蝎毒抗癌多肽对两种肝癌细胞抑制作用研究

本文主要观察蝎毒抗癌多肽（APBMV）对人和鼠的2种肝癌细胞株（SMMC-7721和H22）的抑制作用。采用噻唑蓝（MTT法）、集落形成抑制实验，用丝裂霉索C（MMC）为阳性对照药品。以蝎毒提取物APBMV各组分以不同浓度，分别处理小鼠肝癌细胞H。和人肝癌细胞株SMMC-7721生长情况。结果显示BMKⅢ对H22细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组，与对照组差异显著。APBMV导致SMMC-7721细胞代谢MTT的能力显著低于对照组；APBMV能显著抑制该细胞的生长，剂量-效应关系明显；当APBMV的浓度〉8μg／ml时，SMMC-7721细胞的集落形成率显著低于对照组。APBMV和对H22细胞和SMMC-7721细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用，是存在于蝎毒中的一种有效低毒的抗肿瘤成分。     

吲哚-3-甲醇抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理探讨

目的探讨吲哚-3-甲醇(I3C)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理。方法采用人肝癌细胞株SMMC-7721制备荷瘤裸鼠;通过测量肿瘤大小和病理学检测,观察I3C对肿瘤细胞的抑制作用;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、线粒体膜电位;采用Western blot法检测相关蛋白的表达。结果经I3C作用后,SMMC-7721细胞生长变慢,细胞周期、线粒体膜电位、相关蛋白的表达改变。结论 I3C能够抑制SMMC-7721细胞生长,细胞周期和细胞凋亡相关信号分子可能在其中发挥了一定作用。     

叶酸对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的：采用叶酸处理体外培养的人胃腺癌细胞株SGC-7901来研究叶酸在体外的抑癌作用。方法：采用生长曲线法，群体倍增时间法，集落形成实验来研究叶酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901体外增殖的影响；采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞周期的影响。结果：叶酸浓度达375nmol／L、750nmol／L和1875nmol／L时对人胃腺癌细胞株的增殖有抑制作用，叶酸处理的SGC-7901，G0／G1期细胞比例增大，细胞分裂受阻。结论：叶酸可以抑制胃腺癌细胞的生长、增殖并延长其群体倍增时间，降低其集落形成能力，叶酸可使胃腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0／G1期，从而达到抑制癌细胞生长的目的。     

松针不同提取部位体外抗肿瘤作用的实验研究

[目的]探讨松针不同提取部位的体外抗肿瘤作用. [方法]采用系统溶剂萃取法将松针醇提物进行部位分离,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水提取部位,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察各提取部位对人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7,人前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖的影响.采用流式细胞术分析药物对肿瘤细胞细胞周期分布的影响,初探松针抗肿瘤作用机理. [结果]石油醚部位对肿瘤细胞增殖的抑制作用较强,在一定剂量范围内呈现出时间和剂量依赖性;乙酸乙酯部位的作用次之;正丁醇和水部位的抑制作用不明显.4种细胞中SMMC-7721细胞对松针提取物最敏感,该细胞经0.8 mg·ml-1石油醚提取部位处理24 h、48 h和72 h后,细胞的凋亡百分率分别为15.43%、20.73%、13.47%,细胞周期被阻滞在G2-M期. [结论]石油醚部位在体外对肿瘤细胞增殖呈现出较强的抑制作用,其抑制SMMC-7721细胞增殖的机制可能与松针提取物的细胞毒作用、诱导细胞凋亡和抑制细胞分阶段分裂有关.     

