细胞凋亡与新生儿缺氧缺血性脑损伤的研究

该文主要阐述细胞凋亡与新生儿缺氧缺血性脑损伤的关系，提出细胞凋亡机制在缺氧缺血性脑损伤中的重要性。通过对半胱氨酸蛋白酶家族在细胞凋亡中所起作用的了解，具体阐述两条依赖半胱氨酸蛋白酶的凋亡途径。即线粒体介导的内源性途径和死亡受体介导的外源性途径。最后对半胱氨酸蛋白酶抑制剂用于将来的临床治疗提出挑战及前景。     

细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

缺氧缺血性脑损伤已被证实有细胞凋亡现象，细胞凋亡是生理性细胞死亡在形态学上的表现，是一种主动性细胞杀过程，有高度可调控性，抗凋亡剂如放线菌酮及谷氨酸受体拮抗剂等的早期使用能通过减少神经丢失，减轻脑损害而形成凋亡的可逆过程，本文着重叙述了细胞凋亡特征，神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤的关系及其可能的发病机制。     

细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

缺氧缺血性脑损伤已被证实有细胞凋亡现象，细胞凋亡是生理性细胞死亡在形态学上的表现，是一种主动性细胞自杀过程，有高度可调控性，抗凋亡剂如放线菌酮及谷氨酸受体拮抗剂等的早期使用能通过减少神经元丢失，减轻脑损害而形成凋亡的可逆过程，本文着重叙述细胞凋亡特征，神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤的关系及其可能的发病机制     

新生大鼠缺氧缺血脑损伤细胞间粘附分子-1及细胞凋亡变化的关系

[目的]研究新生大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxicischemicbraindamage,HIBD)后脑细胞间粘附分子-1及细胞凋亡的变化及其相互关系,为临床HIBD的诊治提供理论依据。[方法]7日龄SD大鼠60只,随机分成两组:正常对照组30只,HI组(hypoxic-ischemic,HI)30只:HIBD)造模。大鼠于处置后6、12、24、48h、7d:分别采用免疫组化法和Tunel法检测脑组织中细胞间粘附分子-1(intercellularadhesionmoleculel-1,ICAM-1)的表达和细胞凋亡数目。[结果]与正常对照组相比,HI组脑组织中ICAM-1的:表达和细胞凋亡数在术后12h升高,差异有非常显著性(P<0.01),24h和48h达高峰。ICAM-1和细胞凋亡之间相关系数r=0.829,P<0.01。[结论]新生大鼠缺氧缺血脑损伤后脑细胞ICAM-1的表达和细胞凋亡均增加,两者间呈高度线性正相关关系。     

脑缺血细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶家族研究进展

<正> 缺血性脑血管病以其高发病率、高致残率、高死亡率严重危害人类的健康与长寿,对患者的生活能力及质量的困扰尤为重要。脑缺血损伤后神经元除经典的坏死外,还以凋亡的方式死亡。有人认为迟发性神经元死亡主要是通过凋亡完成的,凋亡神经元主要分布在缺血半影区。     

K_(ATP)开放剂克罗卡林对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的:探讨ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂克罗卡林(cromakalim)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hy-poxic-ischemic brain damage,HIBD)细胞凋亡的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供依据。方法:建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、DNA原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色方法观察正常对照组、假手术组、HIBD组,克罗卡林用药组(用药1组),克罗卡林+格列苯脲用药组(用药2组)病理变化、细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达情况。结果:①HIBD组大脑皮质区病理变化明显,用药1组病理变化减轻,用药2组病理变化加重;②对照组及假手术组见少量凋亡细胞;HIBD组凋亡细胞明显增多,与对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0·01);用药1组凋亡细胞明显减少,与HIBD组比较差异有显著性(P<0·01);用药2组凋亡细胞与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05);③正常对照组及假手术组大脑皮质区Bcl-2有一定量的表达,Bax几乎无表达,HI后该区Bcl-2表达减弱,Bax表达增强,用药1组Bcl-2表达较HIBD组明显增强(P<0·01),Bax表达明显减弱(P<0·01),而用药2组Bcl-2表达及Bax表达与HIBD组比较差异无显著性(P>0·05)。结论:HIBD后Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加;克罗卡林可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,而KATP阻断剂格列苯脲可拮抗克罗卡林以上作用,这可能是克罗卡林治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

