ELISA酶联免疫吸附测定法简介

<正>近年来由于工业“三废” 处理不当,引起了对农作物、畜禽及水产品的污染;农业与畜牧业生产中大量使用农药、化肥、抗生素、生长素,引起农药、抗生素、生长素残留超标;流通过程中的保存、包装不当造成霉菌、毒素的污染;在食品的生产环节中,不法者为了牟取暴利掺杂、使假、滥用     

吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立

通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性。在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株。结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克隆抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10-6～3.24×10-4mg/mL(R2=0.9928),最低检测限为8.00×10-6mg/mL。     

乳铁蛋白的免疫化学分析法-酶联免疫吸附测定法

应用酶联免疫法测定初乳中乳铁蛋白的含量。检测的线性范围为3.1～200ng/ml，最小检测限为1.5ng/ml，回收率为91.82%～115.56%之间，变异系数在6.20%～9.18%之间。     

虾中硫丹残留的酶联免疫吸附检测方法的研究

目的:建立一种虾中农药硫丹残留的快速检测方法.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定农药硫丹残留.提取溶剂为丙酮.该检测方法中用阴性样品作标准曲线.结果:该方法的检出限(IC15)约为1.6 μg/L,灵敏度(IC50)约为17μg/L.线性范围1.8～60μg/L.平均回收率67.56%～99.81%.结论:该检测方法符合<日本肯定列表>中规定的水产品中硫丹的检测要求,且样品的处理过程较为简单,适用于大量样品的快速检测.     

食品中硫丹残留酶联免疫吸附检测方法的研究

建立了测定食品中硫丹农残的酶联免疫吸附检测法(EUSA).考察了3种提取方法并比较了添加回收率.针对不同的样品,分别采取不同的方式有效地消除了基质对ELISA分析的影响.以ELISA法进行测定得到的样品添加回收率为82.6%-112%,变异系数(CV)为3.65%-16.97%.ELISA法和气相色谱法分析结果具有较好的一致性,从而证明了本实验所建立的ELISA方法的可行性.本方法比常规方法更加简便、快捷,其最低检出限为(0.8±0.1)μg/kg     

直接竞争酶联免疫吸附法检测食品中三聚氰胺残留

采用酶标抗原建立了高效、高灵敏的三聚氰胺直接竞争的ELISA（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法。方法 以三聚氰胺单克隆抗体包被作为固相抗体,辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase,HRP）标记的抗原与标准品（或样品）中三聚氰胺竞争结合抗体,建立了直接竞争酶联免疫检测体系。结果 以三聚氰胺为标准品建立标准曲线,得到方法的IC50为8.84μg/L,灵敏度为0.65μg/L,线性范围0.9-35μg/L;检测样品的回收率为70.0%-127.9%,与三聚氰酸交叉反应率为60%,其他结构类似物基本无交叉反应。结论 本方法灵敏度高、特异性强、检测快速, 可以满足实际样品的检测需求。     

酶联免疫吸附法测定水产品中甲基睾酮残留

建立了测定水产品中甲基睾酮(MT)残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic ELISA)。采用琥珀酸酐法衍生化制备半抗原MT17,进一步偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)制备免疫原MT17-KLH,经动物免疫成功获取特异性识别MT的多克隆抗体(与其它结构类似物交叉反应小于1%)。优化确立了ic ELISA最佳检测条件:包被原浓度100μg/L,MT多克隆抗体稀释度1/1.2×105,抗体反应时间40 min,药物稀释液为PBS,水产样品经乙腈提取,N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)分散固相萃取(DSPE)净化后用于ic ELISA测定。本方法的抑制中浓度IC50为3.48μg/L,检测线性范围为0.77~13.06μg/L。水产样品加标回收率为81.02~103.19%,相对标准偏差为4.46%~13.14%,测定结果与液相色谱-质谱联用法具有良好的相关性(R=0.9971)。本方法可用于水产品中甲基睾酮残留的快速测定。     

