原位杂交检测胃癌组织中组织蛋白酶B的表达

原位杂交检测胃癌组织中组织蛋白酶Ｂ的表达刘颐，施尧，王利民，任卫平，萧树东组织蛋白酶Ｂ（ＣａｔｈｅｐｓｉｎＢ，ＣＢ）是一细胞溶酶体巯基蛋白酶，能降解许多细胞外基质成分。国外许多学者认为，其可能参与了肠癌、前列腺癌等肿瘤的浸润转移［１－２］．但对ＣＢ在...     

组织蛋白酶B与细胞凋亡及肺纤维化的关系

组织蛋白酶B是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶，作用广泛，参与机体多种生理、病理过程。近年来研究发现，组织蛋白酶B还参与了细胞凋亡的起始环节，其途径大致包括依赖于和不依赖于caspases两条细胞凋亡途径，同时有研究表明组织蛋白酶B在肺纤维化的形成过程中发挥作用。近年来人们对组织蛋白酶B与细胞凋亡的关系作了大量的研究，取得了大量的研究成果，同时有研究表明组织蛋白酶B在肺纤维化的形成过程中发挥作用。     

组织蛋白酶B酶联免疫吸附测定方法的建立

组织蛋白酶B（CB）与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切。目的：建立CB酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系。方法：将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞，表达目的蛋白重组CB；经Western blot分析和制备型电泳纯化后，免疫新西兰大白兔，获得CB多克隆抗。纯体后的抗体一部分作为固化抗体，另一部分用辣根过氧化物酶标记；棋盘滴定法确定工作浓度。结果：痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白。制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白。重组CB免疫动物后，可获得高效价的CB多克隆抗体，用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB。结论：用重组CB免疫动物后可获得相应抗体，以建立CB检测的ELISA方法。     

肝癌组织蛋白酶B及其基因表达与临床病理因素的关系

[目的]探讨肝癌(HCC)组织中组织蛋白酶B(CB)和CB mRNA的表达和作用。[方法]应用免疫组织化学和RT-PCR方法测定71例肝组织标本CB及CB mRNA,其中对照(C)组12例,HCC组34例和HCC癌旁组织(PTT)组25例,对比分析CB、CB mRNA与肝癌临床病理因素的关系。[结果]HCC组CB的平均吸光度值和CBmRNA条带的光密度比值均明显高于C组和PTT组(均P0.01),PTT组与C组间均无显著差异(P0.05)。CB在包膜不完整,有肝内转移和肝外转移HCC中的表达分别明显高于包膜完整,无肝内转移和肝外转移者(P0.05或0.01);与肿瘤的大小无关(P0.05);随组织分化降低,均有增高趋势,但无统计学意义。[结论]HCC组织CB及其基因均呈现高表达,可能在HCC的发生、发展,尤其是侵袭和转移过程中发挥重要的作用。     

组织蛋白酶B在小鼠暴发性肝衰竭肝组织中的表达

目的研究组织蛋白酶B在暴发性肝衰竭小鼠肝组织中的表达。方法雄性昆明种小鼠腹腔同时注射脂多糖和D-氨基半乳糖,动态观察给药后2、4、6、8 h肝脏病理改变;以TUNEL法检测肝细胞凋亡;应用免疫组化和RT-PCR检测肝组织中组织蛋白酶B的表达。结果肝组织病理：给药后4 h出现凋亡细胞,6 h大量肝细胞凋亡,8 h以肝细胞坏死为主;TUNEL：给药后凋亡指数逐渐升高,6 h达到高峰,8 h有所降低;免疫组化：组织蛋白酶B表达2 h无明显变化（P〉0.05）,4 h逐渐增加,8 h达到高峰（P〈0.05）;RT-PCR：2 h组织蛋白酶B mRNA的表达量无明显变化（P〉0.05）,4 h表达略有升高,6 h表达最高,8 h表达有所降低（P〈0.05）。结论组织蛋白酶B在小鼠暴发性肝衰竭肝组织中表达明显增加,提示其可能通过促进肝细胞的凋亡而参与了暴发性肝衰竭的发病。     

不同亚型胃癌细胞株裸鼠移植瘤中组织蛋白酶B的表达

目的：研究组织蛋白酶B（CB）在裸鼠移植瘤中的表达及其与不同亚型胃癌细胞株体内成瘤性的关系。方法：以体外层粘素（laminin)附粘法筛选获得的两株MKN45胃癌细胞亚株：对层粘素高粘附力（Lm^ )的细胞亚株和低粘附力（Lm^-)的细胞亚株建立人胃癌裸鼠移植瘤模型，应用免疫组化及原位杂交方法观察荷瘤组织中CB的表达情况。结果：Lm^ 细胞株瘤块与周围组织粘连较Lm^-瘤块明显。免疫组化和原位杂交均显示移植瘤组织中的CB表达增强，且Lm^ 瘤块的表达强于Lm^-瘤块，以肿瘤边缘表达最强。结论：CB在胃癌细胞株移植瘤中的表达增强，尤以Lm^ 细胞株为著，其表达上调可能与癌细胞株的体内侵袭行为有关。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与肿瘤的侵袭和转移

