榄香烯治疗人喉癌裸鼠模型的实验研究

目的：研究榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的生长抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法：建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下移植模型。应用榄香烯治疗,观察移植肿瘤和裸鼠生长情况,计算肿瘤抑制率;逆转录PCR检测肿瘤组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）mRNA表达情况。结果：榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的增殖具有明显抑制作用,抑瘤率为52.24%。在实验组和对照组之间,鼠净重、瘤重和瘤体积相比,差异有统计学意义（均P〈0.01）;实验组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达低于对照组（P〈0.01）。结论：榄香烯可显著抑制人喉鳞状细胞癌裸鼠模型肿瘤的生长,其机制与榄香烯抑制VEGF-C和VEGFR-3的表达有关。     

内皮抑素治疗人喉癌裸鼠模型的实验研究

OBJECTIVE: To evaluate the inhibitory effect of endostatin on tumor growth of human laryngeal squamous carcinoma in nude mice and to explore the possible mechanism of the inhibition and the possible way of biological therapy. METHODS: Nude mice model bearing laryngocarcinoma was established by using human laryngeal squamous carcinoma cell line ( Hep-II). The animals were given endostatin (20 mg x kg(-1) x d(-1)) or PBS, for 21 consecutive days. The volumes of the subcutaneous tumor were observed. The microstructure in which the general 2-step immuohistochemical examination was adopted and ultra-microstructural changes of carcinoma after administration of endostatin were observed under light and electron microscopes for pathology examination. RESULTS: The differences were statistically significant for the net mice weight, tumor weight, and tumor volume and weight/net mice weight between the treatment group and the control group. The restrained percentage of tumor was 45.9%. The necrosis and apoptosis of the tumor cell and the angiogenesis reduction were found under light and electron microscope in the treatment group. The expression of MVD, PCNA and VEGF of the treatment group is lower than that of the control group, and T test showed that P < 0.01, P < 0.05, P < 0.05 respectively, the differences were statistically significant. CONCLUSIONS: These studies showed that endostatin could significantly restrain the development of laryngocarcinoma. The mechanism may be due to the effect of antiangiogesis.     

血管内皮抑素在喉癌声门上型中的表达

目的检测血管内皮抑素（Endostatin）在喉癌声门上型组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法收集40例喉癌声门上型组织,取大于癌旁2 cm以上的正常喉黏膜组织40例作为对照组,采用免疫组化SP法检测Endostatin的表达情况。结果 Endostatin的表达在喉癌组织中明显高于癌旁组织,差异有统计学意义（χ2=10.368,P〈0.05）。无淋巴结转移的癌组织中Endostatin阳性表达率明显高于有淋巴结转移的癌组织,差异有统计学意义（χ2=9.726,P〈0.05）。结论 Endostatin可抑制喉癌的生长和转移,为预测喉癌的预后提供了一定的理论依据。     

喉鳞状细胞癌血管抑素和内皮抑素mRNA的表达

目的探讨血管抑素和内皮抑素基因在喉,鳞状细胞癌发展过程中的作用及意义。方法运用RT-PCR方法检测45例喉鳞状细胞癌组织及21例声带息肉中血管抑素和内皮抑素基因的表达,并观察它们的表达水平与喉鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果血管抑素和内皮抑素在喉癌组织中表达阳性率分别为71.1%和88.9%,高于声带息肉中的4.8%和14.3%。血管抑素的mRNA表达与喉癌的淋巴结转移及临床分期正相关(P<0.05),与原发部位、组织学分级和T分级无明显相关(P>0.05)。内皮抑素的mRNA表达与喉癌T分级、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05),与原发部位和组织学分级无明显相关(P>0.05)。结论血管抑素和内皮抑素在喉癌发展过程中具有重要意义,人工上调它们的表达将可能成为喉癌生物学治疗的有效方法。     

