用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列IS6110部分基因123bP的片段进行扩增，该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到10fgDNA。对149份结核患者临床标本检测结果显示PCR总阳性率(69．1％)明显高于直接涂片荧光镜捡(15．4％)与细菌培养(10.1％)的阳性率(P<0.01)，研究表明PCR是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的诊断价值。方法：应用ＰＣＲ技术检测４７份结核病患者的各种临床标本，并与传统细菌学检测结果比较。结果：ＰＣＲ检测阳性率为５７．４５％（２７／４７），明显高于传统细菌学检测者（１７．０２％，８／４７）（Ｐ〈０．００５）。其中，ＰＣＲ检测胸膜结核性胸水与脑膜结核性脑脊液的阳性率均显著高于传统学检测者（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＲ检测的假阳性率为５．１３％（４／７８），     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

对195例临床可疑结核病经常规培养和涂片抗酸染色阴性的标本行PCR技术检测。结果51例结核杆菌DNA呈阳性（26．2）144例阴性。阳性患者行抗结核治疗有效；阴性患者随访50例．未见假阳性、假阴性。提示应用PCR检测结核杆菌较常规方法具有准确、灵敏的特点，在结核病诊断中有重要意义。     

聚合酶链反应诊断结核病112例临床分析

聚合酶链反应诊断结核病１１２例临床分析韩凌１李丽１王光凤２谢庆安３（１泰安市中心医院２７１０００２泰安市结核肿瘤医院３泰安铁路医院）长期以来，由于结核分枝杆菌的培养条件特殊，所需时间长，而涂片镜检阳性率低，已远不适应临床需求。自１９８５年美国Ｍｕｌｉ...     

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎ ｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝     

聚合酶链反应在结核病诊断上的应用研究

本文运用ＰＣＲ检测技术，对５５例正常人，３５例非结核性肺部疾病患者，１４６例肺结核病人作对照，用抗酸染色法以及分枝杆菌培养法作对比分析，检测结果为ＰＣＲ检测法阳性率明显高于涂片和培养法，特异性为９７．８％，敏感世为８０％。由于其方法简单，检测速度快，灵敏度高，为结核病的诊断和鉴别诊断提供可靠的依据。     

聚合酶链反应在结核杆菌检测中作用的研究

聚合酶链反应在结核杆菌检测中作用的研究广西中医学院一附院检验科吴巍萍笔者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和传统的抗酸涂片镜检两种方法检测了８０例结核病患者，现将结果报道如下。１材料和方法１．１标本来源：全部病例取自１９９５～１９９７年我院门诊及住院经临床确...     

聚合酶链反应在结核病诊断中的价值

目的：为早期诊断结核病寻找一种简便、快速、灵敏的实验室方法。方法：用PCR、结核菌培养、涂片法对临床可疑结核病患者进行检验。结果：在16份痰标本和其它标本中,PCR、结核菌培养、涂片的阳性检出率分别为56．9％、20．7％和7．7％。结论：PCR与其它两种方法比较,差异均非常显著,揭示PCR对结核病的确诊有重要辅助意义。     

应用聚合酶链反应检测血清中结核杆菌DNA的探讨

应用聚合酶链技术对８９例肺部病人血清中结核杆菌ＤＮＡ进行检测。结果表明ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ检出率为７２％。其中７８例确为肺结核的病人的检出率为８３％。由此可见了血清ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ有罗高的应用价值。     

巢式PCR法在结核病与结节病鉴别中的应用

目的观察结核病和结节病病理组织中结核分支杆菌DNA检出情况,探讨巢式PCR方法在结核病与结节病鉴别中的作用。方法以结核分支杆菌内插入序列IS6110为扩增靶序列,用巢式PCR法检测37例结核病和31例结节病石蜡包埋病理组织中结核菌DNA,以H37RV标准结核菌株作阳性对照,鼠胎肺作阴性对照,并与同步进行的普通PCR结果作比较。结果对照组分别均为阳性及阴性结果,37例结核病组中36例呈阳性结果（阳性率为97．3％）,31例结节病组中8例呈阳性结果（阳性率为25．8％）,经统计学分析两组阳性率有显著差异;与普通PCR方法比。采用巢式PCR方法对结核菌DNA检出阳性率明显提高。结论用巢式PCR法检测石蜡包埋病理组织中结核菌DNA可作为鉴别结核病和结节病的方法之一。     

聚合酶链反应在诊断肺结核中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对７８例患者的痰、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和胸水标本进行结核菌检测；并同时进行涂片抗酸染色、皮肤结核菌素试验及血结核菌抗体检测。结果：ＰＣＲ阳性率为４６．１５％，与涂片镜检、结核菌素试验强阳性、血结核菌抗体阳性率（分别为３．８５％、１７．９５％、１１．５４％）相比均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。由此可见ＰＣＲ方法比传统方法具有更高的结核杆菌检出率。     

