冻干乙型脑炎减毒活疫苗非动物源性稳定剂的配方及其缓冲液的筛选

目的筛选冻干乙型脑炎减毒活疫苗非动物源性稳定剂的配方及其缓冲液。方法分别以0.01 mol/L PBS和Earles液为缓冲液,右旋糖苷-70、蔗糖、山梨醇、乳糖及组氨酸不同组合构成的冻干稳定剂,制备乙型脑炎减毒活疫苗半成品及冻干疫苗成品,观察在不同温度存放不同时间的稳定性,并检测不同配方冻干稳定剂的崩解温度(Tc)。结果 12种配方冻干稳定剂制成的疫苗半成品可在4℃1周内保持滴度稳定性,在25℃3 d内保持滴度无明显变化,3 d后滴度大幅下降;以0.01 mol/L PBS为缓冲液的稳定剂制备的疫苗的Tc值低于Earles液,以Earles液为缓冲液的D2和F2配方制备的冻干疫苗成品,在4℃及37℃放置1周后,滴度均>5.7 logPFU/ml。结论已筛选出以Earles液为缓冲液,含右旋糖苷-70、蔗糖、山梨醇、乳糖及组氨酸的稳定剂配方,用于制备冻干乙型脑炎减毒活疫苗具有良好的保护效果。     

pH值对冻干乙脑活疫苗滴度的影响

冻干乙脑活疫苗的滴度受冻干前原苗满度、保护剂配方、冻干工艺流程及PH值等多种因素的影响，而PH是重要影响因素之一。本文统计该室自1993年至1995年研制的74批疫苗，在保护剂和冻干工艺不变的条件下，分析PH与疫苗滴度的关系，现将结果简报如下：1．不同PH疫苗批分布状况及合格率，在74批疫苗中，除其中17批在研制时有意识地将PH调至7．8～8．0之间，其余57批均按规程要求将PH控制在72～77之间，如表1所示：PH72～7．3的疫苗合格率为75％（26．SL0gTCID50／ml为合格），PH74～7．5时合格率为gi．43％；PH76～7．7和7．8～8．0时…     

乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性分析

目的分析乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)及武汉生物制品研究所有限责任公司《乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠返祖传代试验及小鼠脑内致病力试验SOP》,对随机抽取的28批乙型脑炎减毒活疫苗进行乳鼠返祖传代试验的脑内致病力检测,同时测定发病乳鼠脑组织悬液的病毒滴度,并应用SPSS 13.0软件对28批疫苗病毒滴度、发病乳鼠脑组织上清病毒滴度及发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力检测结果进行Kendall相关性分析。结果 28批乙脑减毒活疫苗病毒滴度为6.0~7.1 Lg PFU/ml,发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力(LD50)均低于3.0 Lg LD50/0.03 ml,发病乳鼠脑组织上清病毒滴度为5.8~7.0 Lg PFU/ml。发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力与疫苗滴度及发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间不存在相关性,而疫苗滴度与发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间低度相关。结论乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定,乳鼠传代返祖试验及其判定标准科学严谨,用于疫苗的质量控制是可行的,进一步表明SA14-14-2株遗传稳定性良好。     

流行性乙型脑炎活疫苗流行病学效果观察

1991年对58645名1～7岁儿童进行了乙脑活疫苗流行病学效果观察,接种乙脑活疫苗组29639人,发生乙脑2例,发病率为6.75/10万;未接种组29006人,发生乙脑46例,发病率158.59/10万,二者差异显著(x~2=39.49,P<0.005),疫苗当年保护率95.74％、保护比1:23.49,高于国内灭活疫苗报告的结果,同时,活疫苗对病情的轻重和转归有良好的影响.而且使用简便安全。     

乙型脑炎减毒活疫苗对不同基因型乙型脑炎病毒的免疫效果

目的研究乙型脑炎减毒活疫苗免疫人体后对不同基因型乙型脑炎病毒的免疫反应。方法将乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2)免疫8~12月龄健康儿童,采集免疫前及免疫后28 d静脉血,分离血清,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)分别检测血清中对不同基因型乙型脑炎病毒毒株的中和抗体,计算血清中和抗体阳转率。结果乙型脑炎减毒活疫苗免疫后对基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型乙型脑炎病毒毒株均产生了显著水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为94%、92%和94%。结论乙型脑炎减毒活疫苗免疫人体后,对不同基因型的乙型脑炎病毒均产生良好的免疫应答。     

