人宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变组织内HPV16 DNA及p53基因变异的研究

目的 本文采用常规PCR技术对40例宫颈鳞癌组织学标本和200例宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ～Ⅱ级的宫颈分泌物标本的HPV16 DNA及P53基因5～6，7～8外显子变异进行了研究，方法 采用常规PCR技术检测HPV16 DNA和p53基因及免疫组织化学方法检测P53基因。结果 在40例宫颈鳞癌标本中HPV16 DNA阳性检出率有20例（50％）；200例CIN标本中有76例（38％）。P53基因在40例宫颈鳞癌标本中有20例出现变异（50％），其中外显子5缺失10例（50％），外显子6缺失1例（5％），外显子7缺失3例（15％），外显子8缺失6例（30％）。200例CIN标本均未检出p53外显子5～6，7～8的变异，宫颈鳞癌HPVl6DNA阳性与p53基因变异的符合率为80％。结论HPVl6I）NA与宫颈鳞癌的发生有密切的相关性，p53基因在宫颈鳞癌组织中确实存在着变异。本研究认为常规PCR技术作为辅助诊断方法是一种快速、简单、适用于临床的方法。     

p16~(INK4A)、P14~(ARF)蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:研究p16INK4A和p14ARF蛋白在各级宫颈病变中的表达特征和临床意义。方法:采用免疫组织化学S-P法对95例宫颈鳞癌(SCC)标本、80例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A和p14ARF蛋白的检测。结果:按正常宫颈-CINⅠ-CINⅡ-CINⅢ-宫颈鳞癌的顺序,p16INK4A及p14ARF的阳性率逐渐升高,具显著性差异(P<0.01),p16INK4A和p14ARF在各级宫颈病变中的表达呈正相关(r=1)。宫颈鳞癌组织中,p16INK4A、p14ARF在临床Ⅱ期中的阳性率(分别为98.3%、96.6%)均高于临床Ⅰ期的阳性率(分别为83.8%、78.4%),差异有显著意义(P1=0.025,P2=0.013);随着病理分级由Ⅰ级→Ⅲ级,p16INK4A、p14ARF的阳性率从低到高,呈正相关(r=1);p16INK4A、p14ARF与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:p16INK4A和p14ARF蛋白的阳性表达与宫颈疾病的严重程度密切相关,在宫颈鳞癌的形成及进展中起重要作用,p16INK4A和p14ARF蛋白基因有可能成为预测宫颈鳞癌发生及病程进展的生物学检测指标。     

HPV16感染的宫颈鳞癌中微小染色体维持蛋白-5和P16~(INK4A)表达的研究

目的 探讨微小染色体维持蛋白-5(MCM5)与P16~(INK4A)在HPV16感染的宫颈鳞癌中表达及意义。方法 采取实时荧光定量PCR及免疫组化,测定存在HPV16感染的正常宫颈、CIN 1、CIN 2/3及宫颈鳞癌组织中MCM5、P16~(INK4A)的mRNA、蛋白表达情况。结果 (1)MCM5 mRNA及蛋白在HPV16感染的不同程度宫颈病变组织中表达趋势一致,随CIN程度的增加表达增高。MCM5 mRNA及蛋白在鳞癌中表达显著较各级别上皮内病变及正常组织高(P0.01)。MCM5蛋白的表达和年龄无关联(P0.05);与病理分级、临床分期相关(P0.01);(2)不同程度宫颈病变中P16~(INK4A)mRNA、蛋白表达趋势一致,随CIN程度增加表达增高。P16~(INK4A) mRNA及蛋白在鳞癌中的表达明显高于正常及CIN 1组织(P0.01);和CIN2/3之间差异无统计学意义(P0.05)。P16~(INK4A)蛋白在宫颈癌中的表达和患者年龄及临床分期没有关联(P0.05);和病理分级有关(P0.01);(3)MCM5和P16~(INK4A)蛋白表达呈正相关(r=0.497,P0.01)。结论 宫颈鳞癌中MCM5和P16~(INK4A)存在高表达,可能与其发生、进展相关。MCM5可较好的反映宫颈的恶性增生,与P16~(INK4A)联合检测对于完善CIN分级及预后的判断具有一定的参考价值。     

宫颈癌及癌前病变中p16INK4A与HPV的关系

高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)持续感染宫颈后,通过其基因产物干扰正常的细胞周期调节,导致细胞的连续增殖与恶性转化.p16INK4A基因产物是细胞周期素依赖性激酶抑制物(CDKI),负性调节细胞周期,由于HPV E7蛋白阻断了p16INK4A的细胞周期调节级联,因此在HR-HPV感染的宫颈癌及癌前病变组织中出现p16INK4A过表达.p16INK4A与HPV联合监测将提高宫颈癌筛查的有效性,有助于宫颈癌的诊断与鉴别诊断.     