神经节苷脂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

[目的]探讨神经节苷脂(gangliosides,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)的保护作用及其机制,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供依据。[方法]建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、DNA原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色与医学图像分析相结合方法观察正常对照组、假手术组、生理盐水组及GM1干预组海马CA1区在缺氧缺血后6、24、72h、7d病理变化、神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达。[结果]①缺氧缺血后生理盐水组海马CA1区病理变化明显,GM1干预组上述变化减轻;②正常对照组及假手术组海马CA1区Bcl-2表达较弱,HI后该区Bcl-2表达仍弱,Bax表达增强,出现凋亡细胞,以3d最明显;GM1干预组Bcl-2表达较盐水组增强,Bax表达较盐水处理组减弱(P<0.01),凋亡细胞减少。[结论]HIBD后Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加。GM1可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,这可能是GM1治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤凋亡基因的变化及神经节苷酯的治疗作用

【目的】探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage，HIBD)后Bcl-2、Bax基因表达与细胞凋亡的关系及神经节苷酯(gangliosides，GM1)对其的影响。【方法】建立新生鼠HIBD动物模型，用TUNEL法和免疫组化法观察缺氧缺血和GMI干预后不同时间点细胞凋亡情况及凋亡基因Bcl-2、Bax的变化。【结果】缺氧缺血组随时间延长脑组织中Bcl-2、Bax的表达增加，Bcl-2／Bax的比值下降，同时凋亡细胞数增加，表明Bcl-2、Bax两者比值的降低促进凋亡的发生。GM1干预组Bcl-2表达增加显著，降低了Bax的表达，凋亡细胞减少。【结论】GM1可能通过改变凋亡基因的表达而抑制神经细胞的凋亡过程。     

缺氧缺血性脑损伤的发病机制研究进展

缺氧缺血性脑病的发病机制复杂 ,能量代谢障碍、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸的神经毒、NO和氧自由基的损伤以及细胞凋亡等共同参与缺氧缺血性脑损伤的病理生理过程。深入研究脑损伤的发病机制 ,对于选择合适的干预措施、减轻脑损伤后遗症具有重要意义。     

缺氧缺血性脑损伤的病理生理及治疗

缺氧缺血性脑损伤的发生发展过程中涉及到中枢神经系统钙离子稳态失衡、兴奋性神经递质的释放、自由基的产生、能量代谢障碍以及一些体液因子影响等因素的共同作用，目前，国内外学者根据ＨＩＥ这些病理因素，在动物实验中采用相应的干扰措施，取得了一定的本文就近年的治疗现状作一综述。     

半胱胺酸蛋白酶抑制剂防治缺血性脑损伤研究

半胱胺酸蛋白酶抑制剂能阻断凋亡所需的特异蛋白酶 ,与其它神经保护剂相比具有较宽的治疗窗。该文从半胱胺酸蛋白酶抑制剂种类 ,作用机制 ,治疗窗等多个方面来阐述半胱胺酸蛋白酶抑制剂 ,探讨半胱胺酸蛋白酶抑制剂在新生儿缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的治疗价值。     

谷胱甘肽抑制新生大鼠脑缺氧缺血海马CA1区细胞凋亡的研究

[目的]研究谷胱甘肽对缺氧缺血脑损伤引起的神经细胞凋亡的作用.[方法]利用新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,通过末端转移酶介导的原位缺口标记(TUNEL)法检测并比较缺氧缺血状态下用药与否对海马CA1区神经细胞凋亡的影响.[结果]谷胱甘肽(还原性)治疗可显著减少海马CA1区凋亡的阳性细胞数.[结论]谷胱甘肽可有效抑制缺氧缺血损伤引起的海马部位神经细胞凋亡,可有效对抗氧化张力在缺氧缺血损伤中引起的细胞凋亡.     

rhEPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEP0）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用。方法57只7天龄新生鼠随机分为假手术对照（正常对照组）、缺氧缺血性脑损伤动物模型组（HIBD模型）、rhEP0治疗组。在建立HIBD模型后,rhEPO治疗组立即一次性腹腔注射3000IU／kg剂量的rhEPO;HIBD模型组注射等量生理盐水;于处置后24h电镜观察脑组织病理形态学变化,流式细胞计检测脑受损局部神经元细胞凋亡情况,实验7天进行短期感觉运动反射评价。结果与正常对照组相比,HIBD模型组光镜下左侧大脑病理损伤明显;HIBD模型组神经细胞凋亡与正常对照组相比增加（28．30±4．80VS47．14±6．97,P〈0．05）,存活细胞减少（72．42±7．93VS48．33±8．39,P〈0．05）;rhEPO治疗组细胞凋亡与HIBD模型组相比减轻（47．14±6．97VS36．88±9．43,P〈0．05）,存活细胞增多（48．33±8．39VS60．06±8．32,P〈0．05）;HIBD模型组悬吊测试、翻正反射、悬崖逃避反射、趋地反射这四项反射与正常对照组相比成绩均较差,提示神经功能受损;rhEPO治疗组翻正反射及悬崖逃避反射时间与HIBD模型组相比缩短,（4．59±0．11VS2．84±0．13,10．84±1．26VS8．49±1．03,均P〈0．05）,以上差异均有统计学意义。结论外源性给予rhEP0能够减轻HIBD大鼠脑组织病理损伤,稳定细胞结构,抑制细胞凋亡,改善短期行为学评价,从而发挥其神经保护作用。     

促红细胞生成素对新生鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用的研究

[目的]探讨促红细胞生成素对缺血缺氧新生鼠脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）的保护作用.[方法]7日龄Wistar大鼠102只,随机分成3组,①假手术组（n=18）;②观察组（n=42）：HIBD模型后即刻给促红细胞生成素3 000 U/kg腹腔注射;③对照组（n=42）：HIBD模型后即刻腹腔注射等体积的生理盐水.于处置后2、6、12、24、48 h检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;并于处置后48 h作HE和TUNEL染色光镜下检测脑细胞凋亡数,以及测定脑组织水含量.[结果]观察组脑组织SOD升高、MDA降低、脑细胞凋亡数及脑组织水含量减少,与对照组比较差异均有显著性（P＜0.05）.[结论]促红细胞生成素可通过拮抗氧自由基、减轻脑水肿和阻止神经细胞凋亡,发挥对新生鼠HIBD时脑的保护作用.     

丙酸睾酮预处理对HIBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响

【目的】观察丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大脑皮质和海马区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达及神经细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。【方法】新生3日龄SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=24),HIBD组(n=24),T预处理组(n=24)。T预处理组大鼠于3日龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7日龄时进行HIBD模型制作。于HI后12、24、72h、7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目而间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24、72h、7d制作石蜡切片,用免疫组化SABC法观察NGF在各组大鼠大脑皮质和海马表达的动态变化。【结果】HI后24、72h和7d,正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量阳性细胞表达,而T预处理组大鼠于HI后24h和72h NGF表达水平明显增高(P<0.05)。正常对照组和HIBD组大鼠海马区偶尔可见NGF免疫阳性细胞表达,T预处理组大鼠海马区于HI后72h出现NGF免疫阳性细胞表达轻微增多,与正常对照组和HIBD组比较差异均有显著性(P<0.01)。【结论】丙酸睾酮预处理可明显见减轻大脑皮质神经细胞凋亡、增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区NGF表达,从而发挥神经保护作用。     

丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制研究

目的 观察丙酸睾酮（testosterone propionate．T）预处理对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生鼠皮质及海马区雄激素受体（androgen receptor，AR）表达及神经细胞坏死和凋亡的影响，探讨其保护作用的可能机制。方法 新生3d龄SD大鼠随机分为3组，①正常对照组（n=24）；②HIBD组（n==24），③T预处理组（n=24）。T预处理组大鼠于3d龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7d龄时进行HIBD模型制作。于缺氧缺血（HI）后12h，24h，72h，7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目，间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24h，72h，7d制作石蜡切片，用免疫组化法观察各组大鼠大脑皮质和海马AR表达的动态变化。结果 HIBD组大脑皮质和海马区细胞数明显比正常对照组减少，差异有显著意义（P＜0．05），而T预处理组神经元坏死较HIBD组有所减轻，差异有显著意义（P＜0．05），缺血侧（左侧）神经细胞排列较整齐、结构较完整，神经元变性、坏死程度均较HIBD组轻，细胞凋亡少见。HI后24h，72h和7d，正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量AR阳性细胞表达，而T预处理组大鼠于HI后24h和72hAR表达水平明显增多（P＜0．05）。结论 T预处理可明显增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区AR的表达水平，减轻神经细胞凋亡，从而发挥神经保护作用。     

