快速等浓度洗脱高效液相色谱法测定心肌组织中的能量物质

本文利用快速等浓度洗脱高效液相色谱技术,测定心肌组织中肌酸(Cr)、磷酸肌酸(PCr)、次黄嘌呤(Hypo)、尼克酰胺腺嘌呤二核营酸(NAD),腺苷一磷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷三磷酸(ATP)和环一磷酸腺苷(cAMP),同时检测与能量代谢有关的标准物质色谱。检测结果表明,等浓度洗脱高效液相色谱技术,可测定与能量代谢有关的18种物质,其中八种物质可同时测定,此八种标准物质的重复性(CV%在0.97-3.78%)和回收率(88.1-117.6%),均符合方法学要求。因此,该技术是测定心肌等生物组织中能量物质的较理想方法。     

多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞内钙的影响

目的：观察外源性低浓度多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞钙超载的影响。 方法: 酶解分离大鼠心室肌细胞，用正常氧合Tyrode液灌流8 min, 换为缺氧液灌流32 min, 再转换为正常氧合Tyrode液灌流8 min,复制心肌缺氧-复氧模型。分别在缺氧前给予精胺，缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺。应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化。 结果: 精胺（1 mol/L）对正常静息状态下大鼠心室肌［Ca2+］i无影响。缺氧前给予精胺，可取消复氧引起的心肌［Ca2+］i增高；缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺对缺氧-复氧引起［Ca2+］i升高也有不同程度的降低作用，其中以精胺的作用最强。复氧后给予精胺降低缺氧-复氧［Ca2+］i 升高的作用小于缺氧前给予。 结论: 缺氧前给予精胺可拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载发生；复氧后给予精胺可使缺氧-复氧心肌细胞钙超载减轻，但其作用力度不如缺氧前给药。多胺拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载的作用以精胺＞精脒＞腐胺的顺序递减。     

应用荧光高效液相法检测心肌磷脂酶D的活性

 目的：为心肌磷脂酶D活性的检测提供新的可靠、灵敏的实验方法。方法：提取心肌膜脂质，以荧光标记的磷脂酰胆碱及乙醇为底物。高效液相色谱条件：LiChrosphere 100色谱柱（250 mm×4 mm, 5 μm）为固定相，流动相A液为正已烷-丙醇-冰醋酸（82∶17∶1, V∶V∶V），流动相B液为丙醇-水-冰醋酸（85∶14∶1, V∶V∶V），柱温 45 ℃，流速1 mL/min，梯度洗脱。荧光检测：激发波长475 nm，发射波长515 nm。结果：PLD标准品在0.625-40 pmol范围含量与峰面积呈线性关系，相关系数0.999；孵育时间在0-45 min，磷脂酰乙醇生成量与孵育时间呈直线相关；日内及日间变异系数分别为5.6%、6.9%。小鼠心肌样品色谱图见二酯酰甘油、磷脂酰乙醇、磷脂酸3个峰，心肌磷脂酶D活性检测水平为nmol·h^-1·g^-1。结论：荧光高效液相法是检测心肌磷脂酶D活性的简便、快速、准确、灵敏的实验方法。     

雌二醇对离体大鼠缺氧—复氧心脏的保护作用

本实验采用离体大鼠心脏灌注模型，观察雌二醇对缺氧－复氧心脏收缩功能及超微结构的影响。结果表明，雌二醇对缺氧－复氧心肌具有一定的保护作用，这一作用此雌激能相对提高缺氧－复氧心肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶活性和相对降低其Ｃａ＾２＋含量有关。     

尿皮素对高血压大鼠离体心肌的正性肌力效应

目的：研究尿皮素（urocortin）对自发性高血压大鼠离体心肌的影响。方法:采用Wistar及自发性高血压大鼠离体右心房肌、左心房肌和右心室肌标本，观察尿皮素对心肌收缩力及心率的影响。结果:　尿皮素1-10 nmol·L-1浓度依赖性地增强Wistar及高血压大鼠右心房心肌收缩力，尿皮素 3和10 nmol·L-1使自发性高血压大鼠右心房肌收缩力分别增加（31.1±14.9）％和（65.7±22.4）％，明显强于Wistar大鼠的正性肌力作用（P<0.01）。尿皮素 1-10 nmol·L-1浓度依赖性地增强Wistar及自发性高血压大鼠左心房心肌收缩力，但对2种动物的作用无明显差别。尿皮素不影响Wistar及自发性高血压大鼠离体右心房的心率和右心室肌条的收缩力；去甲肾上腺素对上述标本则产生明显的正性频率作用和正性肌力作用。结论:尿皮素对自发性高血压大鼠离体心房的正性肌力作用明显强于对Wistar大鼠的作用，提示尿皮素相关性心脏功能的改变，对高血压病可能具有重要的病理学意义。     

制备型高效液相色谱在生物医药制品领域的应用

 制备型高效液相色谱（preparative high performance liquid chromatography，Prep-HPLC）是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法。应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法，因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用^[1-3]。本文就近年来 Prep-HPLC 方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述。 1 Prep-HPLC 在蛋白质和多肽分离制备中的应用 蛋白质和肽类药物活性强，生物功能明确，特异性高，有利于临床应用，已成为医药产业中的一大类重要产品。但这些产品无论是来自于生物体内还是由化学合成，往往都带有复杂的混合成分，而总目的蛋白或肽类的丰度又低，给分离纯化带来困难，需要多种方法联合使用以获得纯度满意的产品。在此过程中，Prep-HPLC 通常在分离的最后阶段被用作获得高纯度产品的关键方法^[4]。......     

