辐射对Jurkat细胞P21蛋白及ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响

目的 探讨电离辐射对Jurkat细胞P21蛋白和ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响.方法 采用流式细胞术(FCM),检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞中P21蛋白表达的变化.采用实时定量PCR技术,分别检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后4和24 hd'鼠胸腺及脾细胞中p21基因表达的变化.结果 不同剂量X射线照射后12和24 h,Jurkat细胞中P21蛋白表达在0.5～4.0 Gy范围内均随剂量的增大而升高(t=-24.23～-3.96,P<0.05),6 Gy时均出现表达下降(t=-11.19、-14.50,P<0.05);与假照射组相比,在0～6.0 Gy照射后4和24 h,小鼠胸腺及脾细胞中p21基因的相对表达量均随剂量增大逐渐增加(t=-29.96～8.80,P<0.05);并于6.0 Gy时达最高(t=-11.84～-3.42,P<0.05),仅胸腺细胞1 Gy照射后4 h除外(t=-3.42,P>0.05).结论 x射线能诱导P21蛋白及基因表达增加,并在一定剂量范围内存在良好的剂量-效应关系.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ionizing radiation on the expression of P21 protein in Jurkat cell line and p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice.Methods Flow cytometry (FCM)was used to analyze the expression of P21 protein in Jurkat cells at 12 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Real-time PCR was used to detect the expression of p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice at4 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Multi-staining was used to analyze the micronucleus rates of Rct in bone marrow.Results The expressions of P21 protein were increased in a dose-dependent manner during 0.5-4.0 Gy(t=-24.23--3.96,P<0.05),but decreased at 6.0 Gy at 12 and 24 h post-irradiation(t=-11.19,-14.50,P<0.05).The expressions of p2 1 gene in both thymocytes and splenocytes of mice were increased in dose-dependent manner in the range of 0-6.0 Gy(including 6.0 Gy)(t=-29.96-8.80,P<0.05),and reached to the peak at 6.0 Gy at 4 and 24 h post-irradiation(t=-11.84--3.42,P<0.05),except thymocytes at 4 h and 1.0 Gy post-irradiation(t=-3.42,P>0.05).Conclusions The expressions of P21 protein and p21 gene could be increased by X-ray irradiation.which shows good dosedependent manners in certain range of dose.     

电离辐射对胸腺细胞及脾细胞p16、CyclinD1、CDK4蛋白表达的影响

目的　研究电离辐射对小鼠胸腺细胞及脾细胞中p16、CyclinD1及CDK4蛋白表达的影响。方法　采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果　时效实验证实 ,2 0GyX射线全身照射后 8,2 4及 48h ,胸腺细胞p16蛋白表达显著增高 (分别P <0 0 5、P <0 0 1及P <0 0 5) ;照射后 2 4h ,脾细胞p16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5)。然而 ,照射后 8～ 2 4h ,胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;照射后 8～ 72h ,脾细胞CDK4蛋白表达显著降低(P <0 0 5～P <0 0 1)。量效实验证实 ,1 0 ,2 0及 4 0Gy全身照射后 2 4h ,胸腺细胞及脾细胞p16蛋白表达均显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。然而 ,2 0Gy照射后胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低(P <0 0 5) ;0 5～ 6 0Gy照射后脾细胞CDK4蛋白表达显著降低 (P <0 0 5～P <0 0 1)。研究还发现 ,胸腺细胞及脾细胞中CyclinD1蛋白表达于照射后均明显降低。结论　电离辐射可诱导胸腺细胞及脾细胞中p16蛋白表达增高。p16 CyclinD1 CDK4通路可能在X射线诱导胸腺细胞G1期阻滞中起重要作用     

电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响

目的阐明电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响。方法采用免疫细胞化学方法和流式细胞术检测X射线照射对P21蛋白表达的时程和量效变化的影响。结果时程实验结果显示，离体培养的EL-4细胞经4．0Gy X射线照射后，P21蛋白表达在2．72h（免疫细胞化学方法检测）和8—72h（流式细胞术检测）明显增高（分别为P〈0．01、P〈0．001）。量效实验结果显示，X射线照射后24h，P21蛋白表达在0．5—6．0Gy（免疫细胞化学方法检测）和1．0～4．0Gy（流式细胞术检测）明显增高（分别为P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）。结论X射线能诱导P21蛋白表达增高，在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