应用Vero细胞生产乙型脑炎减毒活疫苗

<正>乙脑减毒活疫苗副反应小,注射针次少,但乙脑减毒括疫苗在生产过程中由于使用地鼠肾细胞,存在动物源性的各种污染和变化因素不易控制。所以我们尝试使用传代细胞制备乙脑活疫苗。方法是将乙脑SA14-14-2毒株接种于长成致密单层的Vero细胞瓶中,加入无血清维持液,35℃培养,于     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗国内外不同野毒株的免疫性

目的研究乙型脑炎减毒活疫苗对国内外不同野毒株的免疫原性。方法用小鼠保护力试验和空斑减少中和试验检测该疫苗对国内外不同野毒株攻击的保护作用及其免疫血清的中和能力。结果小鼠免疫1针后均能抵抗国内11株和国外11株乙脑病毒的攻击,保护率均可达90％以上;人体免疫血清对台湾1株和国外9株病毒均有明显的中和作用。结论SA14-142株乙脑活疫苗具有广谱的免疫原性。     

流行性乙型脑炎活疫苗11年的流行病学效果

目的 观察连续大面积接种流行性乙型脑炎活疫苗的流行病学效果。方法 连续观察１１年接种 乙脑活疫苗的１８２７１５人次的乙脑发病率。结果１１年内均未出现异常反应,总发病率由接种前的２１．８９／１０万下降 到２／１０万左右,保护率为９８．９９％。结论 进一步证明乙脑活疫苗安全有效。     

乙型脑炎减毒活疫苗质量控制中趋势分析的应用

<正>我国自2001年开始逐步实行生物制品批签发,至2006年1月1日将所有预防用疫苗、血液制品及用于血源筛查的体外诊断试剂纳入批签发。生物制品的批签发工作包括对每批制品的资料审核和样品的检验。批签发的实施保证了生物制品的质量[1-2]。     

冻干乙型脑炎活疫苗在不同温度下保存对免疫力的影响

目的 了解冻干乙脑活疫苗在不同温度下保存对滴度及免疫力的影响。方法 冻干乙脑活疫苗 在不同温度下存放不同时间后,进行病毒滴度及免疫力检测。结果 疫苗在４－８％下存放１年半滴度稍有下降 （０．３２ＬｏｇＰＦＵ）,其免疫力仍稳定在高水平（ＩＤ５０＝４．１×１０－５;在 ２５℃下存放 １个月和 ３７℃下存放７ｄ,滴度分别下降 ０．３２和 ０．６５ＬｏｇＰＦＵ,其免疫力仍保持在较高范围内（ＩＤ＝８．８ ×１０－5和 ６．０×１０－５）;在５０℃下存放２４ｈ滴度和免疫 力均显著下降（近１０倍）;存放７２ｈ后基本无免疫力。结论 疫苗不论在４－８、２５、３７℃下存放,其滴度保持在４． ８７ＬｏｇＰＦＵ以上时,仍有免疫力;疫苗滴度不低于５．７ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ时,仍保持高免疫力。     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗对国内外不同野毒株的免疫性

目的　研究乙型脑炎减毒活疫苗对国内外不同野毒株的免疫原性。方法　用小鼠保护力试验和空斑减少中和试验检测该疫苗对国内外不同野毒株攻击的保护作用及其免疫血清的中和能力。结果　小鼠免疫 1针后均能抵抗国内 11株和国外 11株乙脑病毒的攻击 ,保护率均可达 90 %以上 ;人体免疫血清对台湾 1株和国外 9株病毒均有明显的中和作用。结论　SA14 142株乙脑活疫苗具有广谱的免疫原性。     

SA_(14)-14-2株乙型脑炎活疫苗流行病学效果观察

本文报道了1～10岁儿童普种乙脑活苗后,乙脑发病率下降情况。结果表明,乙脑活苗接种能使乙脑发病率下降70％左右(P<0.01)。在普种乙脑活苗后的3年中。发生的1～10岁乙脑病例有95％以上未接种乙脑活苗,并出现了乙脑发病年龄上移的趋势(P<0.05),表明乙脑活苗具有较好的保护效果。     

