肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法,比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果;比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时,过滤液中仍有部分病毒抗原检出,经１０万相对分子质量滤膜过滤后,过滤液 中检测不到病毒抗原;用 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时,经波长 ２８０ ｎｍ检测到 ３个吸收峰,其中仅在第 １峰中检 测到病毒抗原,收集第１峰,几乎回收全部病毒抗原,去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫 苗的规模化生产。     

低相对分子质量AMPS／AA二元共聚物的合成及性能研究

以２－丙烯酰胺基－２－甲基丙磺酸（ＡＭＰＳ）、丙烯酸（ＡＡ）为原料合成了２种低相对分子质量ＡＭＰＳ／ＡＡ二元共聚物;分别评价了共聚物用工业循环冷却水阻垢剂、钻井液降粘剂的性能。     

应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后,构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ　ｐｌｕｓ）,表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ,接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。     

HEV部分ORF_2重组蛋白的纯化及其在酶标试剂中的初步应用

目的 获得具有生物学活性的重组蛋白,用于制备抗－ＨＥＶ酶标试剂盒。方法 将插入的含ＨＥＶ 部分开放读码框２（ＯＲＦ２）的重组菌扩大培养,诱导表达,纯化,鉴定,组装酶标试剂盒。结果 纯化的重组蛋白经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,在相对分子质量５６０００处有一明显的蛋白带,经ＣＳ－９３０薄层扫描纯度达９５％以上,经免疫印迹 分析,具有良好的免疫学特异性。此ＨＥＶ试剂盒,检测阳性病人血清样品阳性率为９４．７４％,检献血员血清样品阳 性率为５．４３％。结论 该纯化的ＨＥＶ部分ＯＲＦ２重组蛋白组装的试剂盒特异性及敏感性均较好。     

从精浆前列腺特异抗原的分离纯化及鉴定

用ＰＥＧ－ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０两步法，从精浆中分离纯化前列腺特异抗原（ＰＳＡ）。精浆标本先经ＰＥＧ粗提，约去除８０％的杂蛋白，再经柱层析，进一步提纯，提纯产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ法证实为免疫纯。     

人热休克蛋白73的基因重组、表达和纯化

目的　用基因重组的方法表达人热休克蛋白７３,并纯化表达产物,用于进一步分析。方法　用人 热休克类似蛋白ＨＳＰ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＰ７３,在大肠杆菌ＢＬ２１中用半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达,用 电泳法和 ＡＴＰ亲和层析法提取 ＨＳＰ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、用３ ａ３抗体 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作 ＥＣＬ检测。结果人 ＨＳＰ７３基因 构建的载体ｐＥＴＨＳＰ７３能很好地在大肠杆菌表达出相对分子质量为７３　０００的蛋白。两种蛋白提取方法均能有效提纯表达的蛋白,该蛋白具有人ＨＳＰ７３抗原特性。所得蛋白质氨基酸测定和Ｎ端测序的结果与有关的报道一致。结 论　ＨＳＰ７３基因重组、表达和纯化方法的建立,为研究ＨＳＰ７３的结构、功能与临床应用提供了必要条件。     

产芽孢梭菌纤溶酶的纯化及特性

目的 从产芽孢梭菌的培养上清中分离纯化出具有纤溶活性的蛋白质。方法 以产芽孢梭菌的培养上清为材料，经过滤、硫酸铵盐析、离子交换层析纯化纤溶酶，并对其理化特性和纤溶活性进行鉴定。结果 所分离纯化的纤溶酶相对分子质量为67000，系由相对分子质量45000和20000的2个亚基组成，具有较强的溶解纤维蛋白的作用。此酶属丝氨酸蛋白酶类，胰蛋白酶类。结论 为纤溶酶的开发和应用提供了依据。     

