农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化

采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121／DREB1A的根癌农杆菌AGL1, 对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50mg／L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25mg／L卡那霉素进一步筛选再生植株, 获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14％,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1h、共培养时间为2d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率。     

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究

抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究＠李天然,张剑峰,李旭刚￥内蒙古大学生物学系甜菜,抗冷冻蛋白（ＡＦＰ）基因,遗传转化,根癌农杆菌,ＰＣＲ扩增抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究李天然,张剑峰,李旭刚（内蒙古大学生物学系,０１００２１,呼和浩特）ＳｔｕｄｙｏｎＴｒａｎ...     

农杆菌介导抗虫基因转化芥菜型油菜的研究

用农杆菌介导法对芥菜型油菜进行了转化，并对影响根癌农杆菌转化效率的因素进行了研究，建立了以油菜子叶柄为外植体的转化体系．用携带蝎毒素(BmKITs)和几丁质酶(chi)双价基因的农杆菌转化油菜，共获得了抗卡那霉素的再生苗153株，移栽成活21株．对成活植株进行了PCR分子检测，证实有外源基因的整合．转基因植株形态正常，开花、结实．     

应用农杆菌介导法的多年生黑麦草遗传转化研究

以草坪型多年生黑麦草Lolium perenne L.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc-LP5通过PCR检测证明了目的基因的存在,通过叶片离体检测法证明了作为检测基因随同质粒一同转入的抗潮霉素基因的表达,通过盆栽耐盐试验证明了转基因植株具有较强的耐盐能力.     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因载体构建及石斛兰转化

 细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis（Bt）中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出可用于转入石斛兰的pSAN载体;首次利用根癌农杆菌EHA105将pSAN载体转入石斛兰,并获得潮霉素抗性苗。这些抗性苗经GUS组织化学染色和PCR检测证实为转基因苗, 这将为获得具有软腐病抗性的石斛兰品种打下基础。     

影响农杆菌介导的辣椒基因转化因素的研究

试验设置农杆菌类型、辣椒基因型、外植体、vir基因活化培养基、方法5个因素，研究了利用根癌农杆菌介导法辣椒遗传转化的效果。以获得Km抗性芽外植体频率为指标，发现农杆菌菌株类型和辣椒基因型对转化效率都有较大影响，直接影响着转化效率。采用预培养2d的子叶外植体，用农杆菌侵染5～7min，可获得最高的转化效率。     

农杆菌介导外源基因进入油菜的研究

用甘蓝型油菜子叶为外植体，以农杆菌共培养法将苏云金杆菌δ－内毒素基因和ＮＰＴＩ基因导入油菜．所用的农杆菌为ＬＢＡ４４０４－δ（ｄｉｓａｒｍｅｄｐＡＬ４４０４，ｐＧＡ６４３－δ）．ＰＧＡ６４３－δ为表达载体，其中克隆有ＮＰＴＩ基因和δ－内毒素基因．共培养４ｄ后，转化的子叶被转入含有卡那霉素（Ｋｍ）的分化培养基［１］上，分化出芽．被切下的芽在含有Ｋｍ的生根培养基［２］上生根，移栽后成活的小抗Ｋｍ油菜苗生长良好．用ＤＮＡ分子杂交、ＥＬＩＳＡ分析和生物测定等方法证明外源基因被转移到油菜中．     

农杆菌介导的白芥防御素基因对甘蓝型油菜的转化

通过根癌农杆菌介导将正向和反向插入白芥防御素基因的pBI121重组质粒转入甘蓝型油菜的下胚轴,经组织培养和抗性筛选获得再生植株. PCR检测后,初步鉴定为阳性植株.     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化体系的研究

以重庆主栽品种的叶片和茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性愈伤出芽的影响,初步建立了马铃薯品种"台湾红"和"Spunta"的遗传转化体系并获得了转化植株.     

纳豆激酶基因导入番茄的研究

将来源于枯草芽孢杆菌的纳豆激酶(nattokinase,NK)基因转化到人类可以直接食用的,又非常喜爱的蔬菜—番茄中,得到在转录水平表达的转基因植株.通过根癌农杆菌EHA105介导,转化番茄的下胚轴,诱导愈伤组织形成及分化成幼苗,进而再生出完整植株.提取再生植株基因组DNA,通过PCR扩增检测,结果表明纳豆激酶基因已经成功整合到番茄植物基因组中.RT-PCR实验结果证明了纳豆激酶基因在转录水平上有表达.     

