TNF-α诱导心肌成纤维细胞增殖的信号转导机制研究

目的研究TNF-α诱导心肌成纤维细胞增殖的信号转导机制,为设计早期防治心肌梗死和心衰的药物提供分子靶点。方法心肌成纤维细胞体外原代和传代培养后,用不同浓度的TNF-α刺激心肌成纤维细胞一定时间,用Western blot检测细胞膜Gq蛋白的表达;放射免疫方法测定细胞内三磷酸肌醇（IP3）的表达;薄层层析分析法测定细胞内DAG水平;免疫组化技术检测细胞内PKC的含量;流氏细胞方法检测细胞内Ca2＋的释放;MTT法检测细胞增殖水平。结果 F-α能不同程度的诱导细胞Gq蛋白、IP3、Ca2＋、DAG和PKC的增加,并表现了明显的时间-效应关系。剂量效应关系显示：20ng/ml TNF-α对Gq蛋白、IP3、PKC结果的影响较其它两个剂量组明显（P〈0.05）,而细胞内DAG和Ca2＋的水平在各剂量组间无明显差异,但与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。在这些信号物质改变的模式下,心肌成纤维细胞增殖水平较对照组明显增高（P〈0.05）。结论α通过激活细胞膜Gq蛋白介导的IP3/Ca2＋和DAG/PKC途径诱导心肌成纤维细胞增殖,并以20ng/mlTNF-α较明显。     

TNF-α激活NF-κB信号通路抑制培养成纤维细胞SDF-1α分泌

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活核因子-κB(NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响。方法小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养,将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组,处理后的细胞采用CCK-8方法检测细胞增殖情况、Western blot和细胞免疫荧光检测IκBα蛋白表达与定位、ELISA检测基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的分泌。结果 TNF-α在一定浓度范围内对成纤维细胞起到明显的促增殖作用,CCK-8检测显示TNF-α组在不同浓度和不同时相点MEF的光密度值与TNF-α+PDTC组及对照组相比差异显著(P<0.05);免疫荧光染色显示IκBα主要分布于细胞质,TNF-α组与对照组和TNF-α+PDTC组相比,IκBα荧光强度明显减弱。Western blot结果发现TNF-α刺激后30 min,TNF-α组和TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达[(3 070.0±39.0)vs(1 421.7±75.3),(3 212.2±57.5)vs(1 468.2±45.8),P<0.05]均降至最低值,随时间推移逐渐恢复,TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达显著高于TNF-α组[(3 112.3±89.7)vs(2 610.4±26.9),P<0.05];ELISA检测发现TNF-α作用后成纤维细胞SDF-1α的分泌呈减少趋势[(15.9±1.6)vs(12.7±0.6),P<0.05],TNF-α+PDTC组则能显著逆转TNF-α作用[(23.5±3.2)vs(15.0±1.2),(21.6±0.4)vs(12.7±0.6),P<0.05],促进SDF-1α分泌。结论 TNF-α能通过激活NF-κB通路,影响小鼠胚胎成纤维细胞的增殖并抑制SDF-1α分泌。     

TNF-α对银屑病患者成纤维细胞基因表达的影响

目的:探讨银屑病患者皮肤成纤维细胞在TNF-α作用下基因表达的变化。方法:体外培养银屑病患者皮肤成纤维细胞,以TNF-α刺激为实验组,以正常培养为对照组;用GeneChip Human Genome U133 Plus2.0芯片分析TNF-α作用下成纤维细胞基因表达情况。结果:差异表达基因共有730条,其中上调基因395条,下调335条。差异基因主要参与合成、分解、加工修饰、代谢、运输、调控、分子复合、信号传导、细胞周期与细胞凋亡、发育、免疫等过程。结论:运用基因芯片技术研究成纤维细胞在TNF-α作用下基因表达的变化,可能为探讨银屑病的病因和发病机理的研究提供新的思路。     