EGFR、p16ink4a在宫颈上皮内瘤变中的表达及与高危型HPV负荷量的关系

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)、基因p16ink4a在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达,并进一步探讨其表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)负荷量的关系.方法:采用免疫组化方法,检测8例CIN Ⅰ、12例CIN Ⅱ、41例CIN Ⅲ组织中EGFR、p16ink4a的表达,用等级相关方法分析EGFR、p16ink4a表达水平与CIN等级之间的相关性,并分析高危型HPV负荷量与CIN等级及EGFR、p16ink4s表达的关系.结果:随着宫颈病变程度的加重,p16ink4a表达逐渐增强,二者之间成等级正相关关系(r=0.457,P＜0.01);EGFR表达与CIN等级之间无相关性(r=-0.173,P＞0.05).高危型HPV负荷量与CIN等级及p16ink4a表达水平之间呈等级正相关关系(r=0.288,P＜0.05;r=0.336,P＜0.01),与EGFR表达水平之间无等级相关性(r=0.013,P＞0.05).结论:p16ink4a表达增强及高危型HPV负荷量的增加与宫颈病变的进展有一定关系.     

P16INK4A、ΔNP63与Brn-3a作为宫颈上皮内瘤变标志物的研究

目的:探讨肿瘤抑制基因P16INK4A、凋亡相关基因异构体ΔNP63和细胞转录因子Brn-3a在各级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的TCT标本中的表达及其作为CIN生物标志物的可行性和临床意义。方法:利用SP免疫组化法检测71例TCT标本中P16INK4A和ΔNP63的表达;用RT-PCR法检测各标本中Brn-3a mRNA的转录,分析它们与CIN病理分级的关系。结果:各级病理学诊断中P16INK4A与ΔNP63阳性率分别为炎症(4.76%/4.76%),CINⅠ(89.47%/84.21%),CINⅡ(100%/100%),CINⅢ(100%/100%),各级CIN与炎症的P16INK4A和ΔNP63阳性率之间,差异有极显著性(P<0.001),各级CIN的阳性率之间,差异无统计学意义(P>0.05)。Brn-3a的表达阳性率分别为炎症(0%),CINⅠ(5.26%),CINⅡ(50%),CINⅢ(90.48%),CINⅢ的Brn-3a阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组(P<0.01),炎症与CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P16INK4A、P63与Brn-3a可作为CIN的标志物,辅助细胞学筛查,Brn-3a可能成为间接反映CIN发展的生物学指标。     

HPV感染年龄与高度宫颈上皮内瘤变的关系

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染患者年龄分布与高度宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的关系。方法 2008年7月至2009年4月在中日友好医院同时采用液基薄层细胞学（LCT）和HPV检测行宫颈癌筛查的妇女948例,对LCT≥ASC-US和/或HR-HPV阳性的367例患者进行阴道镜下宫颈活检。结果 〈50岁年龄组妇女的HR-HPV感染率（34.27%）与≥50岁年龄组妇女（18.98%）比较,差异具有统计学意义（P〈0.01）;〈30岁、30～49岁和≥50岁3个年龄组HR-HPV阳性者中,≥CIN2患者的例数分别为18例（39.13%）、81例（43.78%）和17例（32.69%）,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论各个年龄段感染HR-HPV的妇女发生≥CIN2的机会无明显差异,均应加强随访。     

两种筛查宫颈肿瘤方法的比较:ELISA检测宫颈脱落细胞p16~(INK4a)蛋白与FQ-PCR检测8种共用型HPV DNA

目的:探讨用ELISA方法检测p16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达,筛查宫颈癌。方法:选取宫颈组织活检标本1523例,活检前用棉拭子从标本中获取宫颈脱落细胞。用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测宫颈活检组织中8种亚型HR-HPV DNA,用ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a蛋白的表达。结果:HR-HPV DNA阳性率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌中,分别为91.9%,92.8%,94.4%,91.7%,其阳性率与宫颈病变严重程度无显著相关(P=0.893);非肿瘤性病变人群HR-HPV DNA阳性率16.3%;FQ-PCR方法的特异性83.7%。ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a表达用于筛查宫颈癌及CIN的总体敏感性和特异性分别为87.4%和92.4%,且宫颈病变级别越高,p16INK4a表达越强(r=0.773,P0.001)。结论:FQ-PCR检测HR-HPV DNA用于筛查宫颈癌及CIN,敏感度高但特异性较低;ELISA检测p16INK4a蛋白表达具有较高的灵敏度和特异性,有望成为宫颈癌新的筛查方法在临床推广使用。     

