一个酵母新种——杭州毕赤酵母

本文报道了从腐梨上分离到的一株未见描述的毕赤酵母属新种(Pichia hangzhou-ana Lu et Li),并讨论了与其近似种的区别。同时进行了DNA G+C百分比值的测定。     

一种值得注意的基因表达系统——巴斯德毕赤氏酵母

正当我们热衷于利用大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)等传统表达系统来研究各种基因表达时,国外一些新型表达系统正在悄然兴起。这些系统有着独特的优点,潜力很大,可能对今后基因工程产品的开发和生物技术的发展产生重要作用。其中巴斯德毕赤氏酵母(Pichia Pastoris)特别值得引起我们的注意。本文对该系统作一简要评述。     

人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂 疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合 ,使其紫外吸收波谱发生红移     

中国红酵母新种

本文研究了自北京冷库病梨分离的红色芽裂酵母L-82。它具有耐低温的特性,二端芽裂(bipolar budfissiort),不形成子囊孢于与掷孢子,但能形成厚垣抱于。老或幼的细胞均可能萌发形成具横隔的芽管,甚至发展为粗菌丝。长期低温培养4个月以上,于局部菌落形成棕色菌丝菌落,此菌落由细菌丝组成,并形成大量棕色椭圆形、梨形或尖形厚垣孢子。此菌能产生类淀粉,同化肌醇,并能合成类胡萝卜素。此菌在很多方面与属于担子菌的黑粉菌之情况很相似,说明它与担子菌有一定关系;与红色冬孢酵母(Rhodosporidium)既有类似又有其特点。由于目前对L-82的有性阶段尚不完全明确,虽看到一些现象,但在有些方面还有待进一步研究。根据其产类胡萝卜素,不形成掷孢子,有菌丝与厚垣孢子等特性,暂时将L一82归在红酵母属(Rhodotorula ),作为一个新种,定名为中国红酵母(Rhodolorula sinensis Lee sp. Nov.)L-82。     

毕赤氏酵母植酸酶工程菌高密度培养条件的研究

研究了毕赤氏酵母植酸酶工程菌高密度生长的培养条件 ,包括不同碳源、酵母粉、(NH4 ) 2 SO4 、KH2 PO4 等不同用量对菌体生长的影响。结果是甘油 4 %、蛋白陈 2 %、酵母粉 0 5%、(NH4 ) 2 SO4 0 .8%、K2 HPO4 0 1%、KH2 PO4 0 6 %。在此基础上 ,对温度、起始pH、接种量等影响该工程菌菌体生长的因素也作了初步研究。     

嗜盐嗜碱杆菌属的一个新种

从内蒙古自治区哈马台碱湖分离到一株多形态嗜盐嗜碱菌(编号HAM—2),其生长的NaCI浓度范围为12％～30％,最适17.5％;生长的pH范围为7.8～10.4,最适pH9.0～9.5。革兰氏染色阴性。细胞为不规则杆状、椭圆形、三角形等多形态,细胞大小为1.0～2.0×2.0～5.Oμm。该菌株主要极性脂是磷脂酰甘油磷酯(PGP)和磷脂酰甘油(PG),还含有一种未知的次要磷脂成分(PL4)。DNA中G+C含量为59.5mol％。根据这些特征,菌株可归入嗜盐嗜碱杆菌属,又根据细胞形态和极性脂组份不同于该属正式承认的三个种,因此,鉴定此菌株为嗜盐嗜碱杆菌属(Natronobacterium)的—个新种,定名为内蒙古嗜盐嗜碱菌(Natronobacterium innermongoliae Sp.nov.)。     

乙醇酸氧化酶基因在巴斯德毕赤氏酵母中的表达

将菠菜乙醇酸氧化酶基因片段克隆至表达载体pPIC3．5k。提取重组质粒,进行限制性酶切鉴定。重组质粒用Sal I酶切线性化,电导入法转化毕赤酵母(Pichia pastoris),在缺乏组氨酸的RDB平板筛选重组子,提取酵母的染色体基因组进行PCR扩增鉴定整合情况,用甲醇诱导表达。结果表明,SDS-PAGE电泳显示表达蛋白的分子量约为39．8kD,与文献报道的乙醇酸氧化酶分子量接近。酶的活力达到了40．8IU／g湿菌体,比不含有目的片断的对照菌酶活提高了17倍,确认了导入的乙醇酸氧化酶基因片段在酵母中高效表达。     

毕赤氏酵母P_(AOX2)突变体序列分析

近年来巴斯德毕赤氏酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）已被广泛用于商业化生产外源蛋白的基因工程菌［１］。与常用的酿酒酵母表达系统相比,该系统具有以下优点：１有强有力的、受甲醇严格诱导调控的启动子;２表达蛋白高分泌;３表达菌株稳定;４适合于高密度培养。但目前使用的系统也有其不足之处,当利用该系统的载体将外源基因通过双交换整合到染色体中ＡＯＸ１基因位置时,ＡＯＸ１基因被破坏［２］。已知醇氧化酶是细胞利用甲醇的关键酶,该酶分别由ＡＯＸ１基因和ＡＯＸ２基因编码合成［３］。虽然ＡＯＸ２与ＡＯＸ１的…     

