circ＿0072088靶向miR-578促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的:探讨circ＿0072088对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的影响及其对miR-578的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常滑膜组织、类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088和miR-578的表达量;原代分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将细胞分为si-NC组、si-circ＿0072088组、miR-NC组、miR-578组、si-circ＿0072088+anti-miR-NC组、si-circ＿0072088+anti-miR-578组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0072088与miR-578的相互作用。结果:与正常滑膜组织比较,类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088的表达水平升高(P<0.05),miR-578的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ＿0072088组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数减...     

circ＿0000515靶向miR-1258调控结肠癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨circ₀000515调控结肠癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法:选取41例结肠癌病人癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ₀000515和miR-1258的表达水平;结肠癌细胞SW620分为si-circ₀000515组、si-NC组、miR-1258组、miR-NC组、si-circ₀000515+anti-miR-NC组、si-circ₀000515+anti-miR-1258组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测SW620细胞活性;流式细胞术检测SW620细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测circ₀000515和miR-1258的靶向关系。结果:与癌旁组织比较,结肠癌组织中circ₀000515表达水平升高,miR-1258表达水平降低(P<0.01)。抑制circ₀000515表达或过表达miR-1258,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高(...     

circAFF2通过调节PI3K/AKT通路对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨circ＿AFF2通过调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/蛋白激酶B(AKT)通路对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法：采用qRT-PCR检测健康对照滑膜组织和RA滑膜组织中circ＿AFF2相对表达量。通过体外培养RA滑膜成纤维MH7A细胞,将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ＿AFF2组(转染si-circ＿AFF2)和si-circ＿AFF2+IGF-1组(转染si-circ＿AFF2后,采用50 ng/mL的PI3K/AKT通路激活剂IGF-1处理)。然后通过qRT-PCR检测各组细胞circ＿AFF2相对表达量;MTT检测各组细胞活力;Western blotting检测各组细胞Ki-67、PCNA、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和PI3K/AKT通路相关蛋白的表达;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果：与健康对照滑膜组织相比,circ＿AFF2相对表达量在RA滑膜组织中明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si...     

Hsa＿circ＿0000741对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨环状RNA(hsa＿circ＿0000741)对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 通过R语言limma包分析GSE182471和GSE165884数据集;通过常规培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和正常细胞系MCF-10A,提取细胞总RNA,逆转录后进行qRT-PCR测定目的基因表达量;通过lipo2000转染si-hsa＿circ＿0000741对目的基因进行敲减,将其编为si-hsa＿circ＿000074组,转染si-nc后将其编为si-nc组,并用qRT-PCR实验检验转染效率,之后进行集落和CCK-8实验对于si-hsa＿circ＿000074组和si-nc组之间的细胞增殖速率进行检验;开展划痕和侵袭实验对于si-hsa＿circ＿000074组和si-nc组之间的细胞迁移和侵袭能力进行进行检验。结果 GSE182471和GSE165884数据集取交集得出has＿circ＿0000741在两个数据集中癌组织组均显著上调;qRT-PCR实验发现hsa＿circ＿0000741在正常细胞系中表达量低于癌细胞系,在三阴性细胞系MDA-MB-...     

环状RNA hsa＿circ＿0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa＿circ＿0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa＿circ＿0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^-1)雷帕霉素组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,W...     

抑制LINC00667表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（LncRNA）LINC00667对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 复制类风湿关节炎（RA）模型大鼠,SPF级Wistar大鼠分离踝关节滑膜组织,用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测RA-FLS中LINC00667和miR-19a-3p的表达。在RA-FLS中分别转染si-NC（si-NC组）、si-LINC00667（si-LINC00667组）、miR-NC（miR-NC组）、miR-19a-3p模拟物（miR-19a-3p组）、si-LINC00667与anti-miR-NC（si-LINC00667+ anti-miR-NC组）、si-LINC00667与anti-miR-19a-3p（si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组）。CCK-8法检测各组转染后RA-FLS的增殖抑制率。Transwell法检测RA-FLS迁移、侵袭。Western blotting检测E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）表达。双萤光素酶报告验证LINC00667和miR-19a-3p的靶向关系。结果 RA模型组滑膜组织中LINC00667表达量约为正常组的270%,miR-19a-3p表达量约为正常组的36%（P <0.05）。转染成功后,si-LINC00667组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于si-NC组（P <0.05）,si-LINC00667组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于si-NC组（P <0.05）。LINC00667靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于miR-NC组（P <0.05）,miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于miR-NC组（P <0.05）。si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量低于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）,si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量高于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）。结论 抑制miR-19a-3p通过靶向LINC00667,抑制RA-FLS的增殖、迁移、侵袭,LINC00667或可用作诊断和治疗RA的靶点     

circPTPRA靶向miR-140-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的机制研究

目的：探讨circPTPRA对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移的影响及其对miR-140-5p的调控作用。方法：原代分离培养人正常滑膜成纤维细胞与类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分为NC组(不转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-circPTPRA组(转染si-circPTPRA)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-140-5p组(转染miR-140-5p mimics)、anti-miR-NC+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-NC和si-circPTPRA)、anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-140-5p和si-circPTPRA)。qRT-PCR检测circPTPRA与miR-140-5p的表达量;MTT实验检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circPTPRA与miR-140-5p的靶向关系。结果：与正常滑膜成纤维细胞比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中circPTPRA的表达量升高,miR-140-5p的表达量降低(P&l...     