聚合酶链反应检测泌尿系结核患者尿中结核杆菌

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３４例泌尿系结核病人的２４小时尿液标本进行结核杆菌染色体中３３６－ｂｐ重复序列ＤＮＡ片段的扩增检测，阳性率为９４．１％。ＰＣＲ检测２４小时尿样中结核杆菌比尿沉淀物涂片法找抗酸杆菌（阳性率５６％）及结核杆菌快速培养法Ｂａｃｔｅｃ培养结核杆菌（阳性率７０．６％）更敏感。我们还用ＰＣＲ、涂片法、Ｂａｃｔｅｃ培养法检测了１０例非泌尿系结核者中结核杆菌，阳性结果分别为０、０、３     

应用多重聚合酶链反应检测结核杆菌

作者合成两对引物，建立结核杆菌ＤＮＡ多重ＰｃＲ法，用以检测分枝杆菌标准菌株，仅人型和牛型结核杆菌呈阳性，灵敏度≥７ｃｆｕ结核杆菌呈阳性。４０例肺结核患者痰，经多重ＰＣＲ法检测２７例呈阳性，而采用Ｂａｃｔｃｃ４６０ＴＢ系统快速培养法培养仅１９例阳性；多重ＰＣＲ法栓出率较一对引物ＰＣＲ法高１５％～１７．５％，具有较好的敏感性和林异性。     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

对７０例肺结核和２０例其它肺部疾病患者行痰及血标本ＰＣＲ检测、痰培养和涂片镜检结核菌。结果表明肺结核组痰ＰＣＲ阳性率为６４．３％，血ＰＣＲ阳性率为１１．４％，培养阳性率为３０．０％，涂片阳性率为２４．３％。其它肺部疾病ＰＣＲ阳性率为１０％，血ＰＣＲ为０，涂片阳性率为０，培养阳性率为０，表明痰ＰＣＲ特异性好，敏感性高，且快速，与临床符合率较高，不失为结核病的诊断和鉴别诊断的一种可靠的方法。     

构建TA载体快速克隆PCR产物

目的　为了快速克隆ＰＣＲ产物,本实验构建了简单、方便的 ＴＡ载体。方法 ＰＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（－）经 ＥｃｏＲ Ｖ酶切形成平端切口,在ＴａｑＥ的催化下加一个ｄＴＭＰ形成３’端带有Ｔ的粘端载体,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用下,将ＰＣＲ产物互补连接于ＴＡ载体上,重组质粒转化细菌,碱裂解法提取重组质粒ＤＮＡ,酶切及电泳鉴定。结果ＴＡ载体成功地克隆了ＰＣＲ产物。结论构建的ＴＡ载体简单、方便,可以克隆任何ＰＣＲ产物。     

聚合酶链反应快速诊断中枢神经系统感染性疾病

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对１０６例中枢神经系统感染性疾病进行单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ┐Ｉ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）及结核杆菌（ＴＢ）３项基因检测结果。ＨＳＶ┐Ｉ阳性１０例，ＣＭＶ阳性１３例，ＴＢ阳性１９例，３种病原体总检出率为３９．６％（４２／１０６）。该试验具有特异性强、敏感性高、简便快速等优点，有利于早期诊断，早期治疗     

PCR法快速诊断急性重症胰腺炎早期合并细菌感染

目的探讨以16srRNA基因为基础的细菌聚核酶链反应（PCR）法诊断急性重症胰腺炎早期合并细菌感染的价值。方法收集17例急性重症胰腺炎患者（女13例，男4例，年龄17～79岁）不同时期、不同部位标本45份，其中17份来自细针穿刺（FNA），28份为术中标本。获取胰周渗液后，行细嚣通用引物PCR法检测。并与常规细菌培养结果进行比较。结果10例最终诊断为胰腺感染，并行手术治疗；7例最终诊断为胰腺未感染，5例经保守治疗治愈，2例死亡。常规培养阳性检出率为84．4％；细菌PCR法阳性检出率为80％。PCR、培养诊断胰腺感染的敏感性分别为90％（9／10）、100％（10／10），特异性均为100％（7／7）。两者耗时分别为5h、3d。结论B超引导细针穿刺安全可行；PCR法能快速、准确地诊断急性重症胰腺炎早期合并细菌感染，为手术治疗提供可靠依据。     

多聚酶链反应检测结核杆菌复合群方法的建立及临床应用

采用多聚酶链反应 （ＰＣＲ） 对结核杆菌复合群基因组进行扩增, 得到一２８５ ｂｐ ＤＮＡ条带。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹证实为特异性扩增。用ＰＣＲ方法对临床４０ 份待测标本进行检测,并与结核杆菌常规培养以及高渗培养等方法进行比较, 其阳性率分别为６０．０％ 、７．５％ 和０％ , 差异均有显著性意义 （均为Ｐ＜ ０．０１）。     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。