液基细胞学联合P16INK4a和cyclin E用于诊断宫颈上皮内瘤变的意义

目的:探讨液基细胞学(liquid-based cytology test,LCT)联合p16INK4A和cyclin E用于诊断宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的价值。方法:225例宫颈病变患者,其中宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas,SCC)56例,高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)41例,低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)76例,不典型鳞状细胞(atypical squamous cell lesions,ASC)32例,正常范围(within normal limits,WNL)20例。采用免疫组化法检测p16INK4A和cyclin E的表达。比较单纯LCT及LCT联合p16INK4A和cyclin E的病理诊断符合率。结果:单纯LCT病理诊断符合率为LSIL 52.08%,HSIL 77.14%,SCC 98.21%;LCT联合p16INK4A和cyclin E的病理诊断符合率为LSIL 87.50%,HSIL97.14%,SCC 100%,差异有统计学意义(P(0.05)。32例ASC的LCT联合p16INK4A和cyclin E的阳性病理诊断符合率为85.71%,与单纯LCT的差异有统计学意义(P(0.05)。结论:LCT联合P16INK4a和cyclin E可用于筛查CIN,尤其对ASC的确诊,较单纯LCT有更高的病理诊断符合率,可以提高CIN的诊断准确性。     

宫颈上皮内瘤变及鳞癌诊治过程中病理分级及治疗探讨

目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状细胞癌(鳞癌)活检、锥切或全子宫切除术后病理分级及转化.方法对2003年1月至2006年9月CIN及鳞癌病例,行不同诊治手段,对比分析病理分级及其转化.结果经阴道镜活检,病理证实CIN 217例,平均年龄38.9岁;鳞癌62例,平均年龄53.3岁.其中继续锥切诊治63例,直接子宫全切54例.转阴率、分级转低率、分级不变率和分级转高率分别为14.5%、19.7%、59.0%和6.8%.结论本组活检诊断与锥切术后病理分级符合率仅59.0%,说明CIN为多点病变,分级变异性较大,活检甚至锥切不能代表真实病变.而且子宫全切术后转阴率较低,且有6.8%的分级转高率.应注意加大锥切的范围,增加其诊疗效果.     

CARM1、p16INK4a在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测子宫颈鳞状细胞癌(CSCC)、宫颈上皮内病变及正常宫颈组织中组蛋白精氨酸甲基转移酶1(CARM1)、p16INK4a的表达,探讨两者在子宫颈鳞癌发生发展中的作用.方法 运用免疫组化技术检测CSCC、宫颈上皮内病变及正常宫颈组织中CARM1、p16INK4a表达,分析二者表达与子宫颈鳞状细胞癌临床病理特征及生存...     

子宫颈上皮癌变过程中Ki67表达和HPV感染的研究

目的 研究Ki67表达和HPV感染在宫颈癌发生发展过程中的意义。方法 分别从正常宫颈(10例)、各级CIN(CIN Ⅰ19例,CIN Ⅱ9例,CIN Ⅲ16例)和宫颈鳞癌(8例)的石蜡标本提取基因组DNA,选取HPV L1区通用引物进行PCR扩增,测序,与已知HPV序列进行同源性分析。Ki67免疫组化染色。结果 正常宫颈组HPV DNA均为阴性。CIN Ⅰ组5/19例为高危型HPV(16/18型),8/19例为中危型(35型等),其余为低危型。CINⅡ和Ⅲ组高危和中危型HPV各占一半。宫颈癌组均为高危型,绝大部分为HPV16。Ki67指数随CIN级别的升高(CINⅠ:21.4±1.1,CINⅡ:31.8±3.5 CINⅢ:61.3±2.8)而明显增加(P<0.01)。结论Ki67指数反映出在宫颈上皮细胞癌变过程中细胞增殖活性的改变。HPV型别与CIN级别及转归密切相关。Ki67与HPV检查联合应用对评价CIN细胞增殖活性及其转归有重要的作用,对伴有HPV16/18 感染的CIN应密切追踪和积极处理。     

肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠早孕子宫内膜中的表达

目的:初步探讨p16INK4A在胚胎着床过程中的作用。方法:采用实时FQ-PCR和免疫组织化学技术分别检测未孕(d0)及孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜p16INK4AmRNA及其蛋白的表达。结果:实时FQ-PCR显示妊娠子宫内膜组织p16INK4A的mRNA表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,到孕d5达到最高。免疫组化显示p16INK4A蛋白在子宫内膜的表达及规律与实时FQ-PCR的结果一致。结论:小鼠胚胎着床过程中p16INK4A诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎着床的重要机制之一。     

p16INK4a Expression does not predict the outcome of cervical intraepithelial neoplasia grade 2

Spontaneous regression of cervical intraepithelial neoplasia grade 2 (CIN2) lesions has been recognized since 1955, but predictors of this are poorly understood. Among the predictive markers studied, p16(INK4a) has been suggested to be of some value in monitoring the diagnosis of CIN2. In this clinical trial, 90 Brazilian women, diagnosed to CIN2 and high-risk human papillomavirus infection, were randomized into two groups of equal size: 45 women whose lesions were excised and 45 women subjected to prospective follow-up at 3-month intervals at least for 1 year (mean 6.8 months). p16(INK4a) expression was analyzed in paraffin-embedded sections using immunohistochemical staining. Among the 45 women in the follow-up group, 42% experienced spontaneous regression, 11% showed persistence, 22% progressed to CIN3, and 20% had partial regression to CIN1 or ASCUS (atypical squamous cell undetermined signifiance). p16(INK4a) expression was detected in 68.9% of the patients. In univariate survival (Cox) analysis, no significant difference in regression was obtained between p16(INK4a)-negative and -positive CIN2 lesions (adjusted HR = 1.1; 95% CI 0.6-2.0). In conclusion, p16(INK4a) expression could be useful in the diagnosis of CIN2. However, it failed to predict the outcome of CIN2. Because of its high spontaneous regression rate, follow-up could be considered as a management option of CIN2 in young and compliant women.     

宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变组织中人乳头瘤病毒16型及18型的表达

目的从分子水平探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织中人乳头瘤病毒(HPV)16型和18型的表达及临床意义。方法2001年1月至2005年1月在中国医科大学附属第一医院采用原位杂交技术分别检测CSCC60例、CIN60例和20例正常宫颈组织中HPV16型和18型DNA的表达。结果在上述各组织中HPV16型表达阳性率分别为73.3%(44/60)、35.0%(21/60)和10.0%(2/20),均明显高于正常对照组(P<0.01和P<0.05);而HPV18型在各组间表达的阳性率比较差异均无显著性意义(P>0.05)。HPV16型表达与CIN的发展有关,在CINⅠ～Ⅱ和CINⅢ的表达分别为23.7%和54.6%,且差异有显著性意义(P<0.05),而HPV18型表达情况与CIN的发展无关(P>0.05)。HPV16和18型的表达与CSCC分化程度及有无淋巴结转移无关。结论宫颈组织中HPV16型的过度表达与CSCC及CIN的发展密切相关,为阐明宫颈癌病因和发病机制以及预测CIN进一步发展的可能性提供了理论依据。     

宫颈鳞癌和上皮内瘤变组织中TRF1、TRF2及HPV16、HPV18的检测及其意义

目的研究端粒结合蛋白TRF1、TRF2在宫颈鳞癌发生发展中的作用并分析HPV16、HPV18感染与TRF1、TRF2蛋白表达的关系。方法随机选择南华大学附属第一医院病理科2005年9月至2006年10月期间的组织石蜡块标本共86例,采用原位杂交方法检测HPV16、HPV18在15例正常宫颈上皮、36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和35例宫颈鳞癌组织中的感染情况;采用免疫组化方法检测所有组织标本中TRF1、TRF2蛋白的表达。结果(1)HPV16、HPV18阳性感染率CIN组[63.9%(23/36)]和宫颈鳞癌组[97.1%(34/35)]显著高于正常组[20.0%(3/15)](χ2=30.639,P<0.01)。(2)TRF1阳性表达率宫颈鳞癌组[40.0%(14/35)]显著低于CIN组[63.9%(23/36)]和正常组[86.7%(13/15)](χ2=10.237,P<0.01);CINⅢ组[42.9%(6/14)]显著低于CINⅠ组[90.0(9/10)](χ2=5.531,P<0.01)。TRF2阳性表达率宫颈鳞癌组[80.0%(28/35)]显著高于CIN组[52.8%(19/36)]和正常组[...