微小RNA-7调控EGFR抑制上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)调控人上皮性卵巢癌(EOC)细胞上皮间质转化,抑制肿瘤侵袭转移的作用及机制。方法:选取EOC细胞株HO-8910pm、ES-2,用li-pofectmin 2000体外瞬时转染miR-7质粒,分别通过实时PCR和Western blot检测转染前后细胞株miR-7及EGFR蛋白表达情况;Western blot法检测转染前后细胞株上皮标记β-catenin、间质标记Vimentin及EGFR下游信号通路AKT、ERK蛋白磷酸化水平;实时PCR检测转染前后EMT相关转录因子Snail、Slug、ZEB1、ZEB2的表达。Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测转染前后细胞体外侵袭能力。结果:转染miR-7质粒后,HO-8910pm细胞miR-7的表达水平提高了(8.015±0.181)倍,ES-2细胞miR-7表达提高了(28.03±1.253)倍;EGFR蛋白表达均显著下降;转染后细胞的侵袭能力显著下降,HO-8910pm与ES-2的侵袭抑制率分别为62.33%、71.32%;转染后两种细胞的β-catenin蛋白表达均升高,而Vimentin蛋白表达降低;转录因子Snail、Slug的表达较未转染前显著降低(P<0.05),转染前后ZEB1、ZEB2无显著差异;转染后细胞p-AKT,p-ERK1/2表达均下降。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制其下游AKT和ERK1/2信号通路的活化以及逆转EMT,从而抑制EOC细胞的侵袭转移能力。     

卵巢上皮性癌患者外周血中癌细胞的检测

目的 检测卵巢上皮性癌患者外周血干细胞（ＰＢＳＣ）中有无癌细胞污染及原发晚期卵巢上皮性细胞患者外周循环血中有无癌细胞。方法 应用卵白素－生物素酶－复合物（ＡＢＣ）法,检测２例患者ＰＢＳＣ及８例患者外周血。为了确定ＡＢＣ法检测血中癌细胞的灵敏度,分别用卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３,３ＡＯ以及从浆性乳头状腺癌,未分化腺癌虱腹水中得到的原代癌细胞,制成癌细胞与单核细胞的不同浓度模型,应用单克隆抗体ＣＯＣ１８３     

卵巢上皮性癌的临床内分泌研究

近年来，众多学者对卵巢上皮性癌的临床内分泌进行了广泛深入的研究，认为卵巢上皮性癌的发生、发展和预后与患者体内多种激素水平及其受体含量有关。内分泌激素如孕激素、它莫昔芬和ＧｎＲＨ增效物等治疗的效果，除与肿瘤的分期有关外，还与肿瘤细胞受体含量有关。昭何提供激素治疗的效果，是一个值得进一步探讨的问题。     

卵巢上皮性癌复发的处理

目的 探讨影响卵巢上皮性癌复发的因素及处理方法。方法 对１８９例卵巢癌进行回顾性分析,全部手术切除标本均经病理检查证实。结果 １８９例中,复发３１例。其中１９例为我院施行肿瘤细胞减灭术,残留癌灶直径≤２ｃｍ;１２例为外院施行肿瘤细胞减灭术,达到临床愈后因复发转入我院。复发的３１例初次手术中,Ⅰ、Ⅱ期４例（１２．９％）,Ⅲ、Ⅳ期２７例（８７．１％）。其中１０例手术切净者,平均复发时间为１７．２个月;     

卵巢上皮性癌98例分析

卵巢上皮性癌９８例分析李路丽，袁秀玲，崔保霞（山东省滨州地区人民医院）卵巢恶性肿瘤特别是卵巢上皮性癌由于缺乏确切的早期诊断方法及肿瘤具有扩散早的特点，多数患者就诊时已属晚期，给治疗带来一定的困难。迄今，卵巢癌的５年生存率仍为３０％～３５％［１］。我们...     