乙酸乙烯酯嵌段共聚物的合成研究

以ＡＩＢＮ为引发剂，用ＣＣｌ４调节乙酸乙烯酯聚合制备了带三氯甲基端基的ＰＶＡｃ大分子引发剂（ＰＶＡｃ－ＣＣｌ３）。以ＣｕＣｌ－ｂｐｙ为催化剂，用ＰＶＡｃ－ＣＣｌ３引发Ｓｔ，ＭＭＡ和ＢＭＡ等单体的ＡＴＲＰ聚合，得到了一系列相对分子质量可控、相对分子质量分布较窄的ＰＶＡｃ嵌段共聚物。     

一锅煮法合成结晶玫瑰

苯甲醛与氯仿在ＦＡＰ存在下加成三氯甲基苄醇（Ⅰ），不经分离直接与醋酐在室温于催化剂ＤＭＡＰ存在下酰化，得８５％产率的结晶玫瑰（Ⅱ）。     

心房利钠多肽的规模化制备及活性分析

目的 建立一种简便、有效的心房利钠多肽（ａｔｒｉａｌ　 ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＮＰ）的规模化制备方法。 方法 以恒河猴心房为原料，采用匀浆、分级超滤制备ｍ－ＡＮＰ，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度和相对分子质量，用Ｗｉｓｔａｒ大 鼠检测生物学活性。结果 所制备的ｍ－ＡＮＰ相对分子质量主要分布在２０００～６０００，包含了ＡＮＰ的主要活性成分。 具有降低血压，扩展血管和利钠利尿的生物学活性。结论 该工艺可用于规模化生产ＡＮＰ。     

用改良的离子交换层析法分离高纯度凝血因子Ⅷ

应用改良的DEAE－Fractogel阴离子交换法生产高纯度FⅧ，并经过TNBP和Tween－80灭活病毒，使单位体积凝胶交换容量增加20％，并改进了冻干制品的溶解性和稳定性，FⅧ活性保持30IU／ml以上，比活性达到200IU／ml蛋白，安全性可靠，适合于大规模生产。     

人体胎盘神经生长因子的纯化和鉴定

采用人胎盘为原料，利用离心、超滤和SephadexG-100、DEAE－SephadexA－50、SephadexG－150层析等技术，在中性条件下，分离出7S神经生长因子（7SNGF）；再在酸性条件下，利用柱状等电聚焦电泳法分离出活性亚单位-β-NGF，利用鸡胚背根神经节培养法直接测定神经生长因子的生物活性，其比活性为8000u／mg；用十二烷基磺酸钠不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）测得β-NGF分子量为13KD；高效液相PEK－125柱层析法得单一洗脱峰证明为单一成分。     

铜与聚4-乙烯基吡啶的络合物催化漆酚氧化聚合

铜与聚4—乙烯基吡啶的络合物对漆酚的氧化聚合具有明豆的催化活性,在二甲苯中可以作为多相催化剂重复使用。铜、锰双金属的聚4—乙烯吡啶的络合物的催化活性比纯粹铜的络合物好,催化剂中 Mn/Cu 摩尔此约为1.2时较佳。这些催化剂催化所得产物由于仍有低分子量的漆酚存在,直接涂膜干燥慢。除去低分子量漆酚后的漆液涂膜,干燥快,颜色浅,物理性能优异.     

海洋放线菌Y-0117农用活性代谢产物的研究

在农用抗生素筛选中发现代号为Y-0117的海洋放线茵菌株所产生的代谢产物对植物病原真菌具有良好的抑制作用。对Y-0117发酵液进行萃取、硅胶柱层析、制备薄层色谱、制备HPLC,分离纯化得到两个活性组分0117A和0117B。通过紫外光谱、质谱、核磁共振等手段,确定0117A的分子式为C35H58O8,分子量为604。结构与已知化合物Bafilomycin D相同;0117 B的分子式为C42H60O12．分子量为756,结构与近期发现具有抗癌活性的已知化合物Hygrobafilomycin相同。研究发现0117B对多种植物病原真菌具有良好的抑制活性,对稻瘟病菌的最小抑制浓度为15．63μg·mL^-1。     