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽治疗人喉鳞状细胞癌裸鼠模型的实验研究

目的:研究肿瘤抑素抗肿瘤相关肽对裸鼠喉癌皮下移植模型的抑瘤作用,探讨其抑瘤机制及人喉癌生物治疗新方法。方法:建立人喉癌Hep-Ⅱ细胞株裸鼠皮下接种模型,应用肿瘤抑素抗肿瘤相关肽治疗,观察肿瘤生长情况。对治疗后的肿瘤组织进行病理学检查、免疫组织化学检查及电镜观察,记数微血管密度。结果:在治疗组与对照组之间,平均鼠净重、瘤重、瘤体积及瘤重/鼠净重比,差异均有统计学意义(均P<0.01),治疗组抑瘤率为51.58%。病理学检查及电镜观察表明,治疗组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见肿瘤细胞的坏死凋亡,新生血管明显减少,其微血管密度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:肿瘤抑素抗肿瘤相关肽可显著抑制人喉癌裸鼠模型肿瘤的生长和发展。     

改良Majer-Piquet手术治疗晚期声门型喉癌21例报告

目的探讨改良Majer-Piquet手术的可行性及远期疗效。方法应用会厌下移,环(气管)软骨会厌固定术治疗声门型晚期喉癌21例。结果3年和5年的生存率分别为100%和85.7%,术后拔管率为95.2%,患者拔管后即可发音,所有患者均可经口进食。结论改良手术扩大了手术的适应证,该手术既能根治病变,又能较好地保留喉功能。     

Survivin和VEGF蛋白在喉癌组织中的表达及其相关性研究

目的:探讨Survivin、VEGF蛋白在喉癌组织中的表达及其生物学意义,并探讨其相关性。方法:采用免疫组织化学(SP法)染色技术对40例喉癌组织(喉癌组)和5例正常喉黏膜石蜡标本(对照组)进行Survivin、VEGF蛋白表达的检测,并采用图像分析进行定量分析。结果:Survivin和VEGF蛋白在喉癌组织中的阳性表达率均高于对照组(均P<0.01);在有淋巴结转移的喉癌组织中Survivin和VEGF的表达高于无淋巴结转移的喉癌组织(分别为P<0.05和P<0.01);不同性别、不同年龄患者喉癌组织中Survivin和VEGF的表达差异均无统计学意义(均P>0.05);Survivin和VEGF的表达均与喉癌组织TNM分期有关(均P<0.05);Survivin的表达与患者生存期存在负相关关系(r=-0.646,P<0.01);VEGF的表达与患者生存期也存在负相关关系(r=-0.567,P<0.01);而Survivin与VEGF在喉癌组织中的表达存在正相关关系(r=0.676,P<0.01)。结论:喉癌组织中Survivin、VEGF蛋白的表达与TNM分期、淋巴结转移和预后有密切关系,它们的高表达提示肿瘤患者预后不良;该两基因在喉癌组织中表达上调,提示该两基因在喉癌的发生、发展中起重要作用。     

声门下喉癌的手术治疗

目的 探讨声门下喉癌手术治疗的方法及其疗效。方法 对14例1989-1998年间山东医科大学附属医院（现名为山东大学齐鲁医院）耳鼻咽喉科手术治疗的声门下喉癌患者进行分析。按1997年UICC修订案分期,T1-2NT5例,T3NO-2 3例,T4NO-1 6例。11例行喉部分切除术,3例行喉全切除术。根据病变范围不同,可扩大切除到气管或甲状腺。采用单蒂胸骨舌骨肌肌筋膜瓣、双蒂胸骨舌骨肌肌筋膜瓣、颈阔肌肌皮瓣、胸锁乳突肌骨膜瓣、甲状软骨膜瓣、会厌下移等方法重建喉功能。5例行颈清扫术。结果 喉功能保留11例,占全部的78.6%。7例拔除了气管套管,拔管率为63.6%。全部14例患者均恢复吞烟功能,全组患者的3年生存率为78.6%（11/14）,5年生存率为63.6%(7/11)。结论 多数声门下喉癌在彻底切除肿瘤的前提下保留喉功能是可行的。熟练掌握多种修复方法,择优采用,是提高喉功能保留手术水平的重要保证。     

