的转录因子结合位点。采用荧光素酶报告基因实验与染色质免疫沉淀法(ChIP)分析转录因子对miR-183/96/182表达的调控机制。分析转录因子与miR-183/96/182对黑素瘤细胞迁移的影响。结果:miR-183/96/182同源簇中,miR-182在黑素瘤细胞系与肿瘤样本中的表达较其他两种miR升高(P0.05)。黑素瘤细胞系过表达TEAD1后,miR-182的表达升高(P0.05);抑制miR-182后,TEAD1诱导的黑素瘤细胞转移的作用降低(P0.01)。结论:miR-182在黑素瘤中高表达,其可能通过TEAD1的转录调控参与黑素瘤细胞转移。     

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。     

ABO基因转录调控机制研究进展

ABO血型抗原不仅表达于红细胞表面,在多种组织的上皮细胞、内皮细胞中也有表达。在细胞发育、分化、成熟过程中ABO抗原表达状态发生一系列变化,在一些疾病,如血液系统疾病、恶性实体瘤的进程中,红细胞及组织中ABO抗原的表达水平也会发生改变。为弄清ABO抗原表达变化的调节机制,本文综述了ABO抗原表达相关的转录调控分子基础,包括ABO基因上游、下游和内含子中的转录调控元件及这些区域结合的转录因子的调控作用,以及与ABO基因转录相关的表观遗传调控机制,反义RNA的调控机制,为系统性的认识调控ABO基因转录的分子机制提供参考。     

小鼠骨髓间充质干细胞中RUNX1对WNT5A基因转录活性的调控

本研究旨在探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)中转录因子RUNX1对WNT5A转录活性的调控,探索骨髓造血微环境对造血干细胞调控的机制。体外分离、培养、鉴定小鼠骨髓MSC;利用RT-PCR方法检测小鼠骨髓MSC中RUNX1的表达;利用染色质免疫共沉淀研究RUNX1与WNT5A启动子之间的直接相互作用;利用逆转录病毒表达系统将RUNX1导入小鼠间充质干细胞中,用RT-PCR的方法检测基因的表达,研究RUNX1对WNT5A的转录调节作用。结果发现:体外分离培养得到的MSC经脂肪、成骨、软骨诱导后,分别用油红O、von Kossa、甲苯胺蓝染色呈阳性。RUNX1表达于小鼠骨髓来源MSC中,RUNX1能与WNT5A启动子直接结合,并对WNT5A具有转录激活作用。结论:小鼠骨髓MSC中表达RUNX1,WNT5A是RUNX1的一个下游靶基因,其转录活性受RUNX1调控。