1,25-(OH)2D3抑制人肝癌细胞增殖的研究

目的：探讨1，25－（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的机制。方法：体外培养肝癌细胞株SMMC－7721，培养基因10、50及100（nmol/L)1，25－（OH）2D3作用2d,4d,6d后，用四唑盐比色试验（MTT）和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长；台盼蓝拒染法绘制生长曲线；DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡。结果：MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10－100nmol/L的1，25－（OH）2D3均对SMMC－7721细胞株有显的抑制作用，且呈剂量－效应关系。DNA凝胶电泳结果显示，1，25－（OH）2D3能够诱导SMMC－7721细胞凋亡。结论：1，25－（OH）2D3对于人肝癌细胞株SMMC－7721的增殖有显的抑制，其机理可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡。     

缺氧诱导因子对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的检测在缺氧条件下缺氧诱导因子2α对肝癌SMMC-7721细胞生长和侵袭能力的影响。方法缺氧培养条件下脂质体Lipofectamine介导缺氧诱导因子（HIF-20α）脱氧寡核苷酸转染SMMC-7721肝癌细胞，测转染前后HIF-2α mRNA量和蛋白量检验转染效果；MTY法测定细胞生长和黏附能力变化；Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力。结果HIF-2αmRNA和蛋白表达在反义转染组显著低于正义组、随机组与对照组（P〈0．01）。HIF-2仪表达阻断对细胞生长和活力无显著性影响（P〉0．05），但显著抑制体外粘附能力（抑制率16．99％～31．07％）和侵袭能力（抑制率17．9％）（P〈0．01）。结论HIF-2α表达阻断可抑制SMMC-7721肝癌细胞的黏附和侵袭活性。对其生长无显著影响。     

肉桂抑制人宫颈癌细胞生长增殖的体外研究

目的：研究肉桂对人宫颈癌细胞生长的影响。方法：肉桂水煎液作用于宫颈癌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖和贴壁情况,划痕实验分析细胞的迁移能力,流式细胞术分析细胞周期。结果：作用48h后,高、中、低浓度肉桂组宫颈癌细胞生长抑制率分别为97.12%、24.58%、15.40%;贴壁率为48.3%,与对照组相比明显减少（P〈0.05）,且明显降低细胞的迁移（P〈0.05）;FCM显示细胞周期移行被阻滞于G2期。结论：肉桂对体外人宫颈癌细胞增殖有明显抑制作用,并可降低肿瘤细胞贴壁率和迁移能力,阻滞细胞周期于G2期。     

叶酸在体外对人肝癌细胞株生长的影响

目的研究叶酸的抑癌防癌作用,用叶酸在体外对人肝癌细胞SMMC-7721进行处理.方法采用生长曲线法、MTT法研究叶酸对细胞的增殖和功能的影响;采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞凋亡的影响.结果提示在叶酸浓度达13.5×10-5mol/L和40.5×10-5mol/L时对人肝癌细胞株的增殖和功能有抑制作用,40.5×10-5mol/L时引起的凋亡率可达27.3%.结论叶酸对脐静脉内皮细胞无抑制作用,表明叶酸对正常人体细胞无不良影响而对癌细胞有抑制作用.     

氯化镉抗肿瘤作用的体内实验研究

[目的]研究氯化镉(CcCl2)抗肿瘤作用及对体内正常组织影响. [方法]体内建立人肝癌裸小鼠移植瘤模型,阴性对照组给予生理盐水,阳性对照组给予5-Fu 25 mg/kg,实验组分别给予CdCl2 0.5、1.0、2.0mg/kg,锌保护组预先给Zn2 10 mg/kg,24 h后给予CdCl2 2.0 mg/kg.观察CdCl2抑瘤效应及对正常组织影响. [结果]CdCl2在体内可显著抑制SMMC-7721增长,同时可引起外周血白细胞数减少,肝指数降低. [结论]CdCl2具有显著抑瘤效应,锌作为保护剂可能通过诱导金属硫蛋白表达拮抗镉部分毒副作用.     