IGF-1及TNF-α对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的：通过对大鼠成骨肉瘤ＵＭＲ１０６细胞增殖状态及细胞周期变化的观察，探讨胰岛素样生长因子 １（ＩＧＦ １）及肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）对该细胞增殖调节作用的机理。方法：将ＵＭＲ１０６细胞培养于含１０％小牛血清的ＭＥＭ培养基中。细胞长满后换无血清培养７２ｈ，然后分别用生理剂量的ＩＧＦ １和ＴＮＦ α刺激细胞１２ｈ，应用３Ｈ ＴｄＲ参入、磺基罗丹明染色法和流式细胞技术对细胞增殖状态及细胞周期进行定量测定。结果：ＩＧＦ １有明显促细胞ＤＮＡ合成作用，并使Ｓ期细胞所占比例明显增加；而ＴＮＦ α则具有相反的作用。定量测定细胞增殖也显示ＵＭＲ１０６受ＩＧＦ １的正性调节而受ＴＮＦ α的负性调节。结论：ＩＧＦ １和ＴＮＦ α对ＵＭＲ１０６细胞增殖的调节作用与该细胞ＤＮＡ复制水平调节有关。     

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对口腔黏膜下纤维化成纤维细胞生物学效应研究

目的阐明肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对正常人颊黏膜成纤维细胞(NM-FB)及口腔黏膜下纤维化(OSF)患者颊黏膜成纤维细胞(OSF-FB)的生长增殖及胶原合成的影响.方法取6例OSF患者及5例正常人颊黏膜组织行成纤维细胞原代培养并传代,采用MTT法及羟脯氨酸试剂盒分别测定TNF-α处理后NM-FB及OSF-FB的生长增殖及羟脯氨酸合成情况,并在电镜下观察NM-FB及OSF-FB超微结构的改变.结果OSF-FB羟脯氨酸合成量明显大于NM-FB(P＜0.01),浓度为100 u/mL、1 000 u/mL及10 000u/mL的TNF-α均能有效刺激NM-FB及OSF-FB的增殖及羟脯氨酸合成(P＜0.05),电镜下亦可观察到TNF-α作用后,细胞的粗面内质网、游离核糖体明显增多,粗面内质网池扩张,线粒体旺盛.结论TNF-α有可能通过促进NM-FB及OSF-FB的增殖及胶原合成,启动OSF发生并推动其发展.     

复方马勃冲剂对肺炎球菌感染家兔TNF-α、IL-6的影响

应用肺炎球菌Ⅰ型标准株静脉感染家兔,同时灌服复方马勃冲剂,观察造模24h后血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的变化情况,以探讨复方马勃冲剂对肺炎球菌感染家兔血清TNF-α、IL-6的影响。结果显示,复方马勃冲剂能明显降低模型家兔血清TNF-α含量,但对血清IL-6含量的影响不显著。     

血管活性肠肽对人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF-α的影响

目的 观察血管活性肠肽（VIP）对脂多糖（LPS）诱导下人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF-α的影响,进一步探讨VIP在口腔扁平苔藓（OLP）发生发展中的作用机制.方法 体外培养正常人口腔颊黏膜成纤维细胞,以LPS和/或不同浓度VIP刺激,收集其上清液,ELISA法测定TNF-α水平.结果 10-8 mol/L VIP处理组TNF-α表达量明显低于LPS致炎组（P 〈 0.05）.结论 10-8 mol/L VIP对LPS诱导的人口腔颊黏膜成纤维细胞TNF-α的表达有明显抑制作用,VIP可能在OLP发生发展中起保护作用.     

