髓样抑制细胞在肿瘤微环境中的角色

髓样抑制细胞(MDSC)是肿瘤微环境的一个重要组成部分,其主要的特点就是有着强大的免疫抑制活性.MDSC在骨髓中产生,在荷瘤宿主中迁移至淋巴器官和肿瘤组织,从而促进肿瘤微环境的形成.最近的一些研究发现MDSC在肿瘤组织中和在周围淋巴器官中的功能和演变有区别.本文通过回顾最近的发现对MDSC在肿瘤微环境中的角色进行探讨.     

髓系抑制性细胞的生物学特性及免疫抑制功能

髓系抑制性细胞(MDSCs)是一类具有未成熟性、异质性、可塑性的细胞群体,包括骨髓前体细胞和未成熟的骨髓细胞。在肿瘤、感染、创伤及自身免疫性疾病等病理状态下,MDSCs发生聚集并且活化,通过多种机制下调机体的免疫应答,发挥免疫抑制功能。研究者们正在研究各种克服MDSCs的方法,这样可以使抗肿瘤免疫和其他的免疫疗法得到更好的疗效。     

靶向髓源抑制性细胞的肿瘤免疫治疗研究进展

髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）起源于骨髓造血祖细胞,是具有免疫抑制功能的一群异质性细胞的统称。MDSCs具有免疫抑制功能,机制包括耗竭T细胞所需的氨基酸如精氨酸、半胱氨酸,产生活性氧、一氧化氮和过氧亚硝酸盐,直接抑制巨噬细胞和自然杀伤细胞,促进肿瘤血管生成等。研究表明MDSCs在多种肿瘤中表达上调并与不良预后相关。MDSCs可以作为肿瘤治疗的靶点,并且在多种肿瘤的临床治疗研究中发挥作用。临床试验表明,许多药物能够靶向抑制MDSCs扩增或清除MDSCs,包括多种癌症疫苗,常规化疗如吉西他滨、铂类、5-氟尿嘧啶等,酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、Acalabrutinib等,以及异黄酮、恩杂鲁胺、β-葡聚糖颗粒等。磷酸二酯酶5抑制剂他达拉非、CTLA-4抗体ipilimumab、抗CD33抗体AMV564以及三萜类化合物甲基巴多酚酮则能够抑制MDSCs的免疫抑制功能。此外,全反式维甲酸可以诱导MDSCs分化成熟,而趋化因子拮抗剂BL-8040能够抑制MDSCs迁移。不同的治疗策略大都具有减少MDSCs计数,抑制MDSCs功能的作用,但它们的临床疗效是参差不齐的。总之,与MDSCs相关的临床试验大多处于初期阶段,需要开展更多的更深入的试验来探索有效的治疗方案。     

浸润T淋巴细胞在肿瘤微环境中诱导髓系来源的抑制性细胞募集的实验研究

目的 通过研究浸润T淋巴细胞的存在对髓系来源的抑制性细胞(MDSC)数量变化的影响,探讨浸润T淋巴细胞在肿瘤微环境中对MDSC的募集作用。方法 建立BALB/c小鼠和免疫缺陷裸鼠荷瘤模型,进行裸鼠荷瘤T淋巴细胞过继实验和抗体阻断T淋巴细胞实验,观察对肿瘤生长的影响,采用肿瘤组织HE染色观察病理组织学变化,采用流式细胞术 (FACS) 检测肿瘤组织内MDSC的数量变化。结果 荷瘤裸鼠肿瘤较正常小鼠荷瘤的肿瘤生长更快(P<0.05),肿瘤微环境中MDSC的百分率更低,与正常小鼠肿瘤组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。接受T淋巴细胞过继后的荷瘤裸鼠肿瘤微环境中MDSC百分率有增加(P<0.05)。接受抗体阻断实验的过继荷瘤裸鼠肿瘤组织内MDSC百分率减少(P<0.05)。结论 肿瘤微环境中浸润T淋巴细胞能直接诱导MDSC的募集,并对肿瘤生长产生影响。     

三氧化二砷诱导人髓样甲状腺癌TT细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人髓样甲状腺癌TT细胞体外生长的影响。方法选用不同剂量As2O3处理人髓样甲状腺癌TT细胞后，通过倒置相差显微镜、电子显微镜、MTT法、AO／EB荧光染色法和流式细胞术研究As2O3对人髓样甲状腺癌TT细胞生长的影响。结果As2O3具有抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长和促进其凋亡的作用，这种作用主要在中浓度（2．0～5．0μmol／L）产生，而在高浓度（10．0μmol／L）则可引起细胞死亡。结论As2O3明显抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长，并诱导细胞凋亡，在甲状腺癌的辅助治疗上具有很好的应用前景。     

