酶联免疫吸附试验在口蹄疫研究中的应用

作者从口蹄疫病毒(FMDV)抗原的检测、抗原决定基定位、抗体的检测、型间的交义反应等方面对酶联免疫吸附试验在口蹄疫研究中的应用作了综述。     

检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌－副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附试验快速检测技术，间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测。     

测定甲胎蛋白含量的酶联免疫吸附试验

本文介绍了一种新的临床甲胎蛋白定量的ELIsA方法。此法操作简单、省时间、成本低廉,其灵敏度可以达到RIA水平。适合医院做为常规检查项目。辣根过氧化物酶用过碘酸钠法与抗甲胎蛋白IgG结合。酶标抗体是用SephadexG—200纯化的。标准曲线重现性良好,精密度实验批内变异系数平均为6.5％;回收率为100.6±5.8％;本文在缩短ELISA测定时间上做了改进,提出采用40℃包被和孵育,可在6小时内得到结果。本法与放射火箭电泳自显影法比较20例两法结果的相关系数r=0.95。129例血清甲胎蛋白ELISA测定,结果符合临床诊断。 (本研究标记部分工作在生物系生殖免疫研究室完成,得到刘学高副教授热情帮助和指导;临床部分工作在空军广州医院检验科完成,得到陈汉军、邸红同志大力支持和帮助;本文完成后,请第一军医大学生化室徐铃教授和白求恩大学生化室麦荫乔教授审阅。并提出宝贵意见,特此一并致谢!)     

应用酶联免疫吸附试验检测山羊日本血吸虫病抗体的研究

本研究首先制备了日本血吸虫水溶性止卵抗原和兔抗山羊酶标复合物。经测试确定了:抗原的最适包被浓度(5ug/ml);酶标复合物的最佳工作浓度(1:2500)以及血清不同稀释度下的阴—阳临界值,从而成功地建立了山羊日本血吸虫病抗体的酶联免疫检测法。以1:80稀释作参考,对25份标准阳性血.清和19份标准阴性血清的考核结果证实:在最适条件下,该法特异性,敏感性良好,具有临床和科研应用价值。随后,应用酶联免疫吸附试验对7只实验山羊血吸虫病抗体消长作了长期、细致地观察,结果表明:特异性IgG最早于尾蚴感染后第40天出现;吡喹酮治疗后,7个月消失。     

改进酶联免疫吸附新方法检测甲胎蛋白

将纳米金(GNP,gold nanoparticle)功能化修饰的一抗(Ab1,first antibody)和氧化石墨烯(GO,graphene oxide)功能化修饰的二抗(Ab2,second antibody)通过原子转移自由基聚合反应(ATRP,atom transfer radical polymerization)应用于酶联免疫吸附(ELISA,enzyme linked immunosorbent assay)方法,提高检测灵敏度.考察了纳米材料的信号逐级放大效果,得出最佳条件为:辅助一抗/一抗(aAb1/Ab1,accessory antibody/Ab1)比值为3∶2,辣根过氧化物酶/二抗(HRP/Ab2,horseradish peroxidase/Ab2)比值为160∶1,在此条件下对甲胎蛋白(AFP,alpha fetoprotein)进行检测.结果表明,改进后的GNP/ATRP/GO-ELISA(GAG-ELISA)方法灵敏度提高了729倍,而成本仅为传统ELISA法的1/20.该研究提出的将多种纳米材料同时应用到传统检测方法中,实现信号逐级放大的思路是可行的,也为其他检测方法的改进提供了借鉴.     