基质金属蛋白酶类（matrix metalloproteinases，MMPs）是降解细胞外基质（extracelluler matrix，ECM）的重要的一组蛋白酶类，其降解ECM的功能在生理上的作用包括伤口愈合、骨吸收、乳腺退化等，在病理生理方面的作用涉及到类风湿性关节炎、冠状动脉疾病及肿瘤等。MMP被认为与肿瘤生长、侵袭、转移有关。许多研究显示肿瘤转移伴有MMPs的过度表达。     

组织蛋白酶B、L在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨组织蛋白酶B、L在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法收集44例非小细胞肺癌标本，石蜡包埋切片，通过免疫组化的方法检测组织蛋白酶B、L的表达。结果组织蛋白酶B、L随着肿瘤分期的进展其表达阳性率明显升高，Ⅲ期～Ⅳ期的病人组织蛋白酶B、L的表达与I期-Ⅱ期的病人有显著差异（P〈0．05）。组织蛋白酶B和L的表达高度相似。结论组织蛋白酶B、L的表达与非小细胞肺癌的进展和预后有关。     

组织蛋白酶B在人腹主动脉瘤中的表达及其意义

目的:研究组织蛋白酶B在人腹主动脉瘤(AAA)中的表达情况,以探讨其在AAA发生发展中的作用。方法:对17例AAA患者(AAA组)和6例正常腹主动脉尸体供肾者(正常腹主动脉组)的腹主动血管标本行苏木精-伊红染色、Van Gieson法染色和免疫组化技术染色,研究组织蛋白酶B对血管中膜的改变情况。结果:与正常主动脉组相比,在Van Gieson法染色中可见AAA组胶原含量有不同程度的增加。α-平滑肌肌动蛋白在AAA组和正常主动脉组中表达的平均吸收度分别是0.2634±0.0530和0.3335±0.0549,其表达水平明显降低(P<0.01)。组织蛋白酶B的平均吸收度2组分别为0.3465±0.0479和0.1306±0.0579(P<0.01)。结论:AAA患者血管平滑肌细胞表达的组织蛋白酶B水平增加,参与了血管壁的破坏和重建过程。     

重组组织蛋白酶B的表达和纯化

背景：研究表明组织蛋白酶B（CB）与肿瘤转移相关。目的：用基因工程技术生产大量重组CB。为研究CB的生物学特性和制备CB抗体供临床检测作准备。方法：用重组痘苗病毒转染真核细胞。采用真核表达目的蛋白CB。用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法鉴定目的蛋白，根据CB的分子量和等电点，用制备型电泳纯化蛋白。结果：痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白，产量为0.12mg/10^8细胞，重组CB的分子量（31kDa和25kDa)。等电点（4.552-5.588)和免疫原性与天然CB一致。制备型电泳能简单，有效地纯化蛋白。结论：运用痘苗病毒真核表达系统可以高效表达CB。     

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,攻击感染后６Ｗ计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数结果 用构建的ｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠成虫发育,肝组织减卵率为５９．３￣６５．０％,肠组织减卵率为５７．６￣６２．１％,粪便减卵率为８６．５％。结论Ｓｊ３１ＢＩＮ可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。     

组织蛋白酶B在胃癌浸润转移中的作用研究

本文使用特异的兔抗人肝组织蛋白酶B抗体及全长人CBcDNA,采用原位杂交及免疫组化技术研究CB在人胃癌组织中的表达,结果显示在两种不同的水平(mRNA及蛋白质水平)上,胃癌组织中CB的表达明显增高,且与浸润深度、生长类型及淋巴结转移有关,而与组织学类型无关,统计学上有显著性差异(P<0.05).提示CB在胃癌的生长浸润过程中起着一定作用。     

组织蛋白酶S与动脉粥样硬化

组织蛋白酶S(cathepsinS,CatS)是广泛分布于各种组织细胞溶酶体的一种蛋白水解酶,可降解细胞内外多种酶和蛋白质.CatS失衡会促进炎症反应、动脉粥样硬化以及诱发糖尿病和肥胖等.近年来研究显示,CatS与血管危险因素和动脉粥样硬化之间均存在一定的相关性.     