miR-27a-3p介导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭的分子机制研究

目的 探讨微RNA-27a-3p(miR-27a-3p)调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭的分子机制.方法 体外分离培养正常滑膜成纤维细胞(SFs)和RASFs.实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-27a-3p表达;预测miR-27a-3p可能结合的潜在靶基因,并通过荧光素酶报告试验进行验...     

lncRNA DLEU2通过调节miR-410-3p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移、侵袭的影响

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）DLEU2对微小RNA（miR） 410 3p的调控作用及对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测类风湿性关节炎患者滑膜组织中DLEU2和miR 410 3p的表达。LncBase Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析DLEU2和miR 410 3p的靶向关系。在RA滑膜成纤维细胞MH7A中转染si DLEU2或miR 410 3p,或共转染si DLEU2和anti miR 410 3p。噻唑蓝（MTT）、Transwell、Western blot检测RA滑膜成纤维细胞MH7A的增殖、迁移、侵袭及细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶（MMP） 2、MMP 9蛋白表达。结果 RA患者滑膜组织中DLEU2表达量明显增加,miR 410 3p表达量显著减少（P＜0.05）。lncRNA DLEU2靶向调控miR 410 3p的表达。抑制DLEU2表达或miR 410 3p过表达明显降低RA滑膜成纤维细胞MH7A 24 h、48 h、72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP 2、MMP 9蛋白表达量,而显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。干扰miR 410 3p表达逆转了抑制DLEU2表达对RA滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论 lncRNA DLEU2在类风湿关节炎滑膜组织中表达上调,抑制其表达通过靶向miR 410 3p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。     

miR-21对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

探讨miR-21对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖与凋亡的影响。方法 Realtime PCR方法检测正常和RA-FLS中miR-21表达差异。RA-FLS分成Control组、miR-NC组（转染mimics control）、miR-21组（转染miR-21 mimics）、miR-21+IGF-1组（转染miR-21 mimics,PI3K/Akt信号通路特异性激活剂IGF-1处理）,CCK-8实验分析细胞增殖活性变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blot方法分析细胞中C-Caspase-3、Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达变化。结果 与正常-FLS比较,RA-FLS中miR-21表达水平降低（P＜0.05）。与Control组、miR-NC组比较,miR-21组RA-FLS细胞中miR-21表达水平升高,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率增加,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平降低（P＜0.05）。与miR-21组比较,miR-21+IGF-1组RA-FLS增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达增多,C-Caspase-3、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多（P＜0.05）。结论 上调miR-21可抑制RA-FLS增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与降低PI3K/Akt信号激活水平有关。     

circ＿0011385和miR-330-3p在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨结肠癌组织中circ＿0011385和miR-330-3p表达情况,研究circ＿0011385靶向miR-330-3p对结肠癌细胞(SW1116)恶性行为的影响。方法:RT-q PCR检测circ＿0011385和miR-330-3p在结肠癌组织中表达情况,并分析circ＿0011385和miR-330-3p表达水平与结肠癌患者临床病理特征的关系。皮尔森相关分析确定circ＿0011385和miR-330-3p表达的相关性。circ＿0011385和miR-330-3p的关系通过双荧光素酶报告实验来确定。将si-circ＿0011385、si-NC、si-circ＿0011385+anti-miR-NC、si-circ＿0011385+anti-miR-330-3p分别转染SW1116细胞,Transwell、流式细胞术分析细胞迁移、侵袭和凋亡。结果:结肠癌组织中circ＿0011385呈高表达,miR-330-3p呈低表达,二者的表达水平呈负相关关系(r=-0.8924)。circ＿0011385和miR-330-3p表达水平与结肠癌患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>...     

类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P<0.05);在RA活动组与缓解组的比较中发现活动组miR-146a、miR-16表达水平高于缓解组(P<0.05)。RA患者组miR-146a、miR-16的表达与ESR、CRP及DAS28评分之间呈正相关(P均<0.01),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。     

circ＿0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/YAP信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖迁移和侵袭

目的:探究circ-0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/Yap信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:RT-PCR检测HIOEC、Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414表达。将未转染任何质粒的SCC-9细胞设为Control组;将分别转染pcDNA-circ-0086414、pcDNA-NC、miR-155-5p inhibitor、miR-NC inhibito质粒的SCC-9细胞中,并设为pcDNA-circ-0086414组、pcDNA-NC组、miR-155-5p组、miR-NC组;将pcDNA-circ-0086414质粒转染于SCC-9细胞中,同时在培养基中加入5μmoL/L Verteporfin共同培养,设为Verteporfin组。RT-PCR检测细胞中circ-0086414、miR-155-5p表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测细胞中Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验验证circ...     