卵巢交界性上皮性肿瘤的临床特点及治疗

本文综述国外近20年来1000余例卵巢交界性上皮性肿瘤的临床特点及治疗,包括发生率、发病年龄、临床症状、组织类型、双侧发生率、临床分期、转移与复发、并发其他恶性肿瘤、死亡原因及生存率等。肿瘤局限于一侧卵巢的年轻患者宜行保守性手术,以保留生育及内分泌功能,术后无需辅以化疗或放疗。Ⅰ期以上者均行根治术,术后辅助治疗的作用尚待今后进行前瞻性研究。     

BRMS1基因抑制卵巢上皮性癌细胞体内外转移的实验研究

目的 研究BRMS1基因转染卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞后对其体内外转移的抑制作用。方法 应用脂质体介导法将BRMS1基因转染人卵巢癌细胞株A2780细胞内（转染组）,设未进行任何转染的A2780细胞为空白对照组,转染空载体pcDNA3质粒者为阴性对照组。体外观察转染前后3组细胞增殖、凋亡、细胞间缝隙通讯连接、黏附转移情况及超微结构的变化。建立裸鼠人卵巢癌移植瘤模型,观察3组裸鼠BRMS1基因抑制肿瘤体内转移的作用。结果 BRMS1基因成功转染入A2780细胞中。BRMS1基因转染后,空白对照组细胞生长速度与阴性对照组和转染组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;空白对照组、阴性对照组及转染组细胞的每孔克隆数分别为（42±7）、（39±4）及（40±4）个,3组间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;3组细胞S期和G：／M期、Gn／G,期比例比较,差异也无统计学意义（P〉0．05）。转染组细胞问缝隙通讯连接功能增强。细胞侵袭实验显示,转染组转入底层膜的细胞数[（112±23）个]明显低于空白对照组和阴性对照组[分别为（306±49）、（322±91）个;P〈0．01]。BRMS1基因转染后,裸鼠体内转移灶,转染组为（23±7）个,分别与空白对照组和阴性对照组[分别为（96±12）、（112±20）个]比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 作为转移抑制基因,BRMS1基因可抑制卵巢癌细胞的转移。     

卵巢交界性上皮性肿瘤30例临床与病理分析

回顾性分析我院及福建省安海、永春县等医院１９８３年６月－１９９３年６月期间经手术及病理证实的３０例卵巢交界性上皮性肿瘤的临床及病理特点。     

顺铂诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的观察

目的了解化疗药物诱导细胞凋亡的规律,阐明细胞凋亡在肿瘤化疗中的作用和地位。方法顺铂体外作用于卵巢癌细胞系ＣＯＣ１,通过组织细胞化学染色、荧光染色结合电镜、ＤＮＡ电泳和流式细胞术等方法,观察ＣＯＣ１细胞凋亡的发生规律。结果经顺铂处理的ＣＯＣ１细胞出现典型的细胞凋亡形态学特征,在顺铂处理的３０小时内,凋亡持续存在并逐渐增强。凋亡率在一定的剂量范围内呈依赖性增强。在顺铂处理的１２小时时间点上,虽然坏死率仅为１２．４％,但凋亡率已达３０．８％。结论化疗药物诱导凋亡是化疗的重要治疗机理     

白细胞介素-2基因转导对卵巢癌细胞SKOV3形态及增殖的影响

OBJECTIVE: To study the effect of interleukin-2 (IL-2) gene transfer on the proliferation and morphology of ovarian cancer cell line SKOV3. METHOD: IL-2 gene was introduced into ovarian cancer cell line SKOV3. The morphologic changes, mitosis, proliferation curve, 3H-uptaking and cell cycle were studied. RESULTS: IL-2 cDNA, 490 bp, was transduced. IL-2 gene expression was detected. IL-2 activity was 30-318 U/10(6) cells/24hr. IL-2 gene modified cell is squamas like with smaller nucleus/cytoplasm ratio, larger cell area and more homogeneous. The ultrastructural study showed that the cytoplasma of IL-2 gene modified cells is markedly vacuolized and the chromatin is condensed. There was less mitosis found in SKOV3/IL-2 cells. SKOV3/IL-2 cell proliferate more slowly, the doubling time prolonged from 38.40 hr to 65.36 hr, 3H-uptaking decreased 52.3% of the parent cell. The cell cycle study showed that SKOV3/IL-2 cell was blocked to phase G1/G0. CONCLUSIONS: The retrovirous vector can transduce Il-2 gene into ovarian cancer cell line SKOV3 effectly. IL-2 gene transfer can induce morphologic changes of SKOV3 cells, which may indicate the biologic behavior changes of the targets. IL-2 gene transfer can induce the proliferation inhibition of SKOV3 cells.     