荷瘤乳腺癌女性外周血髓样来源抑制性细胞表达浓度及意义分析

目的： 分析荷瘤乳腺癌女性外周血髓样来源抑制性细胞（MDSC）表达浓度及意义。方法：连续选取2015年1月至2016年12月经我院肿瘤外科初次确诊的女性乳腺癌患者41例,入选对象均未接受过各种治疗。对照组选择同期参加我院医院体检结论健康志愿者26例。乳腺癌组在开始治疗前接受了外周血MDSC（CD11b+、CD33+、CD14-）表达浓度检测,对照组在体检期间接受了相同检查。结果：荷瘤乳腺癌女性患者外周血MDSC表达浓度明显高于对照组,不同年龄荷瘤乳腺癌女性外周血MDSC表达浓度均明显高于相同年龄对照组（P均<0.001）。不同临床表现荷瘤乳腺癌女性外周血MDSC表达浓度比较中, 肿瘤淋巴结转移（TNM）Ⅲ期组外周血MDSC表达浓度明显高于TNM Ⅰ期和Ⅱ期组（P<0.01）,而年龄小组与年龄大组外周血MDSC表达浓度分布无明显区别（P>0.05）。不同病理情况荷瘤乳腺癌女性外周血MDSC表达浓度比较中,淋巴结转移组外周血MDSC表达浓度明显高于无淋巴结转移组（P<0.01）,而肿瘤体积小组与肿瘤体积大组、组织学Ⅰ级和Ⅱ级组与组织学Ⅲ级组外周血MDSC表达浓度分布均无明显区别（P均>0.05）。不同分子学分型荷瘤乳腺癌女性外周血MDSC表达浓度比较中, Luminal A、Luminal B、HER-2过表达型和三阴乳腺癌等分子学分型荷瘤乳腺癌女性外周血MDSC表达浓度分布均无明显区别（P均>0.05）。结论：外周血MDSC可作为乳腺癌生物学辅助诊断特异性标识,且与乳腺癌临床TNM分期以及有无淋巴结转移关系密切。     

自噬在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用

目的 观察在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）作用下甲状腺髓样癌TT细胞自噬发生情况,明确自噬在TRAIL诱导甲状腺癌TT细胞凋亡中的作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;MDC染色检测自噬的发生情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 ①MTT实验显示：TRAIL对TT细胞增殖抑制作用弱,在浓度为250、500、1000、2000 ng/ml的TRAIL作用48 h后对TT细胞增殖抑制率分别为（3.02±1.82）％、（4.87±1.45）％、（7.51±1.57）％及（12.76±3.23）％;②TRAIL作用48 h后,胞内代表自噬小体的绿色荧光亮点明显增多,且随TRAIL浓度的增加而增加;③3-MA预处理TT细胞4h,TRAIL 500 ng/ml及1000 ng/ml的凋亡率分别为（17.83 ±1.54）％及（27.81±1.79）％,明显高于单用TRAIL（3.70±0.34、6.55 ±0.59）％与3-MA （7.71±0.64）％之和,差异有统计学意义（t=3.282,P＜0.05;t=7.830,P＜0.01）.④各实验组可见明显的caspase-8的活化裂解片段,自噬相关蛋白Beclin 1的表达明显减低.结论 甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感,TRAIL能诱导TT细胞内自噬发生,抑制自噬可明显改善TT细胞对TRAIL的敏感性.     

从黑色素瘤荷瘤小鼠中分离纯化髓系抑制性细胞

目的：从黑色素瘤荷瘤小鼠脾脏中分离得到CD11b＋Gr-1＋的髓系抑制性细胞（ Myeloid derived suppressor cells ,MDSCs）。方法给C57BL/6小鼠注射LPS或者小鼠黑色素瘤细胞株B16BL6后,取小鼠的脾脏细胞,检测其中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs 细胞的比例。通过流式细胞仪（ flow cytometry, FCM）分选出CD11b＋Gr-1＋的细胞,培养24小时后,CBA（cytometric bead array）法检测其分泌IL-10的情况;提取CD11b＋Gr-1＋细胞的总RNA,利用RT-PCR的方法检测其表达IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO的情况。结果与注射LPS相比,注射B16BL6细胞株的小鼠脾脏中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs细胞的比例更高;利用FCM分选得到CD11b＋Gr-1＋的MDSCs,进一步鉴定发现其表达IL-10、IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO。与先前报道的MDSCs的特征相一致。结论可从B16BL6荷瘤小鼠脾脏中获得高纯度的MDSCs用于实验研究。     

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides, Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性,筛选最佳高糖干预浓度;检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol, Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril, Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性,筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L...     