内生多粘芽孢杆菌EJS-3纤溶酶基因在毕赤氏酵母中的表达

以自构建的重组质粒pET-DsbA/PPFE-I为模板,扩增内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因PPFE-I,构建Pichia pastoris表达载体pPICZαA/PPFE-I,通过电击转化,pPICZαA/PPFE-I 被整合到Pichia pastoris SMD1168基因组中,抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导72 h,酶活达到286 IU/ml,是野生菌的2.6倍,表达产物用SDS-PAGE进行分析,在相对分子质量63 kDa处出现明显的蛋白条带,降解人血纤维蛋白试验中rPPFE-I最先降解人血纤维蛋白原的α链,其次是β链,而对γ链降解最缓慢。实现了多粘类芽孢杆菌纤溶酶基因在毕赤酵母中的表达,为植物内生菌来源溶栓药物的开发提供了新的途径。     

红酵母属中的一个新种

自云南省哀牢山常绿阔叶林根际土壤中分离出一株酵母菌Ⅱ-33。该菌株细胞卵圆,出芽时胞壁结构为内分芽型,多端芽殖,不产生子囊孢子和掷孢子;在麦芽汁琼脂上产生红色胡萝卜素,颜色反应阳性,菌落平滑,有光泽,质地软而呈粘液状,不发酵任何糖,能同化麦芽糖、蔗糖、乳糖、棉子糖、松三糖和硝酸钾,能分解尿素;细胞水解物中含甘露糖、葡萄糖和半乳糖。按其形态、培养特征和生理生化特性,酵母菌Ⅱ-33应归入红酵母属(Rhodotorula)中,经与近似种比较,认为是红酵母属中的一个新种,命名为云南红酵母(Rhodotorula yunnanensis sp.n.)。     

运用定点突变提高重组木聚糖酶在毕赤氏酵母中的表达

运用PCR介导的定点突变对米曲霉(Aspergillus　oryzae)来源的木聚糖酶在毕赤酵母中的重组表达进行了研究,获得一表达量远远高于亲本的突变株I156A,对其进行了提纯并研究其酶学特性,除热稳定性外其余与亲本基本一致。突变株I156A所产木聚糖酶XynFl的分子量为35kD,在pH 4～9范围内稳定,最适pH为70,最适温度为45℃,在50℃以下稳定性略高于亲本。     

固囊酵母的一个新种

从中国保定槐茂甜面酱中分离到一株酵母。经鉴定,这株酵母菌属于固囊酵母属(Citeromyces),并为该属中的一个新种,命名为保定团囊酵母(Citeromyces baodingensis zhangsp.Nov.)。保定团囊酵母与固囊酵母生理生化特性有显著区别,保定固囊酵母(Citeromycesbaodingensis)不发酵蔗糖、棉子糖,同化半乳糖和纤维二糖,不同化海藻糖和棉子糖,G+C含量为48.5mol％。     

毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究

疟疾目前仍是危害人类健康的主要传染病,现全球每年新增疟疾病例3～5亿人,其中约300万人死于该病.特别是病原虫抗药性的产生和扩散已给疟疾防治工作带来极大困难,因此研制新的预防措施已成为当务之急.研制有效的疟疾疫苗被认为是人类控制乃至消灭疟疾的重要途径,已越来越受到重视,并已构建和鉴定多个疫苗候选抗原[1,2].本研究进行高密度优化表达的融合抗原就是一个疫苗候选抗原.     

汉逊酵母属的两个新种

从中国宣威火腿中分离到两株典型的火腿酵母.它们是火腿微生物菌群的最优势种,可独立、成功地完成火腿发酵全过程,从而避免霉菌及其毒素对火腿的污染.经鉴定,这两株菌均为汉逊酵母属(Hansenula H.et P.Sydow)中的新种,分别命名为宣威汉逊酵母(Hansenula xuanweiensis Jiang sp.nov.)和中国汉逊酵母(Hansenula sinensis Jiang sp.nov.).     

梗孢酵母属的一个新种

作者于1978年从福建省福州市西湖公园的芒果花中分离出一株酵母1519。该菌株不产生子囊孢子、掷孢子,亦未见到有锁状连合。未发现有性繁殖。无性繁殖是在母细胞上产生小梗,小梗上产生子细胞,子细胞还可再生小梗再生子细胞。如果子细胞不脱落则成链状或分枝的链状。不发酵任何糖。按照形态和繁殖特征只符合Lodder(1970)酵母分类专著中半知菌部分的梗孢酵母。因此将它放入梗孢酵母属,命名为福州梗孢酵母(Sterigmatomyces fuzhouensis sp.n.)。     

中国神农架的酵母类群及中国克鲁佛酵母新种

从我国神农架地区的不同基物分离到酵母菌287株。经研究共代表酵母与类酵母10属。其中拿逊酵母属(Nadsonia)为世界罕见,也为我国新记录。文中记载了某些罕见属的分离基物,以及该地区酵母菌各属的出现率。并在克鲁佛酵母属中确定了一个新种,它的形态、生理都不同于已知种,命名为中国克鲁沸酵母(Kluyveromycer slnensls M·X·Li,x·H·Fu＆Tang sp．nov·)o