乙型脑炎减毒活疫苗对中国主要流行基因型毒株的免疫效果

目的评价乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗SA14-14-2免疫人体后对中国流行的两种主要基因型(Ⅰ型和Ⅲ型)的免疫效果。方法收集乙脑减毒活疫苗免疫的健康儿童免疫前及免疫后28 d采集的血清样品,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测血清中对中国流行的两种基因型乙脑病毒的中和抗体,并计算血清中和抗体阳转率。结果疫苗免疫后对国内流行的基因Ⅰ型和Ⅲ型乙脑病毒均产生了较高水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为90. 0%和92. 0%,几何平均滴度(GMT)分别为1︰26. 2和1︰27. 5,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论乙脑减毒活疫苗免疫人体后,对中国流行的2种基因型乙脑病毒均具有较好的免疫效果。     

冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂的筛选

目的筛选冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂,以替代传统的动物源性稳定剂。方法取同一批乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)原液,分别加入A、B、C、D稳定剂(非动物源性),制备成冻干剂型,分别检测其外观、水分、有效抗原含量和效力等,以传统稳定剂作对照,并考察其稳定性。结果冻干前后,疫苗的有效抗原含量及效力与对照无明显差异。加入D稳定剂(不含人血白蛋白和明胶)的冻干乙型脑炎灭活疫苗于37℃放置6个月,效力降低15.1%;于2～8℃放置2年,效力仍高于参考品。其他检测指标均符合要求。结论D稳定剂可替代传统稳定剂,用于制备冻干乙型脑炎灭活疫苗。     

乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂与其直接接触的包装容器的相容性

目的考察乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂与其直接接触的包装容器的相容性,评估疫苗及稀释剂现用包装容器的适宜性。方法分别检测已包装的疫苗、稀释剂在加速条件及规定储存条件下,其包装容器的外观、胶塞对疫苗的吸附度,胶塞中抗氧剂2,6-二叔丁基对甲酚(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)和玻璃瓶中有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移量,玻璃瓶内表面脱片风险等,分析乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂现用包装容器对产品质量的影响程度及包装容器是否被疫苗或稀释剂腐蚀受损。结果 3批乙型脑炎减毒活疫苗在(25±2)℃、相对湿度(RH)(60±5)%放置6个月,(37±2)℃、RH(75±5)%放置4周,2~8℃放置24个月,疫苗及包装材料(容器)外观与0月结果一致,胶塞对疫苗的吸附度低于0.05%,包装容器中抗氧剂BHT及有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移至疫苗中的量远低于安全限值,玻璃瓶内表面被疫苗腐蚀脱片的风险较低。3批稀释剂在(40±2)℃、RH(75±5)%放置12个月,2~30℃放置至42个月,稀释剂及包装材料(容器)外观与0月结果一致,包装容器中抗氧剂BHT及有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移至稀释剂中的量远低于安全限值,玻璃瓶内表面被稀释剂腐蚀脱片的风险较低。结论乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂分别与其包装容器发生相互作用的风险可接受,显示了良好的相容性,表明现用包装容器是适宜的。     

乙型脑炎减毒活疫苗E蛋白基因及氨基酸序列稳定性分析

目的分析2003²011年连续9年出口韩国的23批乙型脑炎减毒活疫苗E蛋白基因及氨基酸序列的稳定性。方法提取出口韩国的23批乙型脑炎减毒活疫苗及其生产该疫苗的主种子和工作种子病毒RNA,RT-PCR法扩增乙型脑炎减毒活疫苗病毒E蛋白基因片段后进行测序;将23批乙型脑炎减毒活疫苗E蛋白基因序列中8个关键位点氨基酸序列与GenBank中登录的乙型脑炎病毒弱毒株SA14-14-2应用AlignX比对软件进行分析;检测23批乙型脑炎减毒活疫苗及生产该疫苗的主种子和工作种子病毒滴度。结果 23批疫苗与生产该疫苗的主种子、工作种子的病毒E蛋白基因序列与GenBank中登录的乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2 E蛋白基因序列完全一致,均由1 500个核苷酸组成,并编码500个氨基酸,同源性100%;23批疫苗E蛋白基因中与弱毒力密切相关的8个关键位点的氨基酸均未发生改变,与生产该疫苗的主种子、工作种子以及GenBank中登录的乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2(D90195)E蛋白相应位点一致性为100%;生产23批疫苗的主种子和工作种子病毒滴度变化幅度较小,为6.722011年连续9年出口韩国的23批乙型脑炎减毒活疫苗E蛋白基因及氨基酸序列的稳定性。方法提取出口韩国的23批乙型脑炎减毒活疫苗及其生产该疫苗的主种子和工作种子病毒RNA,RT-PCR法扩增乙型脑炎减毒活疫苗病毒E蛋白基因片段后进行测序;将23批乙型脑炎减毒活疫苗E蛋白基因序列中8个关键位点氨基酸序列与GenBank中登录的乙型脑炎病毒弱毒株SA14-14-2应用AlignX比对软件进行分析;检测23批乙型脑炎减毒活疫苗及生产该疫苗的主种子和工作种子病毒滴度。结果 23批疫苗与生产该疫苗的主种子、工作种子的病毒E蛋白基因序列与GenBank中登录的乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2 E蛋白基因序列完全一致,均由1 500个核苷酸组成,并编码500个氨基酸,同源性100%;23批疫苗E蛋白基因中与弱毒力密切相关的8个关键位点的氨基酸均未发生改变,与生产该疫苗的主种子、工作种子以及GenBank中登录的乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2(D90195)E蛋白相应位点一致性为100%;生产23批疫苗的主种子和工作种子病毒滴度变化幅度较小,为6.72⁷.17 lgPFU/ml,而23批疫苗的病毒滴度变化幅度也较小,为7.027.17 lgPFU/ml,而23批疫苗的病毒滴度变化幅度也较小,为7.02⁷.61 lgPFU/ml。结论连续9年出口韩国的23批乙型脑炎减毒活疫苗病毒E蛋白基因稳定,一致性良好,该疫苗质量稳定,安全可靠。     