复方丹参滴丸对离体大鼠缺氧/复氧心肌的保护作用

目的和方法:采用Langendorff大鼠离体心脏灌流技术,制备心肌缺氧/复氧损伤模型,分别在缺氧前及缺氧后,用复方丹参滴丸及消心痛对心肌给予保护,利用高效液相色谱仪(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变化,利用H-600透射电子显微镜对心肌细胞超微结构进行观察。本实验共分6组:正常对照组;单纯缺氧/复氧组;复方丹参滴丸前、后保护组;消心痛前、后保护组。结果:①单纯缺氧/复氧组心肌组织中AMP、ADP、ATP及AN含量均明显低于正常对照组(P<0.01)。②复方丹参滴丸前、后保护组大鼠心肌组织内的AMP、ADP、ATP、AN含量均高于单纯缺氧/复氧组(P<0.01),也相应高于消心痛前、后保护组(P<0.01),两组的ATP、AN含量均接近正常水平(P>0.05)。③消心痛前、后保护组的AMP、ADP、ATP、AN含量均低于正常对照组(P<0.01)。电镜结果也证明复方丹参滴丸对缺氧/复氧心肌细胞超微结构具有明显的保护作用。结论:复方丹参滴丸无论在缺氧前预灌注时及缺氧后再灌注时给予,均能通过提高心肌组织中高能磷酸化合物的含量,保护心肌细胞超微结构来保护心肌,其保护效果优于消心痛。     

谷氨酰胺减轻离体大鼠心脏内毒素性损伤

目的 研究谷氨酰胺抗大鼠离体心脏内毒素性损伤的作用。方法 健康SD雄性大鼠24只，随机分成3组：正常对照组，内毒素组，谷氨酰胺 内毒素组，在Langendorff装置上用K-H液对大鼠离体心脏行主动脉逆灌注。连续记录心肌细胞单相动作电位(MAP)、心肌收缩张力曲线；同时在相应的时点分别测定冠脉流出液中的一氧化氮(NO)含量、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性。结果谷氨酰胺可以减轻内毒素引起的心脏电活动的紊乱和收缩能力的损害，对内毒素引起的心肌细胞单相动作电位幅度减小及MAP D20延长、心肌张力降低、心率变慢等变化有明显的改善作用。谷氨酰胺对内毒素引起的冠脉流出液中一氧化氮含量的剧烈波动(先降低后快速升高)有明显的抑制作用，并且谷氨酰胺 内毒素组冠脉流出液中LDH和CK的活性明显低于内毒素组。结论 谷氨酰胺可以对抗内毒素性心肌损伤、改善心功能状态，其机制可能与其抑制内毒素诱导的一氧化氮的剧烈波动、减轻心肌损伤有关。     

Salusins对大鼠离体心脏及心肌细胞的生物学效应的研究

目的:研究新发现的心血管活性肽salusin的心脏及心肌细胞的生物学效应。方法:利用Langendorff装置灌流的成年大鼠离体心脏及原代培养的乳鼠心肌细胞,测定心功能和心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量。结果:10^-12-10^-7mol/L salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无明显影响;但10^-10-10^-6mol/L salusin-α及salusin-β均呈浓度依赖性地促进心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-Leu掺入,其效应在10^-8mol/L时达峰值;salusin-α及salusin-β对心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入的效应可被钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)所拮抗,且与内皮素有协同效应。 Salusin-α及salusin-β对心肌细胞[³H]-Leu掺入的效应可被尼卡地平、钙调磷酸酶抑制剂FK506、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD₉₈₀₅₉及蛋白激酶C(PKC)阻断剂chelerthine chloride等不同程度抑制。Salusin-β对心肌细胞 摄入的效应强于salusin-α,但[³H]-Leu掺入的效应两者之间无显著性差异。结论:Salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无直接效应,但能促进乳鼠心肌细胞钙摄入及蛋白合成,其效应可能与钙通道、钙调神经磷酸酶、MAPK和PKC等信号转导途径有关。Salusin可能具有心肌生长、肥大的调节的作用。     

大鼠心脏硫酸腺嘌呤预处理心肌酶活性变化

目的实验观察经典缺血处理及硫酸腺嘌呤处理大鼠心肌细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性变化.方法采用SD雄性大鼠24只,分4组假手术组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组、硫酸腺嘌呤预处理组.术后速取左心室前壁肌行冰冻切片,以DAB法测定细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的活性.依Ridit法行显著性检验.结果缺血再灌注组大鼠心肌过氧化氢酶和细胞色素氧化酶损伤性反应明显,经典缺血预处理组和硫酸腺嘌呤预处理组细胞色素氧化酶、过氧化氢酶损伤性反应较之明显减轻(P＜0.05).结论经典缺血预处理和硫酸腺嘌呤预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤有明显保护作用.     