电离辐射对胸腺细胞p16/CyclinD/CDK4基因转录和蛋白表达的影响

电离辐射可诱导细胞发生G1期阻滞，其意义在于使受损伤的DNA得以修复，维持细胞基因组稳定性。目前研究发现主要有两条负向调控通路：p53-p21／pRb通路和p16-CyclinD／CDK4-pRb通路在G1→S期转换中起重要作用。以往的实验结果证实p53-p21通路在中等剂量电离辐射诱导的G1期阻滞中起重要作用。然而，电离辐射对体内细胞     

小鼠胸腺和牌细胞对淋巴因子反应的辐射剂量效应关系

作者研究了Ｃ５７ＢＬ／６小鼠经０．１～８．０ＧｙＸ射线全身照射后淋巴因子效应细胞反应性的变化．结果发现，照后２４小时胸腺细胞对ＩＬ－１反应的剂量效应曲线由两个斜率不同的成分组成，其Ｄ３７，分别为１．６５和４．０９Ｇｙ；照后１２和２４小时脾细胞对ＩＬ－２反应的Ｄ３７分别为５．５８和３．４６Ｇｙ；ＣＴＬＬ－２细胞在为０．５～１０Ｇｙ剂量范围内，对ＩＬ－２反应性呈剂量依赖性降低，Ｄ３７为８．７７Ｇｙ。提示ＩＬ－２效应细胞的辐射抗性高于ＩＬ－１效应细胞．     

辐射及细胞因子对p21基因表达的调控作用

p21基因是细胞周期的负向调控因子，在一定的因素诱导下，p21基因可有效地引起细胞周期G1期和G2期阻滞，从而在维持基因组稳定性中起重要作用。辐射及TGFβ1、TNFα、PTEN、IGF等因子均可诱导p21基因表达增高，而E1A、c-jun、Tbx2、PLD1和PLD2等因子则抑制p21基因表达。     

电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响

目的　研究电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响。方法　采用Northernblot检测p16mRNA水平的变化 ;采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测p16蛋白表达的变化。结果　研究证实 ,2 0Gy照射后 2～ 2 4h ,胸腺细胞p16mRNA水平明显增高 ,8～ 4 8hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;照射后 2～ 8h脾细胞p16mRNA水平明显增高 ,2 4hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5 )。研究还证实 ,0 5～ 6 0Gy照射后 ,胸腺细胞p16mRNA水平呈剂量依赖性增高 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;脾细胞p16mRNA水平亦增高 ,但增幅远低于胸腺细胞 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。结论　电离辐射可诱导p16基因转录及蛋白表达增高 ,其增高幅度表现出一定的细胞异质性。     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法：实验用X射线照射昆明雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75mGy和1．5Gy。D1和D2间隔时间分别是3、6、12、24和60h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔3、6和12h ,D1 D2组胸腺细胞凋亡百发数明显低于D2组（P＜0．05）,G0／G1和G2＋M期细胞百分数也不同程度地低于D2组,而S期是分数却明显高于D2组（P＜0．0．5或P＜0．01）。结论上述结果指出,D1在75mGy,吸收剂量率为12．5mGy／min,D2在1．5Gy,吸收剂量率为0．287Gy／min;D1和D2间隔3－12h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

低剂量辐射对丝裂霉素C损伤小鼠胸腺和脾细胞的影响

目前低剂量辐射兴奋效应的发生和存在机制的研究已取得了一定的成果。低剂量辐射与低浓度化学因子之间的交叉适应性反应有助于阐明低剂量辐射兴奋效应的机制，低刺量辐射与低浓度化学因子之间存在明显的遗传学交叉适应性反应已有报道。但是，从免疫学角度探讨低剂量电离辐射诱导丝裂毒素C（MMC）损伤的适应性反应未见报道。因此，笔者利用小鼠胸腺细胞自发增殖和脾淋巴细胞转化，观察低剂量γ射线能否诱导抗MMC损伤的免疫学适应性反应。     

辐射及细胞因子对p21基因表达的调控作用

p21基因是细胞周期的负向调控因子,在一定的因素诱导下,p21基因可有效地引起细胞周期G1期和G2期阻滞,从而在维持基因组稳定性中起重要作用。辐射及TGFβ1、TNFα、PTEN、IGF等因子均可诱导p21基因表达增高,而E1A、c-jun、Tbx2、PLD1和PLD2等因子则抑制p21基因表达。     