SEC对淋巴细胞分泌TNF-α的诱导作用

目的探讨超抗原SEC的抗癌作用机制。方法采用ELISA法测定SEC在不同浓度及作用时间促淋巴细胞分泌TNF-α的作用;采用RT-PCR法检测SEC在不同作用时间促进淋巴细胞表达TNF-α的mRNA。结果ELISA法显示:淋巴细胞在未经SEC激活之前,培养上清液中TNF-α较低,经SEC激活后的第1天,培养上清液中TNF-α迅速上升,到作用的第3天,TNF-α上升至峰值。RT-PCR显示:经SEC活化的淋巴细胞有大量TNF-αmRNA的表达,高峰出现于第3天。结论SEC能促进淋巴细胞大量分泌TNF-α。     

肿瘤坏死因子-α对乳鼠心脏成纤维细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对乳鼠心脏成纤维细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用胰酶消化法体外培养SD乳鼠的心脏成纤维细胞,分别用质量浓度为5、10、20、30 ng/mL TNF-α作用24 h,并设立空白对照组进行比较。采用MTS/PMS法检测TNF-α对心脏成纤维细胞增殖的影响;Western blot法检测TNF-α对心脏成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响。结果与对照组比较,5、10 ng/mL TNF-α对心脏成纤维细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白表达无明显影响(P>0.05);而20、30ng/mL TNF-α均能促进心脏成纤维细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达(P<0.05),但不存在剂量依赖性。结论一定剂量的TNF-α可以促进心脏成纤维细胞的增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G₀/G₁期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）及其饵受体骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果 TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKLmRNA表达,RANKL／OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL／OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL—10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH／3T3细胞，应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较，采用MTS／PES法确定NIH／3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH／3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH／3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下，一定剂量的rhIL-10可抑制NIH／3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH／3T3细胞大部分处于G0／G1期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

TNF-α与增生性瘢痕成纤维细胞关系的研究进展

增生性瘢痕是伤口局部上皮化以后组织继续增生的病理改变 ,是临床上一种较常见的病理性瘢痕。其形成系因创伤愈合过程中成纤维细胞合成与分解代谢紊乱 ,导致细胞外基质合成增多和过度沉积 ,其中胶原为其主要成分。近年的研究表明 ,细胞因子在瘢痕过度形成与重塑中起重要作用。肿瘤坏死因子 (TNF α)主要由激活的单核细胞产生 ,对成纤维细胞胶原合成与分解代谢发挥着重要作用[1] 。作者就近年来TNF α与增生性瘢痕成纤维细胞关系的研究进展作一简要回顾     

TNF-α和IFN-γ对OSF成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究TNF-α、IFN-γ对正常人颊黏膜成纤维细胞(NM-FB)和口腔黏膜下纤维化(OSF)患者颊黏膜成纤维细胞(OSF-FB)胶原合成的影响。方法取6例OSF患者及5例正常人颊黏膜组织,采用组织块法进行成纤维细胞原代培养并传代,用羟脯氨酸试剂盒观察不同浓度TNF-α及IFN-γ对NM-FB和OSF-FB胶原合成的影响。结果浓度为100~10000U/mL的TNF-α能明显促进NM-FB和OSF-FB的胶原合成(P<0.05),浓度为40~4000U/mLrIFN-γ则明显抑制两者的胶原合成(P<0.05),且400U/mL的IFN-γ其抑制率接近峰值(与4000U/mL的IFN-γ组比,P>0.05)。结论TNF-α促进NM-FB和OSF-FB的胶原合成,而IFN-γ对两者的胶原合成具有抑制作用。     

干扰素α抑制NF-κB活化增强TNF-α诱导的Hela细胞凋亡

目的探讨干扰素α(IFN-α)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导核转录因子NF-κB活化的影响。方法细胞分为空白对照组(不加TNF-α),实验组(加TNF-α)、实验组终浓度分别为(5,10,15ng/ml),作用不同时间分为6,12,24 h,与干扰素α(终浓度100IU/ml)共培养2 h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3 h,应用免疫组化,免疫印迹方法检测NF-κB活性的变化,采用Tunel法检测细胞凋亡。结果TNF-α诱导Hela细胞凋亡与其诱导NF-κB活化明显相关,100 IU/ml的IFN-α能显著增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡和抑制TNF-α诱导的Hela中NF-κB的活化。细胞凋亡增加率为69.2%(P<0.05),NF-κB活化抑制率为48.0%(P<0.05)。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF-κB;IFN-α可通过抑制NF-κB活化,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞的作用