反相高效液相色谱法和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究

目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和PCR扩增,获得DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行16S rRNA序列测定。结果 49种分枝杆菌模式株中,采用RP-HPLC分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共7种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用16S rRNA序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共12种因各组内基因序列相似性百分比为100%而难以进行鉴别。通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将49种分枝杆菌模式株中的47种进行明确鉴别。结论分枝菌酸RP-HPLC和16S rRNA序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法。两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种。     

米非司酮用于大鼠足月妊娠引产对母鼠心肌组织超微结构的影响

目的：探讨米非司酮用于大鼠足月妊娠引产对母鼠心肌组织的影响。方法：将孕鼠随机分为实验组和对照组，每组各5例，于孕第20 d分别灌胃1 mL麻油加米非司酮(11.5±1.0) mg和1 mL麻油。分娩后24 h内取材，作透射电镜观察。结果：米非司酮组心肌细胞分布均匀，核未见明显变化。部分肌细胞胞质水肿，线粒体明显肿胀，嵴断裂，呈空泡样变或破裂。间质毛细血管内皮细胞胞浆水肿，线粒体肿胀，基底膜完整。结论：米非司酮用于大鼠足月妊娠引产，可造成母鼠心肌组织的类缺氧性损伤。     

高效液相色谱法在异常血红蛋白病筛查中的应用

目的 应用高效液相色谱法(HPLC)检测人群中异常血红蛋白病发生情况.方法 收集2009年10月至2011年9月本院住院及门诊患者6297例,采用HPLC检测各种异常血红蛋白,缺口-PCR(gap-PCR)检测缺失型α地中海贫血基因型,反向斑点杂交法(RDB)分析非缺失型α地中海贫血和β地中海贫血基因型.结果 应用HPLC检测6297份标本,共发现68例11种异常血红蛋白,分别为血红蛋白(Hb)E 37例(其中2例为Hb E合并β-地中海贫血)、Hb Q 10例(其中Hb Q-Hb H 2例)、Hb S 3例(1例Hb S纯合子和2例Hb S杂合子)、Hb D-Iran 4例、Hb Manitoba 4例、Hb J-Bangkok 5例、Hb C 1例、Hb Lepore 1例、Hb J-Mexico 1例、Hb Osu-Christiansborg 1例和Hb K(o)ln 1例.异常血红蛋白病的发病率为1.08％(68/6297).结论 HPLC能快速、准确地鉴定各种异常血红蛋白,是一种筛查异常血红蛋白病的理想工具.     

心肌肽素对异丙肾上腺素致损伤大鼠心肌的保护作用

目的：观察心肌肽素对异丙肾上腺素致损伤大鼠心肌的保护作用。方法：在大剂 量异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤模型上,观察心肌肽素对驻肌形态及脂质过氧化的影响。结果：心肌肽素可明显减轻受损心肌的变性坏死反应和减少炎性细胞浸润,非常显著地降低心肌丙二醛含量、提高心肌超氧化物歧化酶活性。结论：心肌肽素对异丙肾上腺素损伤大鼠心肌有保护作用,这可能与其抗脂质过氧化作用有关。     

硒化角叉菜胶对大鼠心脏氧反常的作用

在离体大鼠心脏氧反常模型上,硒化角叉菜胶27mg/L(含硒0.3mg/L)可明显降低复氧时的室颤发生率(P<0.05)和静息张力(p<0.01)。以自旋捕捉技术(DMPO为捕捉剂)ESR谱仪检测氧反常心肌产生的自由基,可检出羟自由基(·OH)和碳中心自由基,分别与DMPO形成的自旋加合物,其中[DMPO-OH]·的相对峰强化比为1∶2∶2∶1,波谱参数aN=aH=15.01G;[DMPO-R]·的aN=16.25G,aH=23.25G。而硒化角叉菜胶有清除·OH以外的自由基的作用。     

应用变性高效液相色谱技术检测parkin基因突变

目的应用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)检测早发性帕金森综合征(early-onset parkinsonism,EOP)致病基因parkin突变。方法散发EOP患者82例,提取外周血细胞DNA,通过PCR扩增parkin基因的12个外显子,应用DHPLC进行变异筛查,峰形异常者进行DNA测序以明确序列变异的种类和位置。结果以100名健康者为正常对照,在82例EOP患者中检测出3种突变,均为点突变,内含子区突变包括IVS1-39G→T和IVS9 18C→T;编码区突变为T1422C,导致所编码的441位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸(Cys441Arg)。结论在散发EOP患者中发现3个杂合型点突变,探讨应用DHPLC在EOP患者中开展parkin基因诊断的可行性。