酶联免疫吸附法检测动物源性食品中氨苯砜残留

应用间接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物源性食品中氨苯砜残留的方法,并对其各项技术参数进行了评价。结果显示,该方法的半数抑制浓度IC50为0.369μg/L,对鸡肉、猪肉样本的检测限为0.2μg/kg,对鸡蛋、蜂蜜样本的检测限为2μg/kg,对牛奶样本的检测限为0.6μg/L;样本添加回收率为78.2%~104.0%,变异系数为5.2%~13.5%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法操灵敏度高、快速准确,适用于动物源性食品中氨苯砜残留的快速检测。     

酶联免疫检测试剂盒检测水产品中孔雀石绿的应用研究

利用酶联免疫试剂盒检测水产品中孔雀石绿残留量,研究了国产试剂盒检测性能,并与高效液相色谱法进行了比较。结果表明：孔雀石绿含量在0．5μg／kg,8μg／kg范围时,试剂盒具有良好线性,最低检出限为0．16μg／kg;试剂盒测得孔雀石绿总量的加标回收率在7l％-120％,批内变异系数介于5．61％-18．6％;检测鳜鱼实际样品时,试剂盒和高效液相色谱法定性判定结果一致,定量结果有所差异,试荆盒测得鳜鱼样品中孔雀石绿残留量为37．75μg／kg,高效液相色谱法测得结果为46．29μg／kg,但准确度偏差范围尚符合国家质量监督检验检疫总局《残留分析质量控制》的要求。综上所述,国产酶联免疫检测试剂盒操作方便快速,灵敏度较高,重现性较好,适用于大量样品的快速检测。     

酶联免疫吸附法直接测定乳制品中雌二醇残留

建立了测定乳制品中雌二醇残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)竞争法,其重现性好、特异性强,测定线性范围0.01mg/L～1000.0mg/L,最低检出浓度为9.714mg/L,乳制品的加标实验回收率为87.2%～120.8%。     

灵芝酸A多克隆抗体制备及酶联免疫吸附测定法的建立

以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示：多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6～27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%～118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。     

酶联免疫吸附法直接测定乳制品中催乳素残留

建立了测定乳制品中催乳素残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)竞争法,它重现性好,特异性强,测定线性范围为0.35ng/mL～200.0ng/mL,最低检出浓度为9.714ng/L,乳制品的加标实验回收率≥80.3%。     

间接酶联免疫吸附检测克伦特罗条件优化

优化间接酶联免疫吸附法的测定条件。采用间接测定克伦特罗抗血清效价和血清阻断率。采用0.5μg/mL的包被浓度最佳,2%卵清蛋白的封闭效果最好,抗血清工作浓度可选择为1∶1000,抑制曲线表明,小鼠抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系。相同条件下邻苯二胺(OPD)显色值高于四甲基联苯胺(TMB),OPD的浓度以及过氧化氢的添加量对保质期影响很大,抗体稀释液选用0.5%明胶较好。经过实验,建立了实用的检测条件。     

酶联免疫吸附测定法检测白条鸭表皮组织中的脱氢松香酸

通过优化抗原包被质量浓度、抗体稀释倍数及二抗稀释倍数等参数,建立白条鸭表皮组织中脱氢松香酸（dehydroabietic acid,DHAA）含量的间接竞争酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法。白条鸭表皮组织中的DHAA用甲醇提取,经磷酸盐缓冲液稀释,使用酶标板进行检测。结果表明：最佳抗原包被质量浓度为1.0 μg/mL,最佳抗体稀释倍数为1∶6400,最佳二抗稀释倍数为1∶10000;ELISA方法的检测限及检测范围分别为41.0 ng/g和100.0～20150.0 ng/g;在100～5000 ng/g添加量范围内,DHAA回收率为78.2%～97.2%;实际样品分析结果显示,市场流通领域中白条鸭表皮组织中DHAA的检出率达到87%,含量范围为118.6～1199.2 ng/g。     

