三七改善慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的研究

目的 探讨三七及引经药介导的三七通过调控转化生长因子-β(TGF-β)的表达改善慢性肾脏病(CKD)大鼠肾脏纤维化的作用.方法 将雄性SD大鼠100只随机分为5组:正常组(NOR,n=20)、模型组(CKD,n=20)、三七组(RN,n=20)、三七肉桂组(RNC,n=20)、三七桔梗组(RNP,n=20).除NOR组外均采用腺嘌呤灌胃方法建立CKD大鼠模型,建模后NOR组和CKD组予以同等体积生理盐水灌胃,RN、RNC、RNP组予以相应药物灌胃,连续4周.4周后处死各组大鼠取血清检测肾功能[肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)],取肾脏组织做HE、Masson染色观察各组大鼠肾脏组织病理损伤程度,应用免疫组化法检测肾脏组织纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)表达,用Westetn blot法检测肾脏组织转化生长因子-β(TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 与NOR组相比,模型组肾功能能减退,Scr、BUN显著升高(P＜o.01),肾间质出现严重纤维化表现,胶原的沉积增多(P＜0.05),肾脏组织TGF-β、α-SMA、FN、LN表达显著升高.与模型组相比,各治疗组肾功改善,Scr、BUN明显降低(P＜0.01),肾间质纤维化程度降低,胶原的沉积减少(P＜0.05),肾组织α-SMA、TGF-β、FN、LN表达有所回降.其中RNC组作用强于RN组和RNP组.结论 三七及引经药介导的三七均能不同程度延缓腺嘌呤所致CKD大鼠肾间质纤维化的进程,其可能机制是降低TGF-β蛋白表达.     

黄芩苷对UUO大鼠肾间质纤维化的影响及可能机制

目的 探讨黄芩苷对单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化(RIF)的影响及可能机制.方法 40只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、黄芩苷组、贝那普利组及黄芩苷+贝那普利组,每组各8只.黄芩苷组给予黄芩苷溶液灌胃40 mg·kg-1·d-1,贝那普利组给予贝那普利混悬液灌胃10 mg·kg-1·d-1,黄芩苷+贝那普利组给予黄芩苷溶液40 mg·kg-1·d-1和贝那普利混悬液10 mg·kg-1·d-1灌胃,假手术组与模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃.在造模第14、21和28天处死动物,取肾脏标本,免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1 (TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠在造模第14、21和28天,肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达均明显升高(P＜0.05).与模型组相比,黄芩苷组、贝那普利组及黄芩苷+贝那普利组大鼠在造模第14、21和28天,肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达均不同程度降低(P＜0.05).而黄芩苷组、贝那普利组和黄芩苷+贝那普利组3组之间各时间点肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 黄芩苷可能通过下调TGF-β1、减少α-SMA表达,从而延缓UUO大鼠RIF的进展.     

霉酚酸酯对大鼠肾毒血清肾炎肾小球肝细胞生长因子与转化生长因子-β1 表达的影响

目的 探讨霉酚酸酯对大鼠肾毒血清肾炎肾小球肝细胞生长因子(HGF)与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 大鼠分为正常对照组、模型组、霉酚酸酯治疗组,每组各10只.治疗组给予霉酚酸酯20 mg/(kg·d)灌胃,2周后测定各组24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平,应用免疫组化方法观察肾小球HGF与TGF-β1表达.结果 与模型组相比,霉酚酸酯治疗组能明显减少24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平(P＜0.01),显著增加肾毒血清肾炎大鼠肾小球HGF表达(P＜0.01),减少TGF-β1表达(P＜0.01).结论 该研究提示促进肾小球内HGF表达、抑制TGF-β1生成可能是霉酚酸酯减轻肾毒血清肾炎肾组织损伤程度,抑制新月体形成的机制之一.     

肾炎四味片对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质NF-κB、TGF-β1表达的影响

目的 探讨肾炎四味片对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠60只随机分为,①假手术组(A组);②肾炎四味片假手术组(B组);③模型组(C组),行左侧输尿管结扎术;④肾炎四味片治疗组(D组).每组15只,各组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,采用HE和Masson染色观察大鼠肾脏组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测肾小管间质中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达情况.结果 A组和B组各指标组内及组间比较差异无统计学意义(P>0.05).病理变化,C组间质纤维化程度进行性加重,组内比较差异有统计学意义(P<0.05),D组间质胶原纤维面积明显低于相应时间点的C组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学,C组NF-КB、TGF-β1在肾间质表达明显增强,与A组相比差异有统计学意义(P<0.05),与间质胶原纤维面积呈正相关.D组各因子的表达下调,与C组相应时间点相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 肾炎四味片可下调NF-κB、TGF-β1在肾间质中的表达,从而具有延缓肾间质纤维化的作用.     

健脾益肾方对5／6肾切除大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨健脾益肾方治疗慢性肾衰竭(CRF)及其抗肾纤维化的作用机制.方法:将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(N组),模型组(M组),健脾益肾方低剂量治疗组(L组)、高剂量治疗组(H组),除N组外均行5/6肾切除手术复制CRF动物模型.治疗组给予健脾益肾方灌胃.于第8周后用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr);RT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达.结果:各组大鼠肾脏均有TGF-β1 mRNA表达,N组有较弱表达,M组、L组大鼠肾组织表达较N组显著增加(P＜0.01),H组表达较N组增加,但差异无显著性(P＞0.05);L组及H组表达较M组明显减少(P＜0.01);H组表达较L组均显著减少(P＜0.01).结论:健脾益肾方可能通过抑制大鼠肾组织TGF-β1的表达,延缓肾纤维化的进展,达到治疗和延缓CRF进展的目的.     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子-β_1 mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA表达的影响

