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目的 克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法 设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体:将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后。通过RT—PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果 成功克隆hTERT上游-280bp~ 40bp的核心启动子。RT-PCR和B-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达.hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论 hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。 相似文献
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榄香烯乳对胃癌细胞人端粒酶反转录酶及其启动子的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:观察榄香烯乳对胃癌细胞株SGC7901人端粒酶反转录酶(hTERT)表达及其启动子的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法:以榄香烯乳处理胃癌细胞,分别采用实时定量PCR和免疫荧光标记法检测癌细胞hTERT mRNA和蛋白水平的表达。采用脂质体转染法将携带hTERT启动子和报告基因的质粒转染至胃癌细胞株SGC7901细胞中,2h后加入不同浓度的榄香烯乳,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果:榄香烯乳处理后,胃癌SGC7901细胞hTERT mRNA和蛋白水平呈浓度和时间依赖性下调。榄香烯乳处理组萤虫素酶活性下降,且呈浓度依赖性。结论:榄香烯乳可能通过下调hTERT启动子活性,抑制hTERT表达,从而抑制胃癌细胞端粒酶活性。 相似文献
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近几年来 ,端粒、端粒酶与肿瘤细胞永生关系的确定 ,端粒酶在肿瘤发生发展中的作用越来越受到人们重视 ,端粒酶已成为肿瘤基础研究的热点课题之一。端粒酶抑制剂为肿瘤治疗带来了广阔前景。本文就端粒、端粒酶在肿瘤发生发展中的作用、端粒酶检测方法以及端粒酶与恶性肿瘤诊断治疗的最新研究进展作一综述。1 端粒 (Telomere)端粒是真核生物细胞线性染色体末端的一种特殊结构 ,由端粒 DNA序列和端粒结合蛋白 (telomerebinding protein)组成。哺乳动物和人类的端粒 DNA由数百个到数千个富含 G 的重复 DNA 序列(TTAGGG)组成。各种生物… 相似文献
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端粒、端粒酶与肿瘤关系研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
端粒是一种DNA-蛋白质复合体,位于真核生物染色体末端,维持染色体的稳定,保证线性DNA完整复制。端粒酶是一种特异的染色体末端转移酶,近年来研究发现,端粒酶活性及端粒的稳定与恶性肿瘤发生相关。恶性肿瘤是由破坏细胞正常生长调控的多种基因突变引起,是一个多步骤、多阶段的过程。近年研究发现,在大多数人体恶性肿瘤细胞中可检测到端粒酶活性,而在正常体细胞中一般端粒酶阴性(生殖细胞、造血干细胞等除外)。端粒酶与肿瘤之间的高度相关性使之成为目前肿瘤研究的新热点。端粒酶抑制及检测可能有潜在的临床治疗及诊断价值。本文就此作一综述。 相似文献
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20世纪30年代,Muller发现了对染色体稳定的端粒(Telomere)结构.至1984年又发现了一种能供端粒延长的酶-端粒酶(Telomere),同时又了解到该酶的活性变化与人类肿瘤的发生发展有着特殊的相关性.端粒、端粒酶与肿瘤的关系的研究目前已经逐渐成为分子生物学、基础医学等多个学科共同关注的热点,该文就有关端粒、端粒酶及其在肿瘤中的研究作一简述. 相似文献
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目的克隆出人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子,为构建hTERT核心启动子调控的重组腺病毒提供实验基础。方法提取肝癌细胞HepG2基因组DNA作为模板,进行PCR扩增,扩增产物酶切后亚克隆至pcDNA3.1(+)质粒。对重组体进行酶切和测序鉴定。结果PCR扩增出约250 bp的目的片段,经酶切和测序鉴定表明质粒构建成功。结论hTERT核心启动子的成功克隆,为进一步实验提供了基础。 相似文献
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目的探讨甲状腺癌与人端粒酶逆转录酶的关系及其调节机制。方法参阅国内外相关文献就人端粒酶逆转录酶与甲状腺癌组织的关系及其调控机制作一综述。结果人端粒酶逆转录酶在甲状腺癌发生发展中起重要作用并受多种因素调节。结论人端粒酶逆转录酶对甲状腺癌的诊断、预后估计及针对端粒酶逆转录酶的抑制剂在甲状腺癌的基因治疗中具有重要的临床意义。 相似文献
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目的:研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法:采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果:经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论:hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。 相似文献