艾迪注射液及联合应用化疗药物抑制人卵巢癌细胞株A2780增殖的研究

目的 :探讨艾迪注射液对人卵巢癌细胞株A2 780增殖的影响及与多种化疗药物的协同作用。方法 :采用MTT法测定艾迪注射液与 4种化疗药物单独及联用对A2 780细胞的增殖抑制作用 ,运用流式细胞仪测定艾迪注射液对A2 780细胞周期的影响及凋亡率。结果 :艾迪注射液可抑制A2 780细胞增殖 ,其抑制作用呈剂量和时间依赖性 ,并可诱导细胞凋亡。低浓度的艾迪注射液与化疗药物联用 ,可产生较强的抑制细胞增殖的作用。结论 :艾迪注射液具有直接抗肿瘤作用 ,对化疗药物协同作用的机制可能与其诱导细胞凋亡有关。     

Survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC_1/DDP凋亡的实验研究

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行细胞核DNA梯形电泳 ,检测caspase 3活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 :经survivin ASONs作用后COC1/DDP细胞中survivin等抗凋亡基因的表达下降 ,细胞核DNA电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ,caspase 3活性增加且呈时间依赖性 ,细胞凋亡率达33.18% ,细胞周期G2 /M及S期明显下降而多阻滞于G0 /G1期 ,与对照组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论 :survivin ASONs反义寡核苷酸能诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞凋亡 ,且效果显著     

细胞周期同步化逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的研究

目的:探讨卵巢癌对紫杉醇耐药的产生和细胞周期的相关性以及细胞周期同步化方法逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的可能性。方法:化疗敏感的卵巢癌SKOV3,A2780细胞株和用脱氧胸腺嘧啶核苷(细胞周期S期同步化药物)处理相应的耐药细胞后更换普通培养基,8～10h后加入紫杉醇(100nmol/L),10～12h后撤出紫杉醇,设立不经同步化处理的细胞作对照,收集不同时间点细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:SK-OV3,A2780敏感和耐药组细胞经细胞周期同步化处理后加入紫杉醇其凋亡率敏感和耐药细胞均较对照组增高,以48h检测结果差异最显著。结论:细胞周期同步化方法有可能成为加强紫杉醇的作用效果以及逆转耐药性的有效方法。     

肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 :探讨肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 :脂质体介导kai1cDNA转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,免疫细胞化学S P法检测转染前后细胞内kai1蛋白的表达。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、平板克隆形成实验观察kai1基因对细胞增殖能力的影响 ,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 :转染kai1cDNA后HO 891 0PM细胞内可检测到kai1蛋白的稳定表达 ,细胞增殖能力较前无明显变化 ,侵袭能力明显下降。结论 :外源性肿瘤转移抑制基因kai1可通过脂质体有效转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,降低其侵袭能力 ,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因     