参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的干预作用

目的:研究参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的干预作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、Annexin V/PI染色法、免疫组化染色法观察正常对照组、假手术组、生理盐水组及参附干预组在缺氧缺血后2 h、12 h、24 h、3天、7天、14天的病理变化、神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:①缺氧缺血后生理盐水组海马CA1区病理变化明显,参附干预组上述变化减轻。②正常对照组及假手术组海马CA1区Bcl-2表达较弱,手术后该区Bcl-2表达仍弱,Bax表达增强,出现凋亡细胞,以24 h最明显;参附干预组Bcl-2表达较生理盐水组增强,而Bax表达减弱(P<0.05),凋亡细胞减少。结论:HIBD后Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加。参附可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,这可能是参附注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

早期应用z-VAD-fmk对新生鼠HIBD的保护作用及其机制研究

目的 观察半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂z-VAD-fmk对于缺血缺氧性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)大鼠脑组织的保护作用, 并探讨其机制。方法 7 d龄Wistar大鼠60只, 随机分为对照组、HIBD组和阻断组, 各20只。HIBD组及阻断组制作HIBD模型, 对照组大鼠分离但不结扎左侧颈总动脉, 术后亦不进行缺氧处理。阻断组在建模后给予z-VAD-fmk, 连续7 d。第8天处死全部动物。分别采用TUNEL法和RT-PCR法检测三组动物脑组织中神经细胞凋亡指数(apoptosis index, AI)和Caspase-3 mRNA。结果 对照组、HIBD组、阻断组AI值分别为0.15±0.02、21.36±2.45、10.42±1.62, 三组相比差异有统计学意义(P均＜0.05)。三组脑组织中Caspase-3 mRNA的相对表达量分别为0.016±0.003、0.561±0.067、0.216 ±0.036, 三组相比差异有统计学意义(P均＜0.05)。AI值随Caspase-3 mRNA的升高而升高, 随其降低而降低, 二者之间具有正相关关系(r=0.628, P＜0.05)。结论 z-VAD-fmk对HIBD大鼠脑组织有一定的保护作用, 其机制可能是降低脑组织中Caspase-3 mRNA的表达, 减轻神经细胞凋亡。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤激活素A表达变化及其意义

【目的】探讨激活素A(activin A,ACT A)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)中的表达规律及其意义。【方法】将80只新生7日龄Wistar大鼠随机分为10组(即正常对照组、假手术组和HIBD模型组-1、3、7、10、12、24、48、72 h),每组8只。应用HE染色及SP免疫组化方法,检测新生大鼠HIBD后不同时间点ACT A的表达。【结果】缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)1h,首先在左侧扣带皮质区出现ACT A的表达,分别与右侧及对照组比较差异均有显著性(2.50±1.51)个/mm2vs(1.13±0.64)个/mm2,(2.50±1.51)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2(P均<0.05);ACT A表达峰值出现在HI 10h,左侧额顶皮质、扣带皮质、纹状体、齿状回可见大量阳性细胞,与右侧比较差异有非常显著性[(19.75±2.19)个/mm2vs(1.25±0.71)个/mm2,P<0.01],且与对照组同侧比较差异亦有显著性[(19.75±2.19)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2,P<0.01]。至HI 72 h左侧额顶皮质区仍可见阳性细胞,与右侧及对照组比较差异均有显著性[(12.75±3.62)个/mm2vs(1.38±0.74)个/mm2,(12.75±3.62)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2,P均<0.05)。【结论】HIBD可强烈诱导ACT A的表达增加,提示激活素在新生大鼠HIBD的病理过程中可能发挥重要作用。