目的:探讨不同浓度TNF-α对培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌AngⅡ、胶原及AT1受体表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸测定法观察成纤维细胞培养上清胶原含量,酶免法检测心肌成纤维细胞培养液AngⅡ含量,免疫细胞化学法观察心肌成纤维细胞膜AT1受体的表达变化。结果:TNF-α呈浓度依赖性的促进培养的乳鼠心肌成纤维细胞分泌AngⅡ和胶原,促进心肌成纤维细胞增殖及AT1受体的表达。结论:TNF-α促进心肌成纤维细胞分泌AngⅡ介导了心肌纤维化而参与心肌改建。     

参苓白术散对肿瘤恶病质患者TNF-α、TWEAK、Fn14表达的影响

目的：观察参苓白术散对肿瘤恶病质患者血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、肿瘤坏死因子弱凋亡诱导剂（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK）、成纤维细胞生长诱导因子-14（fibroblast growth fac－tor-inducible 14,Fn14）表达的影响。方法：将64例诊断符合肿瘤恶病质,辨证属于脾气虚证患者,随机分为2组。对照组32例,予以复方氨基酸等营养支持治疗;治疗组32例,在营养支持治疗基础上加用参苓白术散汤剂,水煎服,每日1剂,分3次温服,共用4周。观察治疗前后中医临床证候、生存质量评定（Kanrofsky score,KPS）、TNF-α、TWEAK及其受体早期反应蛋白Fn14。结果：治疗组和对照组脾气虚证患者治疗后比较,中医证候总有效率分别为40.62%和15.62%,治疗组明显优于对照组（P<0.05）。在KPS评分改善率方面,治疗组优于对照组（P<0.05）。2组治疗后TNF-α、TWEAK、Fn14均降低,治疗组治疗前后差异有统计学意义（P<0.05）,2组间比较,治疗后治疗组TNF-α、TWEAK、Fn14降低更为显著,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：参苓白术散与营养支持相联合,可改善肿瘤恶病质患者中医证候,提高患者体力状况,降低患者体内TNF-α、TWEAK、Fn14表达,提示参苓白术散可能通过该途径起到控制肿瘤恶病质发生的作用。     

bFGF和TNF-α在颈椎后纵韧带骨化中的作用

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和肿瘤坏死因子(TNF-α)在颈椎后纵韧带中的表达水平及在骨化发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学法,对30例骨化颈椎后纵韧带标本进行bFGF和TNF-α检测,与40例正常颈椎后纵韧带标本进行对照,再利用SPSS10.0行FISHER精确检验,分析有无统计学意义。结果：正常对照组bFGF表达10例阳性,30例阴性,阳性率25%;颈椎后纵韧带骨化组bFGF表达24例阳性,6例阴性,阳性率80%,差异有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组TNF-α表达32例阳性,8例阴性,阳性率80%;颈椎后纵韧带骨化组TNF-α表达10例阳性,20例阴性,阳性率33.3%,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：bFGF的异常高表达和TNF-α的低表达促进了颈椎后纵韧带骨化的发生,这两种因子的异常表达在该病发病机制中有重要作用。     

重组人白介素-10对TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察重组人白介素-10（IL-10）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的血管外膜成纤维细胞（NIH／3T3细胞）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用体外培养的NIH／3T3细胞,分别应用终质量浓度为20ng／mL TNF-α、100ng／mL IL-10、200ng／mL IL-10、100ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α、200ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α作用24h,并设对照组进行比较,采用MTS／PMS法确定NIH／3T3细胞的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定NIH／3T3细胞中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）MTS／PMS法测定各组细胞增殖率统计分析显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激NIH／3T3细胞的增殖（P〈0．001）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的增殖均无明显作用（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF—α组比较,NIH／3T3细胞增殖均显著减少（P〈0．01）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF—α组能显著刺激NIH／3T3细胞中的syndecan-4蛋白表达（P〈0．05）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF-α组比较,NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0．001）。结论IL—10可明显抑制TNF-α诱导的NIH／3T3细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。