甘薯离体遗传转化体系的优化

对影响根癌农杆菌介导的甘薯离体遗传转化的若干因素进行了研究.结果表明:甘薯茎段外植体在浓度为OD600=0 4的菌液中浸染4min、预培养3d、共培养3d并在共培养基中加入6mg·L-1硝酸银,或25mg·L-1乙酰丁香酮,并将培养基pH值从5 8下调至pH5 0等措施均能显著提高其遗传转化频率,而菌液中加入乙酰丁香酮、在预培养基中加入硝酸银等措施均不利于甘薯遗传转化.     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化

以粳稻、空育131、垦鉴稻7号成熟胚、幼胚诱导的愈伤组织为材料,将反义蜡质基因导入受体材料.经两次抗性筛选后,转入分化培养基中分化培养后获得转基因小苗.成熟胚和幼胚的转化效果比较,幼胚优于成熟胚.将转化植株进行PCR鉴定,证明外源目的基因已经整合到植株中.     

柚子转化的研究

本文报道一个简便的转化实验。柚子能被含Ti质粒的农杆菌感染。Ti质粒带有一个npt-Ⅱ基因和一个胭脂碱合成酶基因。卡那霉素抗性绿苗经NPT-Ⅱ酶活性测定和DNA分子杂交试验证明外源基因己导入柚子。     

环状芽胞杆菌（Bacilluscirculans）的转化和中性蛋白酶基因的表达

用枯草芽胞杆菌质拉载体ｐＮＱ１２２和含有中性蛋白酶基因的重组质粒ｐＭＰＲ８转化环状芽胞杆菌Ｃ－２，转化频率为１．０×１０３转化子／μｇＤＮＡ．含有ｐＭＰＲ８的转化子能在酪蛋白平板上形成清晰的水解圈，其蛋白酶活性与相同质粒转化枯草杆菌ＤＢ１０４所得酶活性相近．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证实了转化细胞中存在质粒ｐＮＱ１２２和ｐＭＰＲ８，两种质粒在该菌中的稳定性差别很大．     

提高农杆菌介导小麦遗传转化效率的几个因素

利用gua基因的瞬时表达研究了农杆菌介导的小麦遗传转化,探讨了影响转化效率的几个因素．结果发现,当转化时茵液浓度的OD600为1．0、侵染时间为1h、超声波处理30s、共培养期间使用抗氧化剂以及用胚性愈伤组织作为外植体等,均可使转化效率得到明显提高、综合使用这些优化的转化条件,可使小麦的瞬时转化效率提高3倍多．     

桑树遗传转化技术中抗生素的浓度优化研究

调查了抗生素对根癌农杆菌介导的桑品种“新一之濑”遗传转化不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响及其对农杆菌的抑制效果 ,并确定 :在叶盘 (或茎尖 )转化筛选培养阶段 ,Kan (卡那霉素 )和 Cab (羧苄青霉素 )适宜浓度分别为 3 0～ 40 mg/ L和 2 0 0～40 0 mg/ L (或 6 0～ 80 mg/ L和 2 0 0～ 6 0 0 mg/ L ) ,在抗性芽继代 (或生根 )培养阶段 ,Kan和Cab分别为 40～ 5 0 mg/ L和 1 0 0～ 2 0 0 mg/ L (或 5～ 1 0 mg/ L和 5 0～ 1 0 0 mg/ L) .Cef(头孢霉素 )对桑树各种外植体的影响效果与 Cab相似 ,但两者的抑菌效果因农杆菌菌株、外植体类型以及培养阶段的不同而存在差异 ,用含 Kan、Rif(利福平 )和 Str(链霉素 )的 LB培养基浸渍叶盘则出现分化率下降、褐化死亡较严重的现象 .     

农杆菌介导的美洲商陆抗病毒蛋白基因对非洲菊遗传转化研究

以非洲菊叶柄基部的愈伤组织为材料,通过农杆菌介导法,建立高效稳定的遗传转化体系.结果表明,OD600值为0.3的菌液浓度,侵染时间8 min,36 h的共培养,延迟筛选2 d有利于获得较高的转化效率.通过农杆菌介导,持续筛选和PCR检测,美洲商陆蛋白(PAP)基因成功转入非洲菊幼苗.     

影响根癌农杆菌介导大岩桐转化因素的研究

以大岩桐为外植体,探讨根癌农杆菌介导的大岩桐遗传转化中存在的问题,找出影响转化的因素。     

大豆子叶节组培再生系统与农杆菌介导的基因转化系统的比较研究

不同基因型的大豆子叶节在添加适宜BA的MS培养基上培养，可从子叶节诱导出高频丛生芽，并获得大量再生植株．通过农杆菌介导法，将深黄被孢霉△＾6—脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉林43和黑农37品种中．经过在含500mg/L卡那霉素的筛选培养基中连续筛选，获得一批转基因植株．经PCR检测和DNA分子杂交分析，初步证明外源基因已导入并整合到大豆基因组中．本重点阐述了组培再生系统和基因转化系统的内在联系和不同点．