整合素连接激酶反义寡核苷酸对卵巢上皮性癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨整合素连接激酶(ILK)反义寡核苷酸(ASODN)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长的抑制作用.方法 将ILK-ASODN转染入卵巢癌细胞株H08910细胞,阻断其表达ILK.实验分为6组,分别为空白对照组(A组)、脂质体对照组(B组)、ILK-正义寡核苷酸(SODN)100 nmol/L组(C组)和ILK-ASODN 60 nmol/L组(D组)、ILK-ASODN 80 nmol/L组(E组)、ILK-ASODN 100 nmol/L组(F组).采用RT-PCR技术和蛋白印迹法检测各组H08910细胞ILK mRNA和蛋白表达量的变化;水溶性四氮唑1(WST-1)法及流式细胞术评价H08910细胞转染ILK-ASODN后对该细胞体外增殖的抑制作用及对该细胞周期和凋亡的影响.结果 ILK-ASODN转染后H08910细胞ILK mRNA表达量明显下降,D、E、F 3个实验组分别为0.307±0.011、0.198±0.008、0,与A、B两对照组(分别为0.343±0.006、0.342±0.009)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).ILK-ASODN转染后H08910细胞ILK蛋白表达量也明显下降,D、E、F 3个实验组分别为26.3±0.8、20.6±0.4、0;细胞生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显增高,3个实验组分别为7.31%、8.84%、11.27%;G0/G1期细胞增多,3个实验组分别为49.25%、56.28%、67.61%.以上指标分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 ILK-ASODN转染卵巢癌H08910细胞后可以明显抑制其生长.     

单己糖神经酰胺与卵巢癌顺铂耐药性关系的研究

目的　研究单己糖神经酰胺 (ceramidemonohexoside ,CMH)与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1 DDP细胞的顺铂耐药性的关系 ,及其在COC1 DDP细胞凋亡中的作用。方法　分别提取、纯化COC1 DDP细胞 (用浓度为 1 2 5、5μmol L的米非司酮处理前、后 )和卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1细胞的中性鞘糖脂 ,用高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析细胞中CMH的相对含量。将COC1 DDP细胞分为 :顺铂 ( 0 1、0 2 5、0 5、1 2 5、2 5μg ml)组、米非司酮 ( 1 2 5、2 5、5、10、2 0 μmol L)组、顺铂 ( 0 1～2 5μg ml) +米非司酮 ( 1 2 5、5μmol L)组 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测各组细胞的生存率、琼脂糖凝胶电泳检测各组细胞DNA的变化、透射电子显微镜观察各组细胞的形态变化。结果　COC1 DDP细胞中CMH的相对含量为 ( 3 7 1± 3 3 ) % ,明显高于COC1细胞的 ( 14 1± 1 4) % (P <0 0 0 1) ;COC1 DDP细胞分别经 1 2 5、5μmol L米非司酮处理后 ,CMH的相对含量下降到 ( 2 6 6± 2 6) %和 ( 17 5±0 7) % ,分别与米非司酮处理前比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5,0 0 0 1)。MTT法检测显示 ,米非司酮浓度在 5μmol L以下时 ,对COC1 DDP细胞不产生明显的抑制作用 (P >0 0 5) ;顺铂 +米非司酮组COC1 DDP细胞抑制率较     

卵泡刺激素介导卵巢上皮性癌细胞增殖的初步研究

目的 探讨卵泡刺激素(FSH)促进卵巢上皮性癌细胞增殖的作用途径,从分子水平上了解卵巢癌的发病机理。方法 卵巢上皮癌细胞系OVCAR3转染FSH受体表达质粒,获得FSH刺激敏感的细胞系OVCAR3-FSHR。以FSH刺激细胞,或与蛋白激酶c(PKC)的激活剂十四烷酰佛波醇乙酯(TPA)和抑制剂他莫西芬(TAM)共同刺激细胞,以四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链反应技术检测细胞PKC各亚型的mRNA表达;以蛋白印迹法观察PKCα及磷酸化PKCα的表达水平。结果 FSH可刺激OVCAR3-FSHR细胞增殖1．9倍。FSH刺激后,PKCα的表达水平和活性分别增高1．5倍和1．9倍。TPA、TAM均能抑制FSH刺激OVCAR3-FSHR细胞增殖的60％及47％,TPA或TAM与FSH共同刺激PKCα表达较FSH单纯刺激者明显降低。结论 FSH通过PKC的途径,可刺激卵巢上皮癌细胞增殖,在卵巢上皮癌的发展中起一定的作用。     

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。