人参皂甙Rg3诱导人肝癌细胞凋亡作用的研究

目的 研究人参皂甙Rg3抑制人肝癌细胞生长及诱导凋亡作用机制。方法 体外培养人癌细胞（SMMC-721），观察人参皂甙Rg3高剂量组（80μg／m1）、中剂量组（40μg／m1）、低剂量组（20μg／m1）、阳性顺铂对照组（DDP，80μg／m1）和空白对照组（P13S）于12h、24h、48h、72h培养后，肝癌细胞的形态学和生长情况。采用MTT法，分析人参皂甙Rg3对细胞生长抑制率的影响。通过电镜观察细胞凋亡的形态学特征。结果 应用人参皂甙Rg3后，普通光镜下发现细胞数随Rg3浓度增加而减少，呈剂量依赖性，人参皂甙R西高、中、低剂量组细胞生长的抑制率分别为34．6％、19．1％和6．1％，与未处理空白对照组的细胞生长抑制率（5．7％）相比，以人参皂甙Rg3高剂量组于作用72h后对细胞生长的抑制作用最明显（P〈0．001），中剂量组次之（P〈0．05），低剂量组及Rg32h，24h，48h组未见明显差别。阳性对照顺铂组的细胞生长抑制为22．2％。人参皂甙Rg3作用72h后的电镜分析显示，细胞出现典型的凋亡形态学改变。结论 人参皂甙Rg3具有抑制人肝癌细胞生长作用，与促进细胞凋亡机制有关。     

Caveolin-1对MGC803细胞增殖的影响及机制

目的研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响及作为基因治疗的候选基因可能性。方法用L ipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系,并将空载体转染MGC803作为对照。采用western b lot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。应用细胞计数、流式细胞术等检测caveolin-1对MGC803细胞生长的影响。结果转染后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显高于未转染细胞;细胞的群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期明显延长,且阻滞于G0/G1期。结论Caveolin-1能抑制MGC803细胞的增殖,且将其阻滞于G0/G1期。     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的研究紫杉醇能否诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡,以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理HO-8910细胞,在光镜和电镜下观察紫杉醇作用后细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果荧光染色及电镜观察到典型的凋亡细胞形态,流式细胞仪DNA含量分析,癌细胞在紫杉醇作用下,首先表现为G2/M期阻滞。但只有出现G2/M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论紫杉醇能够诱导HO-8910细胞凋亡,紫杉醇诱导HO-8910细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关,这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

荧光激活细胞分选分别含有高比例G0／G1期、S期、G2／M期细胞亚群的研究

目的：建立利用荧光激活细胞分选技术同时分选、获得含不同细胞周期细胞群的方法。方法：应用流式细胞仪的光学参数-前向角和侧向角，在细胞群中设置12个门，然后进行分选，分选出的各门细胞再经碘化丙啶（PI）染色进行细胞周期检测。结果：低侧向角、中前向角的细胞群内G0／G1期细胞比例可达70．0％，中侧向角、低前向角的细胞群内S期细胞比例可达72．3％，高侧向角、高前向角的细胞群内G2／M期细胞比例可达42．8％。结论：应用流式细胞仪的光学参数可以有效同时分选、获得分别含有高比例G0／G1期、S期、G2／M期的细胞亚群。     

番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖和细胞周期的影响

目的研究番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响,流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达的变化。结果番茄红素抑制PC-3细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示,cyclin D1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

大豆异黄酮诱导HeLa细胞凋亡、细胞周期阻滞和[Ca~(2+)]_i浓度升高(英文)

目的探讨大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长机制。方法 HeLa细胞经过10,20,and 40 g/ml的大豆异黄酮SI-I处理4d后,采用倒置显微镜和透射电镜观察其形态学变化,利用流式细胞仪检测细胞周期分布,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中[Ca2+]i浓度。结果倒置显微镜观察到HeLa细胞数量明显变少,细胞严重变形。透射电镜观察到HeLa细胞发生凋亡形态学变化。流式细胞仪分析发现HeLa细胞周期阻滞于G0/G1或G2/M期,细胞凋亡率随SI-I浓度的增加而上升。激光扫描共聚焦显微镜观察到凋亡的HeLa细胞内[Ca2+]i显著升高。结论大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长是通过凋亡诱导作用,并且细胞周期阻滞和[Ca2+]i浓度升高可能是其诱导凋亡机制之一。[营养学报,2012,34(4):373-378]     