LPS诱导CD11b~+Gr-1~+髓源抑制性细胞在小鼠脾脏募集的研究

目的观察脂多糖(LPS)诱导的髓源抑制性细胞(MDSCs)在小鼠脾脏中的募集情况,以探讨诱导MDSCs募集的新方法。方法采用LPS反复腹腔注射的方法使小鼠产生内毒素耐受。流式细胞术检测正常小鼠和LPS注射小鼠第5、10天脾脏中CD11b+Gr-1+双阳性细胞,即MDSCs的比例。结果经LPS处理后第5、10天脾脏MDSCs的比例分别为(17.99±1.66)%和(27.37±6.62)%,较正常小鼠(4.53±3.00)%显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS可在短期内诱导大量MDSCs在小鼠脾脏中聚集。     

高脂饲料动员CD11b~+Gr-1~+髓系抑制性细胞参与动脉粥样硬化形成的研究

目的:研究高脂饲料饲养ApoE-/-小鼠建立动脉粥样硬化动物模型的过程中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的变化趋势,以期揭示高脂血症导致动脉粥样硬化的另一种可能的细胞机制。方法:将12只雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组(n=6)和模型组(n=6),分别给予普通饲料与高脂饲料处理。8周后酶法和免疫比浊法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A-I(apoA-I)和载脂蛋白B(apoB)水平;HE染色观察主动脉病理形态学改变;油红O染色观察内皮下间隙脂质沉积情况;流式细胞术分析骨髓、脾脏、外周血中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的百分比,比较其与对照组之间的差异度。结果:8周的高脂饲喂使得ApoE-/-小鼠血脂水平显著改变,动脉粥样硬化斑块明显形成,CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞占骨髓单个核细胞比例显著升高,并进一步被动员释放到外周组织,导致循环中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞显著增加。结论:高脂饲料饲养ApoE-/-小鼠能使CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的生成显著增加,并向循环和外周组织释放。高脂血症可能是通过激活CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的途径来参与动脉粥样硬化的发生、发展。     

肾细胞癌源性exosomes体外诱导单核细胞分化为PD-L1髓源性抑制细胞

目的研究肾细胞癌源性exosomes诱导人外周血单核细胞分化为髓源性抑制细胞及该细胞PD-L1分子表达情况的效应。方法超滤和蔗糖重水密度梯度离心相结合的方法分离纯化肾细胞癌源性exosomes。Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁法获取外周血单核细胞。倒置显微镜观察获得的单核细胞形态。流式细胞仪检测单核细胞比例及活性、经exosomes诱导的单核细胞活性情况、髓源性抑制细胞(MDSCs)及其上PD-L1分子的表达情况。结果贴壁的单核细胞形状为圆形或类圆形具少许短小伪足状突起;贴壁法获得的单核细胞比例达83.5%,活细胞比例约90.0%;髓源性抑制细胞的生成较对照组明显增加[(8.91±0.21)%vs(3.19±0.91)%,P<0.05],且该髓源性抑制细胞表达PD-L1较对照组明显增高[(88.93±8.57)%vs(44.53±5.35)%,P<0.05];体外经exosomes诱导刺激的单核细胞损伤率较对照组明显升高[(39.93±16.51)%vs(12.87±2.43)%,P<0.05]。结论肾细胞癌源性exosomes在体外能够促进单核细胞损伤,诱导单核细胞分化为髓源性抑制细胞,且该髓源性抑制细胞表达PD-L1增高,可能是其抑制T细胞免疫功能的负性调节机制之一。     