辐射对小鼠精子发生过程中印记基因表达的影响

目的筛选在小鼠精子发生过程中受电离辐射影响表达发生改变的印记基因。方法选择雄性BALB／c小鼠8只，分为实验组和对照组X射线全身照射0．1Gy／d，连续13d，建立辐射干扰小鼠精子发生模型。提取实验组和对照组睾丸RNA，采用上海生物芯片中心小鼠寡核苷酸基因表达谱芯片筛选表达发生改变的印记基因，对感兴趣的基因经半定量RT—PCR验证。结果12个表达发生改变的印记基因，6个上调，6个下调，其中Igf2、Peg3基因Ratio值分别为3．859和0．397，经半定量RT—PCR验证与芯片结果相符。结论X射线全身照射可导致小鼠睾丸部分印记基因表达发生改变。     

电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期的影响

目的 研究电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期的影响为肿瘤放疗及化疗提供科学依据。方法 处于细胞周期各时相的细胞百分数采用流式细胞术进行检测。结果 研究表明：电离辐射作用后,ＨｅｌａＳ３和Ｓ１８０细胞发生了Ｓ和Ｇ２期阻滞,而ＤＬ－４细胞则发生Ｇ１和Ｇ２期阻滞,Ｂ１６各时相细胞数无列出较高的辐射抗性。结论 电离辐射作用后,不同肿瘤细胞的辐射抗性、即辐射敏感性有较大差异。其细胞周期的变化规律亦不相同。     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中的作用

目的 探讨ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中的作用。方法 采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｐ２１ＷＡＦ１ ｍＲＮＡ水平的变化;采用流式细胞术检测ｐ ２１蛋白表达及细胞周期的变化。结果 ４．０ＧｙＸ射线照射后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈＧ１期ＥＬ－４细胞百分数明显高于假照射组：ｐ２１ＷＡＦ１ｍＲＮＡ水平从照射后１ｈ开始升高,４ｈ达峰值,持续至照后１２ｈ;ｐ２１ｘ蛋白表达在照射后２～４８ｈ明显增高。结论 ４．０ＧｙＸ射线照射可诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞,ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中起重要作用。     

电离辐射诱导PC12细胞分化的蛋白质组学分析

目的探索辐射诱导PC12细胞分化的分子机理，筛选神经系统辐射损伤的分子靶标。方法16Gyγ射线照射PC12细胞，照射48h，提取正常与照射后细胞总蛋白，进行双向电泳分析，并对部分差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果电泳中共发现差异表达蛋白质位点876个。鉴定出表达水平增高的蛋白泛素羧端水解酶L1，表达水平降低的蛋白HP1α类似蛋白。结论应用蛋白质组技术鉴定出部分辐射后差异表达蛋白质，为辐射诱导PC12细胞分化的分子机理研究提供了线索。     

电离辐射对肺癌A549细胞miR-21体内外表达的影响及意义

目的 研究miR-21在肺癌组织及血清中的表达与肺癌预后及放疗因素的关系,进而探讨电离辐射对人肺癌A549细胞体内外表达miR-21的影响。方法 收集肺癌患者病理组织及血清样本,检测不同病理类型肺癌组织及血清中的miR-21的表达水平,同时检测是否接受放疗的非小细胞肺癌患者血清中miR-21的表达水平,并进行生存分析;以2、4 Gy X射线照射体外培养的A549细胞,并以A549细胞制备裸鼠肺转移癌模型,分别检测A549细胞与裸鼠血清及肺中miR-21的表达水平。结果 肺癌组织中miR-21高表达占60.0%;肺癌血清中miR-21高表达占50.5%,腺癌与鳞癌检出率差异有统计学意义（χ²=5.766,P<0.05）;87例非小细胞肺癌中放疗患者miR-21检出率66.7%显著高于非放疗患者39.6%（χ²=6.321,P<0.05）;Kaplan-Meier法生存分析显示,miR-21高表达患者预后明显低于低表达患者,差异有统计学意义（P<0.05）;Cox回归模型分析显示,miR-21高表达、区域淋巴结转移及放疗均为影响患者预后的独立危险因素。2、4 Gy X射线照射A549细胞后不同时间点miR-21表达显著升高（t=-7.552~-1.206,P<0.05）,miR-21在裸鼠血清及肺组织中的表达水平显著升高（t=-47.845~-2.356,P<0.05）。结论 电离辐射可上调A549细胞体内外miR-21的表达水平,可能与增强A549细胞侵袭转移能力相关。