家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨

目的 观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导，探讨其抗肿瘤作用机制。方法 流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响；HE染色法观察细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数（AI）。结果 在0．10％组A375的G／M期升高，S期降低。0．50％组G0／G1期、G2／M期和AI／PI（增殖指数）显著增加，S期及PI明显减少。2．50％组S期、PI、AI／PI及细胞凋亡率（Ap）显著增高，G0／G1期大大减少。12．50％组G2／M期、PI、AI／PI及Ap显著增高，G0／G1期和S期明显下降。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用；家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长。     

氯化镉诱发人支气管上皮细胞系恶性转化

目的研究氯化镉诱发SV40 LargeT抗原永生化的人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化作用。方法体外用不同浓度氯化镉多次处理16HBE细胞,软琼脂集落形成和裸鼠成瘤试验鉴定转化细胞的恶性度。结果细胞培养至35代,发现氯化镉可诱导16HBE恶性转化。转化细胞排列紊乱、重叠生长,在软琼脂中的集落形成率显著高于对照组(P<0.01),并呈时间—剂量依赖关系;转化细胞在裸鼠体内成瘤,组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论氯化镉有较强的诱导16HBE恶性转化能力;该转化模型为镉致癌机制的分子水平提供了理想的研究系统。     

缺锌对胸腺和脾脏细胞增殖周期DNA及蛋白质含量的影响

通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）模型，采用流式细胞术，研究缺锌对胸腺、脾脏细胞增殖周期、ＤＮＡ及蛋白质含量的影响。结果表明：（１）ＺＤ组的最终体重、体重增长值、饲料效价、以及血清、毛发、股骨锌均非常显著地低于缺锌对喂（ＰＦ）组。（２）ＺＤ组胸腺、脾细胞的增殖指数和Ｇ＿２＋Ｍ期细胞的百分率非常显著地低于ＰＦ组；胸腺、脾脏的Ｇ０／Ｇ＿１期细胞百分率却非常显著地高于ＰＦ组。（３）ＺＤ组胸腺、脾脏细胞的ＤＮＡ含量、ＤＮＡ指数、蛋白质含量、蛋白质指数显著低于ＰＦ组。缺锌时，ＤＮＡ复制和蛋白质合成受到抑制，致使细胞停滞于Ｇ０／Ｇ＿１期，仅少量进入Ｓ期和Ｇ＿２＋Ｍ期、使增殖指数减低。     

萝卜硫烷对乳腺癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响及作用机制研究

目的:研究萝卜硫烷(sulforaphane,SUL)对不同类型乳腺癌细胞增殖和细胞周期细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法、流式细胞术和Western印迹法,研究不同浓度受试物对F3Ⅱ、MCF-7、MDA-MB-231和ZR-75-1细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、F3Ⅱ细胞凋亡和p34cdc2及Cdc25C表达的影响。结果:(1)SUL对所选的四个细胞系均有很强的增殖抑制作用,其中雌激素正响应型(ERP)细胞对SUL的敏感性明显强于雌激素负响应型(ERN)细胞和扩散性较强的F3Ⅱ细胞;(2)SUL对F3Ⅱ细胞和两种ERP细胞均呈现G2/M期阻滞作用,而对ERN细胞周期则无影响;(3)SUL阻滞F3Ⅱ细胞从G2期向M期转化的作用机制是提高Cdc2的磷酸化水平,降低Cdc25C磷酸化酶的表达,从而抑制细胞周期素B1-Cdc2复合物激酶的去磷酸化作用;(4)在实验条件下,SUL不引起F3Ⅱ细胞凋亡。结论:SUL对四个乳腺癌细胞系细胞增殖抑制活性和细胞周期影响存在明显的差异,不引起F3Ⅱ细胞凋亡。对F3Ⅱ细胞周期G2/M阻滞作用的机制是提高Cdc2的磷酸化水平,降低Cdc25C磷酸化酶的表达。