髓源性抑制细胞在胃癌患者外周血中的变化及临床意义

目的: 观察胃癌患者外周血中髓源性抑制细胞（myeloid derived suppressor cells,MDSCs）的数量变化并探讨其临床意义。方法：选取24例胃癌患者和15例健康志愿者,术前收集外周血2 mL;选择术后30天、门诊复诊经检查恢复顺利的患者18例与术前配对,收集外周血, 以CD14 /CD11b+/CD33+/HLA DR 作为MDSCs的表面标志物。用流式细胞仪检测MDSCs所占的比例,分析MDSCs的数量变化情况及其临床意义。同时对MDSCs在外周血中的表达与临床病理因素相关性进行分析。结果：健康对照组外周血MDSCs占（0.226±0.044）%,胃癌患者术前和术后复诊者外周血MDSCs所占比例分别为（1.903±0.247）%,（1.120±0.240）%。胃癌患者与对照组MDSCs比例差异有统计学意义（t=2.47,P<0.05）,手术前后MDSCs差异有统计学意义（t=2.14,P<0.05）。MDSCs在胃癌患者外周血的表达与性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期以及有无淋巴结转移无关,与肿瘤的分化程度相关。 结论： MDSCs在胃癌患者免疫功能障碍中起重要作用,肿瘤负荷减轻后机体抗肿瘤免疫功能有所恢复。     

骨髓抑制性细胞在肝细胞癌患者外周血中的水平及其临床价值

 目的  筛选肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血骨髓抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)并验证其抑制功能,同时检测外周血MDSCs水平。方法  收集2014年3月10月在复旦大学附属中山医院诊治的HCC患者60例、慢性肝炎患者25例和健康人50例。采用流式细胞仪方法检测HCC患者、慢性肝炎患者和健康人外周血的MDSCs水平,分析MDSCs在HCC患者、慢性肝炎患者和健康人之间的差异,并评价MDSCs在患者临床病理资料中的差异。结果   HCC患者外周血MDSCs水平显著高于慢性肝炎患者和健康人群,HCC患者外周血MDSCs水平与肿瘤包膜、微血管侵犯显著相关(P<0.05)。同时MDSCs具有抑制T细胞增殖和分泌的功能。结论  术前外周血MDSCs水平有助于提示HCC患者的病理情况,为HCC患者的治疗提供重要的辅助依据。     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.     

醌茜素通过MAPK及Akt信号途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡

目的 探讨醌茜素对人胃癌细胞的凋亡作用及其分子机制.方法 MTT法检测醌茜素对3种人胃癌AGS、MKN-28及MKN-45细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术检测醌茜素诱导AGS细胞凋亡能力及细胞内活性氧簇(ROS)水平;蛋白质免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达量变化.结果 醌茜素对3种胃癌细胞均具有明显的杀伤作用,且呈浓度依赖性(P<0.05).经计算其IC50值分别为7.07μmol/L、22.55μmol/L及14.18μmol/L.醌茜素能诱导AGS细胞发生凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.001),并能够促进细胞内活性氧水平升高(P<0.001).当预处理ROS清除剂NAC后,能够明显抑制醌茜素诱导的细胞凋亡(P<0.001).Western blotting结果显示促凋亡蛋白p-p38、p-JNK、Bad、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP-1表达量增加(P<0.05),抗凋亡蛋白p-Akt、p-ERK及Bcl-2蛋白表达量减小(P<0.05).结论 醌茜素通过上调细胞内ROS水平,调控MAPK及Akt信号途径,进而诱导人胃癌AGS细胞发生凋亡.     

Grape seed proanthocyanidin extract induced mitochondria-associated apoptosis in human acute myeloid leukaemia 14.3D10 cells

The important aim in cancer treatment is the selective killing of cancer cells without damaging healthy cells and the most commonly used chemotherapy for eliminating cancer is achieved by activating the mitochondrial apoptotic pathway.1 Therefore, identification of new agents that can selectively kill cancer cells becomes crucial in cancer clinical treatment. Grape seed proanthocyanidin extract (GSPE), a flavonoid in fruits, has been shown in vitro and in vivo, to possess superior antioxidan…     

莱菔硫烷诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的 p38MAPK 途径研究

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡过程中,p38MAPK 途径的作用。方法：流式细胞仪检测 SFN 对 HepG-2 细胞凋亡率的影响,Western Blotting 方法检测细胞内 p38 及 p-p38 蛋白表达。结果：SFN可明显诱导 HepG-2 细胞凋亡,10、20、40 μmol/L SFN 作用 48 h 后,对 HepG-2 细胞的抑制率分别达到 27.42 %、46.53 %、58.92 %;10、20、40 μmol/L 的 SFN 可上调 HepG-2 细胞内 p-p38 蛋白的表达,而对 p38 的表达无明显影响。结论：SFN 可诱导 HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断 p38MAPK 途径有关。