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目的研究骨肉瘤中人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达,为分子免疫学方法治疗骨肉瘤提供基础。方法分别用免疫细胞/组织化学法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞株U2-OS、MG-63、SAOS-2及15例骨肉瘤组织中hTERT表达及端粒酶活性状态。结果HeLa细胞hTERT表达率最高,为95.16%±3.83%;MG-63、SAOS-2、U2-OS细胞系中hTERT阳性率分别为8.75%±1.31%、5.26%±1.22%、2.33%±0.83%;骨肉瘤组织中hTERT表达阳性率26.7%(4/15)。结论hTERT在骨肉瘤的表达率相对较低,仍需用新的研究方法寻找其他分子免疫学治疗骨肉瘤的靶点。 相似文献
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目的检测端粒酶hTERT即端粒酶逆转录酶在人BGC-823胃腺癌细胞中的表达,探讨其临床应用的价值。方法应用ELISA(酶联免疫吸附法)检测胃腺癌细胞裂解液中端粒酶hTERT的活性表达。结果当检测胃腺癌的细胞数为5×106/50μL时为可疑阳性,当细胞数为1×107/50μL时为阳性,而当检测的细胞数为2.5×106/50μL和1.25×106/50μL时均为阴性。结论通过检测端粒酶hTERT可以说明端粒酶作为肿瘤的一种标志物存在与胃腺癌细胞中,而且应用ELISA法检测端粒酶的活性既准确又简便。 相似文献
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肺癌组织中hTERT和P16基因的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
陈杰 《武汉大学学报(医学版)》2005,26(1):11-13,F002
目的 :研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和P16基因在肺癌组织中的表达 ,探讨肺癌发生过程中端粒酶激活的分子机制。方法 :应用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和端粒重复序列扩增法 (TRAP)分别对 4 7例肺癌及相应癌旁肺组织中hTERTmRNA与端粒酶活性进行检测 ,采用免疫组化SP法测定上述组织标本中P16蛋白表达。结果 :hTERTmRNA与端粒酶活性在肺癌组织中阳性表达率分别为 78.7%和 72 .3% ,均明显高于相应癌旁肺组织 (P <0 .0 1)。肺癌中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈明显正相关 (r=0 .70 2 ,P <0 .0 1)。P16蛋白在肺癌中阳性表达率为 2 9.8% ,显著低于癌旁肺组织 (93.6 % ,P <0 .0 1)。P16蛋白表达与hTERTmRNA表达及端粒酶活性均呈显著负相关 (r分别为 - 0 .74 5 ,- 0 .70 2 ,P均 <0 .0 1)。结论 :hTERTmRNA表达上调和P16蛋白表达缺失与肺癌的发生密切相关 ,并可能在肺癌端粒酶活性调节中发挥重要作用。 相似文献
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目的研究不同骨肉瘤细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA成分的表达情况。方法用全基因组芯片检测人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOB1.19中hTERTmRNA表达;用逆转录PCR、实时定量PCR法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63、SAOS-2及人成骨细胞hFOBl.19中hTERTmRNA表达。结果全基因组芯片法显示MG-63、SAOS-2、U2-OS、hFOB1.19细胞系中hTERTmRNA表达强度分别为0.9、-0.1、-0.8、11.4,各细胞系均处于相对低表达水平;荧光实时定量PCR法显示MG-63、Hela细胞系中hTERTmRNA相对表达水平分别为1.00±0.08和2.13±0.11,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论hTERTmRNA在骨肉瘤各细胞系中表达率较低,端粒延伸替代机制可能在骨肉瘤端粒维持方面发挥重要作用。 相似文献
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泌尿系肿瘤人端粒酶催化基团mRNA的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨泌尿系肿瘤中端粒酶催化基因 (hTRT)mRNA的表达与肿瘤分期和分级的关系。方法 应用原位杂交技术对膀胱癌、肾癌标本和膀胱、肾脏正常组织进行hTRTmRNA表达检测。结果 48例膀胱癌标本中 42例hTRTmRNA阳性表达 ,hTRTmRNA阳性率为 88% ,对照组 30例中 2例正常膀胱组织黏膜阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分级与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。 2 9例肾癌组织hTRTmRNA阳性 2 5例 ,阳性率为 86 % ,对照组 30例中 2例肾脏正常组织hTRTmRNA阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分期与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。结论 hTRTmRNA在肾癌和膀胱癌中有异常阳性表达 ,但其表达情况与肿瘤的分期和分级无相关性 相似文献