组织蛋白酶B对人脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨组织蛋白酶B(CTSB)对人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)增殖及凋亡的影响。方法:慢病毒转染HUVEC,获得稳定过表达CTSB的HUVEC细胞系HU-CTSB。CCK-8法检测转染前后各组细胞的增殖情况;流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况;实时定量PCR法检测各组细胞内凋亡基因Bax;蛋白质印迹法检测各组细胞被剪切的内caspase3表达差异。结果:CCK8法检测发现,与转染前及空病毒对照组HU-MOCK相比,HU-CTSB细胞的生存率明显下降(P0.01);流式细胞法检测发现,HU-CTSB细胞的凋亡率明显增高(P0.01);实时定量PCR法检测发现,HU-CTSB细胞中Bax mRNA水平增高(P0.01);蛋白质印迹法检测发现,HU-CTSB细胞中Bcl蛋白表达下降,且被剪切的caspase3的量最多。结论:CTSB可以抑制HUVEC的生长,并通过上调Bax的表达,激活caspase3通路诱导HUVEC发生凋亡。     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.     

组织蛋白酶B、基质金属蛋白酶-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨组织蛋白酶B(CB)和基质金属蛋白酶(MMP)-2在非小细胞肺癌发生、发展及转移中的作用。方法应用免疫组织化学法检测75例非小细胞肺癌组织及28例良性肺病变中CB和MMP-2的表达情况,并将检测结果与临床病理特征进行综合分析。结果 CB和MMP-2的表达主要定位于细胞质,CB和MMP-2在非小细胞肺癌中表达的阳性率明显高于良性肺病变(P0.05)。非小细胞肺癌中MMP-2蛋白的表达与有无淋巴结转移情况密切相关。肺癌组织中CB、MMP-2的表达水平呈显著正相关。结论 CB和MMP-2在非小细胞肺癌中表达上调,联合检测CB和MMP-2对肿瘤的诊断和预后判断有一定的临床意义。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂在胃肠道肿瘤中的诊断价值

半胱氨酸蛋白酶是蛋白水解酶中的一类超家族。半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CSTs)通过与半胱氨酸蛋白酶相结合,抑制蛋白酶发生水解反应,参与细胞的应答、衰老、细胞程序化死亡等生理过程。在许多生理和病理生理中都有重要作用,包括细胞存活和增殖、分化、细胞信号传导和免疫调节等方面。本文主要从半胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构、分类及在胃肠道肿瘤中的表达特点、可能机制进行了概述。     

组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤平滑肌细胞中的表达

目的 观察组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤平滑肌细胞中的表达情况,以探讨其在腹主动脉瘤发生发展中的作用.方法 对21例腹主动脉瘤患者和8例正常腹主动脉尸检者的腹主动脉血管标本行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色,观察组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C对血管中膜的影响.结果 免疫组织化学染色可见组织蛋白酶B和Cystatin C分别在腹主动脉瘤、正常腹主动脉中免疫反应阳性,阳性定位于平滑肌细胞质;腹主动脉瘤平滑肌细胞中组织蛋白酶B阳性细胞平均光密度值明显增高,Cystatin C明显降低,与正常腹主动脉之间有显著差异(P<0.01).结论 腹主动脉瘤平滑肌细胞中组织蛋白酶B表达增强,Cystatin C表达下降,组织蛋白酶及其抑制剂Cystatin C间的不平衡可能引起动脉瘤壁细胞外基质广泛降解,从而导致腹主动脉瘤的发生和破裂.     

改良发色底物法测定胃肠道肿瘤患者外周血单核细胞中组织因子活性

目的：建立一种简便易行的测定组织因子（TF）活性的方法,研究胃肠道肿瘤患者外周血单核细胞中TF活性与肿瘤的关系。方法：采用已商品化的冻干人凝血酶原复合物（PPSB）作为因子Ⅶ,Ⅹ的来源,活化的Xa水解底物S2222释放对硝基苯胺,405nm处的吸光度与标准液中的组织凝血活酶含量成良好的双对数关系（r=0.998),采用此法测定32例胃癌,45例结直肠癌患者和30例正常人外周血单核细胞TF的促凝活性。结果：该方法简单,灵敏,能定量,性范围大,胃肠道肿瘤患者外周血单核细胞的活性明显高于对照组（P＜0．05）,且与肿瘤恶性程度成正比（P＜0．05）。结论：检测TF在外周血单核细胞中的活性水平将有助于评估肿瘤的恶性程度。,     

组织蛋白酶与动脉硬化的关系

组织蛋白酶(cathepsin,cat)是溶酶体内的蛋白水解酶,根据其活性部位所含的氨基酸的不同,cat可以分为丝氨酸cat(如cat A和G)、天冬氨酸cat(如cat D和E)和半胱氨酸cat(CC).