小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％,P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05）,p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA下调,促进p53蛋白表达所致。     

下调组蛋白去乙酰化酶6对Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 观察下调组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylation 6,HDAC6)对人喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并探讨其体内抗肿瘤机制.方法 将喉鳞癌Hep-2细胞注射入裸鼠皮下,1周后裸鼠荷瘤模型建成.将裸鼠分为3组进行治疗,即空白对照组、空载体组和HDAC6小干扰RNA( siRNA)组,监测肿瘤生长变化.采用免疫组织化学法检测不同组别裸鼠移植瘤瘤体内Ki-67增殖情况的变化.采用Western blot法检测转染HDAC6前后不同组别裸鼠移植瘤组织凋亡相关基因B淋巴细胞-2(bcl-2)及bcl相关X蛋白(bcl-associated x protein,Bax)表达的变化.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)检测转染HDAC6前后裸鼠移植瘤组织凋亡情况的变化.结果 HDAC6 siRNA转染荷瘤裸鼠后,与空载体组及空白对照组相比,HDAC6 siRNA组荷瘤裸鼠肿瘤体积显著下降(F =64.783,P＜0.05);原位杂交、免疫组织化学及Western blot结果表明,HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中HDAC6 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P值均＜0.05);Western blot结果显示HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中Bax蛋白表达显著上调而Bcl-2的表达则显著下调,三组间比较差异具有统计学意义(P值均＜0.05);免疫组织化学结果显示转染HDAC6 siRNA组Ki-67染色阳性细胞数显著少于空载体组及空白对照组(F=25.793,P＜0.05);TUNEL结果表明,HDAC6转染组中细胞明显发生凋亡.结论 HDAC6 siRNA能有效抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长,并降低HDAC6和Bcl-2的表达,提高Bax的表达,为喉鳞癌的分子治疗提供了理论依据.     

喉鳞状细胞癌和喉乳头状瘤中Survivin表达的意义

目的：探讨Survivin蛋白在喉鳞状细胞癌和成人喉乳头状瘤中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法对46例喉鳞状细胞癌、24例癌旁组织和20例喉乳头状瘤以及16例正常喉粘膜标本中Survivin的表达进行检测。结果：Survivin蛋白在喉癌组织、癌旁组织和喉乳头状瘤中的阳性表达率分别为71.74%（33/46）、33.33%（8/24）和40.0%（8/20）,在正常黏膜组织中没有表达,喉癌组中的阳性表达率分别显著高于正常组织、癌旁组织及喉乳头状瘤中的表达率（均P〈0.01）。且发生恶变的喉乳头状瘤Survivin蛋白均为阳性表达。但Sur-vivin阳性表达与喉癌的发生部位、分级、分期、淋巴结转移以及病理分级没有关联。结论：Survivin在喉癌组织中过度表达,参与了喉癌的形成,是喉癌形成的一个早期事件,可望成为预测成人喉乳头状瘤恶变的一个诊断方法。     

人喉癌引流淋巴结淋巴细胞局部应用疗效观察

目的　为提高肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＴＤＬＮＬ） 转输后在肿瘤局部的数量,采用肿瘤局部注射的方法对喉癌裸鼠移植瘤模型进行实验性治疗。方法　用２０ 只人喉癌裸鼠移植瘤系ＰＨＣ３ 的裸鼠移植模型作为治疗对象,随机分为２ 组。１０ 只作为治疗组,取新鲜喉癌患者切除的淋巴结,分离得到淋巴细胞,体外培养并用白介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２ ,ＩＬ２）１ ０００ＩＵ／ｍｌ 激活后,每周一次注射于瘤内及周围,每次每只注射１０７ 个细胞（悬于０．１ ｍｌ ＤＨａｎｋｓ 液中）,另１０ 只作为对照组,每周一次注射０．１ ｍｌ ＤＨａｎｋｓ 缓冲液于瘤内及周围。治疗２ 周,观察４ 周。结果　治疗组肿瘤生长较对照组缓慢,差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０５） 。病理组织学检查可见治疗组肿瘤内片状及灶状坏死,肿瘤间质淋巴细胞浸润增多,肿瘤血管周围亦可见较多淋巴细胞聚集,脾小结明显增生,肝、脾及肺脏未见任何转移。对照组肿瘤细胞无明显坏死,间质淋巴细胞浸润很少,脾小结增生不明显,并观察到１ 例肺转移结节。结论　ＴＤＬＮＬ在体外经ＩＬ２ 短期活化后在肿瘤局部注射具有抗肿瘤作用,与以往经静     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在喉鳞状细胞癌组织中的表达