酶联免疫吸附技术及其在食品安全检测中的应用

主要综述酶联免疫吸附技术及其在农药残留、食品中违法添加的非食用物质、食品中生物毒素、食品中病原微生物、转基因食品等食品检测中的应用,并根据当前研究现状进行了展望。     

酶联免疫吸附技术在食品检测分析中的研究进展

酶联免疫吸附技术(ELISA)是酶免疫测定技术中应用最广泛的技术,是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,通过酶与底物产生颜色反应,用洗涤法将液相中的游离成分除去后再进行定量测定。主要分为夹心法、间接法和竞争法。本文简要介绍了几种常用方法及其基本作用机制,详述了ELISA检测技术在食品检测中具体应用及发展历史与现状,对其在食品中农药残留、病原微生物、生物毒素、转基因食品、重金属残留、过敏性残留物及违规添加成分检测等方面的应用情况进行系统总结,并对其发展前景进行了分析。     

间接竞争酶联免疫吸附测定水产品中的组胺残留

本文通过制备特异性识别组胺衍生物的多克隆抗体,建立了针对水产品中组胺的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。以组胺等为反应原料经三步化学反应合成组胺半抗原,采用活泼酯法将组胺半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联作为包被原和免疫原,用紫外扫描法进行鉴定,结果显示组胺半抗原与载体蛋白偶联成功。通过免疫新西兰大白兔制备组胺抗血清,采用辛酸-硫酸铵方法纯化血清获得了相应的特异性多克隆抗体。通过对ic ELISA系列反应条件的摸索,确定了各组分的最适工作条件。试验结果表明:该方法对于组胺的IC50为0.91 ng/mL,与组氨酸、N-酰基组氨酸、3-甲基组胺等多种类似物及其衍生物均无交叉反应,方法特异性良好;线性检测范围为0.1～8.1 ng/mL,检出限为0.10 ng/mL;按照10、20、30 ng/g的添加量添加组胺至鱼、虾和贝类样品中,测得其回收率为98.9%～130.1%。方法检测的准确性好灵敏度高,适用于实际水产样品中组胺的检测。     

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究

建立了间接ELISA检测盐酸克伦特罗的方法,并对其参数进行了分析计算。在该检测方法中,抗盐酸克伦特罗(CL)抗体最适稀释度为1∶1000,羊抗兔酶联抗体(HRP-IgG)的最适稀释度为1∶1500。该检测方法的检测灵敏度可达0·1046μg/L,生物检测限为1·452μg/L,线性检测范围为7·26~90·75μg/L。     

酶联免疫吸附法测定乳粉中IgG含量

母乳化乳粉中添加保健功能因子人Ig G.用饱和硫酸铵法从健康人血清中制备粗Ig G,经Sephadex G-100柱制备纯Ig G;用纯人Ig G作为抗原,免疫兔子制备兔抗人Ig G抗体.建立乳制品中人Ig G含量酶联免疫吸附测定,最佳包板物浓度为5.25μg/ml,最佳血清效价为11 600,抗血清亲和力为2.40×107,回收率为88%～94%,测定Ig G浓度范围为5.0～160 ng/ml,最小检测限为3.25 ng/ml.     

酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中的研究进展

酶联免疫吸附技术(ELISA)作为先进的免疫化学检测技术正越来越广泛地应用于沙门氏菌检测中.文中介绍了沙门氏菌的特性及其主要危害,阐述了ELISA的基本原理,并结合国内外研究成果,综述了目前ELISA法在沙门氏菌检测中几种常用的方法,主要有:直接ELISA法、竞争ELISA法、Dot-ELISA法、LPS-ELISA法和PCR-ELISA法,从而表明了在沙门氏菌检测中ELISA法具有良好的特异性和敏感性.