目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾脏病理、肾组织Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组24只。行单侧输尿管梗阻(UUO)术诱导肾小管间质纤维化模型。治疗组大鼠给予30 mg.kg-1水飞蓟素,模型组及假手术组给予生理盐水灌胃。分别于UUO术后第7、14、21天各组随机处死8只大鼠,光镜下观察肾组织的病理改变,免疫组织化学法评价肾组织Ⅲ型胶原蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾组织TGF-β1mRNA及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果各时间点肾小管间质损伤和肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量在治疗组和模型组均较假手术组明显增多(P均<0.01),治疗组较模型组则明显减轻(P均<0.05)。各时间点治疗组和模型组肾脏TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表达量明显高于假手术组(P均<0.01),治疗组则明显低于模型组(P均<0.05)。UUO大鼠肾间质中TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾小管间质损伤评分均呈正相关(r=0.915、0.838、P均<0.01)。TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量均呈正相关(r=0.833、0.786、P均<0.01)。结论在UUO大鼠模型中,水飞蓟素通过下调TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,减少Ⅲ型胶原的产生,从而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

Egr-1蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠中的表达及意义

目的 探讨Egr-1(early growth response-1)蛋白、MMP-2、TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达及意义.方法 采用单侧输尿管结扎术(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化大鼠模型.将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、贝那普利(Benazepril)治疗组[10 mg/(kg·d)].手术后第5、10和15天分别处死各组中6只大鼠,用免疫组化方法观察各组大鼠肾小管间质中Egr-1蛋白,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloProteinase-2,MMP-2)表达情况.行HE、Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度.结果 模型组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显高于假手术组(P＜0.05),MMP-2表达明显低于同期假手术组(P＜0.05);而贝那普利组各时间点肾小管间质损伤指数及Egr-1蛋白、TGF-β1表达明显低于模型组(P＜0.05),MMP-2表达明显高于同期模型组(P＜0.05).结论 Egr-1蛋白参与肾小管间质纤维化过程;贝那普利在肾小管间质纤维化中对肾脏有保护作用.     

miRNA表达谱在肾纤维化中的差异表达及抗纤灵的干预研究

目的筛选观察在阿霉素肾病大鼠模型特异性miRNA表达谱,观察抗纤灵方干预的作用。方法将SD雄性大鼠随机分为6组,每组8只。其中假手术组仅于右侧肾切除,灌于生理盐水,余下40只SD大鼠均采取右侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制备大鼠硬化模型。将造模成功后的大鼠分成模型组、科素亚组、抗纤灵低,中,高5组,分别给予相对应的药物共8周,观察各组大鼠肾脏组织TGF-β、Smad3 mRNA水平改变。同时对各组实验肾脏标本,运用miRNA高通量测序,检测miRNA表达谱,分析差异表达谱,观察抗纤灵方干预的作用。结果抗纤灵方对阿霉素肾病模型大鼠能降低TGF-β、Smad3 mRNA水平,差异有统计学意义(P 0.05)。随着抗纤灵剂量增加,其抗纤维化效应更明显,差异有统计学意义(P 0.05)。通过筛选miRNA表达谱,差异表达分析中发现假手术组与模型组表达谱差别最大,假手术组与抗纤灵高剂量治疗组差别最小。从差异表达分析中,观察到了药物处理剂量越大,样本的表达谱越与假手术组相近。结论抗纤灵方能改善肾纤维化,并且随着剂量增大抗纤维化的效果越好,推测其机制可能通过调节miRNA谱的差异表达,降低TGF-β、Smad3 mRNA水平,来改善肾纤维化。     

三七总皂甙对TGF-β/Smads信号通路的作用

目的研究三七总皂甙（PNS）对TGF-β/Smads信号通路的作用。方法将雄性SD大鼠80只随机分为4组：假手术（SOR）组、单侧输尿管梗阻（UUO）模型组、PNS治疗组和氯沙坦治疗组。做肾组织病理学检查,Real-TimePCR检测实验大鼠肾组织TGF-β1mRNA,Western Blotting检测TGF-β1蛋白,免疫组化检测TGF-β1、p-Smad2/3的表达。结果三七总皂甙干预后大鼠肾脏TGF-β1mRNA及其蛋白表达下调（P〈0.05）,p-Smad2/3在肾小管间质的表达亦减少（P〈0.05）,与氯沙坦作用相似（P〉0.05）。结论PNS能有效减轻UUO大鼠肾小管间质的损伤;PNS从基因、蛋白水平抑制TGF-β1、p-Smad2/3的表达,通过TGF-β1/p-Smad2/3信号通路而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

莫索尼啶对阿霉素肾病大鼠保护作用的研究

目的:探讨莫索尼啶对阿霉素肾病大鼠肾间质纤维化的影响及其机制.方法:将30只健康雄性sD大鼠随机分为3组:模型组(Mod)、莫索尼啶治疗组(Mox)、健康对照组(Con).采用尾静脉一次性注射阿霉素方法建立大鼠肾病模型,对照组尾静脉注射等量生理盐水.12周时测血浆去甲肾上腺素、血管紧张素Ⅱ水平.行HE及Masson染色,观察肾间质纤维化改变.免疫组化和原位杂交方法检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达.结果:模型组与对照组比大鼠血浆NE、Ang Ⅱ水平、肾间质纤维化面积、肾小管损害程度、肾小球体积均显著上升(P＜0.01);治疗组较模型组明显下降(P＜0.01).肾组织内TGF-β1蛋白及mRNA的表达:模型组较对照组显著上升(P＜0.01);治疗组较模型组显著下调(P＜0.01).结论:莫索尼啶能抑制交感神经活性,下调肾组织中TGF-β1的表达,干预肾间质纤维化进程来保护肾脏的.