冻干麻疹活疫苗免疫持久性观察

1982～1988年,以效果肯定的液体麻疹疫苗为对照,对冻干麻疹疫苗进行免疫持久性观察。免后1个月,共获得血清376份,其中液体苗组184份,血清阳转率为96.2%,抗体滴度几何均值为67.79;冻干苗组192份,血清阳转率为98.96%,抗体滴度几何均值为63.51。以后每年采血测定抗体,7年后,有完整资料的247名,其中液体苗组128名,抗体累积阴转率为3.91%,抗体滴度几何均值为9.11;冻干苗组119名,抗体累积阴转率为4.20%,抗体滴度几何均值为8.43,两组经统计学处理,无显著性差异。     

乙型脑炎减毒活疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答

目的探讨乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗在小鼠中诱导细胞免疫应答的能力,评价疫苗的免疫原性。方法以乙脑减毒活疫苗免疫BALB/c小鼠,制备小鼠脾淋巴细胞,在体外以重组蛋白NS3-1和NS3-2进行刺激,采用酶联斑点法(ELISPOT)检测分泌细胞因子的效应T细胞的频数。结果乙脑减毒活疫苗免疫小鼠的脾淋巴细胞在体外经重组蛋白NS3-1和NS3-2刺激后,可诱导高频数的分泌IFNγ的CD4+和CD8+T淋巴细胞及低频数的分泌IL-4的淋巴细胞;而乙脑灭活疫苗仅诱导低频数的分泌IFNγ和IL-4的T淋巴细胞。结论乙脑减毒活疫苗可在小鼠中有效地诱导NS3-1和NS3-2抗原特异性T淋巴细胞应答,且应答水平显著高于乙脑灭活疫苗。     

手持拉曼光谱技术在乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料检定中的应用

目的分析采用拉曼光谱技术对乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料进行快速鉴别的可行性。方法使用拉曼光谱仪对乙型脑炎减毒活疫苗不同批次、不同规格生产用关键辅料(蔗糖、乳糖、尿素、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠)进行扫描。对同一辅料不同部位多次采集,建立相应拉曼光谱方法和图谱库,并用以上辅料进行性能确认。选择与乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料化学结构类似的物质(葡萄糖和二水合磷酸二氢钠)进行专属性验证。结果用手持式拉曼光谱仪对乙型脑炎减毒活疫苗生产用关键辅料进行检测,在分析中未发现偏差,采集的样品图谱与标准图谱一致,与《中国药典》四部(2015版)鉴别结果一致。检测与乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料化学结构类似、性状相近的物质则显示失败,表明拉曼光谱仪建立的方法准确,专属性强,仪器性能可靠。结论拉曼光谱鉴别方法符合相关法规要求,可用于乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料的快速鉴别检测。     

冻干麻疹活疫苗有效期的考查

随机抽取12批冻干麻疹活疫苗,保存于4～10℃,48～50个月后其毒力滴度100％合格(2.5 LogTCID_(50))。在保存26个月的疫苗中,随机抽取4批接种22名易感儿,抗体100％阳转。未见异常反应。根据疫苗的稳定性及人体免疫效果可考虑适当延长疫苗效期。