重组人干扰素γ的分子结构及其生物活性

目的 了解重组人干扰素γ的分子结构及其生物活性。方法 采用细胞病变抑制法，以日本干扰素γ参考品为标准，计算国际单位。以4种不同方法检测相对分子质量。结果 比活性≥3．0×107 IU/mg蛋白，相对分子质量低于理论值16900。氨基酸分析结果只有129个氨基酸，少于应有数目。N端氨基酸序列分析结果，15－19个氨基酸与理论序列相符。结论 重组人干扰素γ C末端氨基酸有缺失，但不影响其生物活性。     

改进型中乙烯基聚丁二烯橡胶性能的研究 Ⅱ玻璃化温度和动态力学性能

系统研究线形中乙烯基聚丁二烯橡胶（ＬＭＶＢＲ）、星形中乙烯基聚丁二烯橡胶（ＳＭＶＢＲ）、线形１,４１,２立构二嵌段中乙烯基聚丁二烯橡胶（ＬＢＭＶＢＲ）和星形１,４１,２立构二嵌段中乙烯基聚丁二烯橡胶（ＳＢＭＶＢＲ）的玻璃化温度及动态力学性能,发现ＬＢＭＶＢＲ具有较佳的动态力学性能,内耗生热较低;相对分子质量和１,２结构质量分数的增大,星形支化结构均有利于嵌段ＭＶＢＲ产生微观相分离结构,控制适宜的嵌段比可确保微观相分离结构更为显著。     

链球菌G蛋白提取方法的建立

本文建立了一种新型免疫试剂SPG的制备方法 ,该方法是从链球菌G148菌株的细胞壁中提取SPG ,用木瓜蛋白酶消化 ,再经离子交换层析、亲和层析法提纯精制。用ELISA法检测活性 ,用SDS PAGE检测纯度和相对分子质量     

人血浆蛋白C的纯化与鉴定

目的　建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法　利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论　已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。     

多粘类芽孢杆菌极端嗜热多肽的纯化及性质研究

用加热法从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)LM–3菌株的发酵液中纯化得到2个极端嗜热多肽。平板拮抗实验表明,5μL纯化多肽对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)抑菌率达89.6%。SDS–PAGE电泳显示纯化多肽分子量介于6000～7000u之间。多肽复性后,其中之一对稻瘟病菌表现出强的拮抗活性,命名为APPLM3(Antagonism Polypeptide from Paenibacillus polymyxa LM–3);另一个则无此活性,命名为PPLM3(Polypeptide from Paenibacillus polymyxaLM–3)。APPLM3经氨基酸测序,获得了其N–末端5个氨基酸序列(H2N–ANDPR);以该序列为靶序列在NCBI上进行相似性检索,发现其可能与3个假设蛋白(或推导蛋白)相关。APPLM3为首次报道的兼具极端嗜热性和稻瘟病菌拮抗活性的小分子多肽。     

Paenilarvins: Iturin Family Lipopeptides from the Honey Bee Pathogen Paenibacillus larvae

The bacterium Paenibacillus larvae has been extensively studied as it is an appalling honey bee pathogen. In the present work, we screened crude extracts derived from fermentations of P. larvae genotypes ERIC I and II for antimicrobial activity, following the detection of four putative secondary metabolite gene clusters that show high sequence homology to known biosynthetic gene clusters for the biosynthesis of antibiotics. Low molecular weight metabolites produced by P. larvae have recently been shown to have toxic effects on honey bee larvae. Moreover, a novel tripeptide, sevadicin, was recently characterized from laboratory cultures of P. larvae. In this study, paenilarvins, which are iturinic lipopeptides exhibiting strong antifungal activities, were obtained by bioassay‐guided fractionation from cultures of P. larvae, genotype ERIC II. Their molecular structures were determined by extensive 2D NMR spectroscopy, high resolution mass spectrometry, and other methods. Paenilarvins are the first antifungal secondary metabolites to be identified from P. larvae. In preliminary experiments, these lipopeptides also affected honey bee larvae and might thus play a role in P. larvae survival and pathogenesis. However, further studies are needed to investigate their function.