目的：了解细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在喉鳞状细胞癌(LSCC)及喉癌前病变的表达情况,探讨其与LSCC浸润和转移的关系。方法：用免疫组织化学SP法对42例LSCC、28例喉癌前病变和20例正常喉组织中的EMMPRIN表达情况进行检测。结果：EMMPRIN在LSCC和喉癌前病变的阳性表达率分别为88．1％和57．1％,明显高于正常喉组织的5．0％,Ⅲ～Ⅳ期LSCC组织的强阳性表达率为76．0％,高于Ⅰ～Ⅱ期的强阳性表达率17．6％。伴有颈淋巴结转移的LSCC组织的EMMPRIN强阳性表达率高于无淋巴结转移组。结论：EMMPRIN在LSCC有较高的阳性表达。EMMPRIN的表达与LSCC的分期和是否存在淋巴结转移有关。LSCC组织EMMPRIN的表达影响LSCC的浸润和转移。     

在喉鳞状细胞癌中的表达

目的:研究癌基因STK15在喉鳞状细胞癌中的表达，探讨STK15与喉鳞状细胞癌的相关性。方法：应用SP免疫组织化学法检测40例喉鳞状细胞癌及30例声带息肉中STK15的蛋白表达。结果：STK15在喉鳞状细胞癌和声带息肉中的阳性率分别为67.5%（27/40）、33.3%（10/30），二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。STK15蛋白表达与喉鳞状细胞癌的TNM分期及淋巴结转移有关（P＜0.05），与喉鳞状细胞癌病理学分级、原发部位及患者的性别、年龄无关（P＞0.05）,且STK15蛋白阳性表达强度与喉鳞癌患者的TNM分期有关（P＜0.05）。结论：STK15在喉鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用，可能成为喉鳞状细胞癌基因治疗的新靶点。     

基质金属蛋白酶14基因在人喉鳞状细胞癌中表达差异的分析

目的 探讨基质金属蛋白酶14(matrix mettallo-proteinase 14,MMP14)即膜性基质金属蛋白酶(membrane type-1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)基因在喉癌中表达与喉癌临床病理生物学行为的关系。方法 从分子和蛋白质水平,研究MMP14在喉癌组织和其相邻的正常黏膜组织的表达差异,分析MMP14基因及其蛋白表达与喉癌临床病理生物学行为的关系。结果 33例配对喉癌标本中MMP14基因在26例喉癌组织中的表达明显高于其相应的正常黏膜组织,2例喉癌低表达,5例表达差异不明显。MMP14基因在不同分期的声门型喉癌中的表达差异无显著性(P>0.05),但在不同分化程度、有无淋巴结转移的声门型喉癌中,表达差异有显著性(P<0.05);在不同分期、不同分化程度及有无淋巴结转移的声门上型喉癌中,表达差异有显著性(P<0.05)。MMP14蛋白绝大多数位于癌巢细胞质内及癌巢间质内的成纤维细胞质内,在部分病例中有的正常黏膜细胞内不表达,有的表达;MMP14蛋白在绝大多数喉癌组织中的表达明显高于其相邻的正常黏膜组织。MMP14蛋白表达与MMP14基因表达基本是一致的。MMP14蛋白表达差异有显著性组患者的术后生存率与表达差异无显著性组的术后生存率无统计学差异(P>0.05)。结论 MMP14蛋白在喉癌的侵袭中可能只起一定的作用,但在喉癌的淋巴结转移