环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA-145影响胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移实验研究

目的:探讨环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA(miR)-145对胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移的影响。方法:选择胰腺癌细胞株SW-1990,分为si-NC组、si-circ＿0020123组、si-circ＿0020123+anti-miR-145组,进行细胞转染。采用MTT法检测细胞增殖能力。采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭与迁移能力。采用反转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ＿0020123和miR-145相对表达量。采用Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)。采用双荧光素酶报告实验分析circ＿0020123与miR-145的靶向作用。结果:与si-NC组比较,si-circ＿0020123组和si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显降低(均P<0.05)。与si-circ＿0020123组比较,si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显...     

类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康对照外周血(peripheral blood,PB)、10例RA患者滑液(synovial fluid,SF)中NK-22细胞(NKp44+CCR6+NK细胞)比例。流式细胞术分选滑液NK-22细胞,鉴定细胞纯度;体外悬浮培养2周,佛波酯(PMA()20ng/ml)和ionomycin(0.5μmol/L)刺激后NK-22细胞培养上清液分别作用于成纤维样滑膜细胞(fibroblastlike synoviocytes,FLS)24 h、48 h、72 h、96 h,MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况。ELISA检测NK-22细胞培养上清中IL-22、T0.N05F)-;αR浓A度患。者结滑果液①NKR-A22患细者胞外比周例血为N4K.5-62%2细,明胞显比高例于为自0身.9外56周%,血明比显例高1于.31健5%康(对P<照0.外05)周。血②N流K式-22分细选胞2比×1例04个0.0N0K3%-2(2P细<胞,细胞纯度>90%。③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于成纤维样滑膜细胞24 h、48 h、72 h、96 h可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖(P<0.05)。④PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22、TNF-α浓度分别为941.82 pg/ml和368.10 pg/ml。结论类风湿关节炎患者关节液NK-22细胞可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖,其可能机制与NK-22细胞能分泌白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)有关。     

miR-128抑制结肠癌侵袭转移的机制研究

目的分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128mRNA的表达,Westernblot法检测miR-128蛋白的表达。结果转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降（均P＜0.05）,且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降（均P＜0.05）。结论miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用。     

CXCL16/CXCR6在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及其在滑膜细胞增殖中的作用

目的：探讨趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）中的表达及其对FLS增殖的作用。方法:纳入RA 8例、骨关节炎（osteoarthritis,OA）7例、健康对照3例,采用组织块贴壁方法体外分离培养人膝关节FLS,第3~5代细胞用于后续研究。Western blot方法检测CXCL16及其受体CXCR6在3组FLS的表达水平;不同浓度的重组人CXCL16(0、10、50、100、200 μg/L)刺激3组FLS后,细胞活性检测试剂盒-8（cell counting kit,CCK-8）检测FLS增殖水平;Western blot方法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS中pAKT/AKT水平;ELISA法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS培养上清中TNF-ɑ、IL-6、MMP-3、RANKL水平。结果: RA-FLS中CXCL16、CXCR6蛋白表达水平均明显高于OA组和对照组（P<0.05）,OA组和对照组间差异无统计学意义;重组人CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后RA-FLS增殖能力明显高于非刺激组（P均<0.05）,OA组和对照组FLS经CXCL16刺激后细胞增殖水平无明显变化（P>0.05）;200 μg/L CXCL16刺激后,RA-FLS表达pAKT/AKT明显增高;CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后,RA-FLS培养上清中IL-6和RANKL表达明显增加（P < 0.05）,而MMP-3、TNF-ɑ水平无明显变化。结论:CXCL16及其受体在RA-FLS中表达增高,重组人CXCL16可促进RA-FLS增殖活化、分泌炎性因子增加,提示CXCL16参与了RA的滑膜炎症。     

三七总皂苷抑制人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系增殖和促凋亡

目的:探讨三七总皂苷对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的的影响及可能机制。方法:MH7A细胞用不同剂量(0.5、1.0、2.0mg/mL)三七总皂苷干预细胞24h后,CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测蛋白(Ki-67、PCNA、E-cadherin和N-cadherin)的表达,qRT-PCR法检测miR-335-5p表达。转染miR-335-5p模拟物、转染miR-335-5p抑制剂至MH7A细胞后再用2.0mg/mL三七总皂苷干预24h,然后采用上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭。结果:与对照组比较,三七总皂苷降低MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量(P<0.05),而提高细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达量(P<0.05),同时促进细胞中miR-335-5p表达(P<0.05)。上调miR-335-5p后,MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量均降低(P<0...