酶联免疫吸附法实验操作注意事项

酶联免疫测试法在粮油卫生检验中的应用越来越普及，特别是在真菌毒素的测试上，其主要特点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判断。但是在操作过程中有一些细节必须注意，如果不认真对待，是必对最终结果产生很大影响。本文根据作者的实践经验，总结了在粮油卫生检验中的几点关键注意事项。     

基于丝网印刷技术的电化学酶联免疫吸附

为研究基于丝网印刷技术的电化学酶联免疫吸附(ELISA)的效果,在塑料基板上印刷96孔电极单元,形成标准96孔ELISA检测板,建立电化学检测与ELISA实验的关联,检测板每孔底部为独立电化学单元,由碳电极、对电极和银参比电极组成,形成双面印刷基板,基板通过96×3针式镀金特定连接器连接至恒电位仪。结果表明,96孔三电极电化学丝网印刷电化学阵列作为ELISA检测是可行的,多通道恒电位仪可同时测量8个孔数据。     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

酶联免疫吸附法测定血清抗精子抗体

临床上已经发展了各种抗精子抗体检测技术,如GAT、SIT及IBT等。然而,这些技术各有局限,有的要求高活力精子,有的对试剂等实验条件要求较高,有的则需烦琐统计。且都在显微镜下观察结果,带有主观性。因此,近年来开始探讨放射免疫和酶联免疫吸附技术在测定抗精子抗体中的应用。我们经过一段较长时间的试验和126例临床检查的实践,建立了可在临床普及应用的人血清抗精子抗体酶联免疫吸附（EIJSA）检测技术。酶标板每孔加人llpL精子悬浮液（5x105／InL）,4T过夜;弃剩余液体,加满甲醇固定5ndn,弃甲醇,4T放置20then;用PBST…     

酶联免疫吸附法测定血清抗精子抗体

将酶联免疫吸附技术用于人血清抗精子抗体的检测,126例,临床检查结果所得,平均批内变异系数为6.5%,平均批间变异系数为7.1%,证实该法稳定性、重复性良好。44例正常供血者标本得正常值为 O.D(?)0.355。将其与目前临床上应用较广的精子浅盘凝集试验(TAT)结果比较,两者符合率达87.3%。     

人TRAIL酶联免疫吸附检测方法的建立

本研究利用重组表达的s TRAIL蛋白作为免疫抗原,分别制备了其单克隆抗体和兔源多克隆抗体,并以其为标准蛋白,建立了敏感、准确、特异性强的TRAIL夹心ELISA方法,为TRAIL蛋白在肿瘤中的监测和治疗奠定了基础。     

酶联免疫吸附测定法检测苏云金杆菌187菌株晶体蛋白的研究

本文采用液体双相法分离苏云金杆菌以色变种187菌株产生的伴孢晶体,然后碱解提取具体物活性的晶体毒素蛋白作为抗原,以ELISA间接法测定,最低检测阀值为1ng/ml。最敏感的检测区间为10~(-6)—10~(-9)g/ml。此区间内,抗原浓度的负对数值与ELISA的吸光值呈直线关系,其直线回归方程为(?)=6.457-0.3x。     

表皮生长因子间接竞争酶联免疫吸附测定法的建立

目的：建立一种可应用于临床的快速定量测定表皮生长因子含量的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。方法：以重组人表皮生长因子(ECF)为包被抗原和竞争抗原，两与一定量的ECF。抗血清反应，建立检测EGF的间接竞争ELISA方法。结果：理想的包被抗原质量浓度为1μg/mL，ECF抗血清的工作浓度为1：10000，酶标二抗工作浓度为1：3000，可测最适范围为0．5～16ng／mL，最小检测量为0．5ng/mL，批内和批间变异系数分别为6．21％和7．42％。得到回归方程y=-13．65ln(x) 81．554，相关系数R^2=0．997。结论：建立了快速定量检测ECF的间接竞争ELISA方法。     

一种适用于教学的酶联免疫吸附试验的抗原抗体系统制备

目的:探讨设计一种教学成本低、便于教学使用、有助于培养医学生综合实验设计能力和提高实验基本操作技能的酶联免疫吸附实验抗原抗体系统.方法:以提纯的人IgG免疫家兔获取兔抗人IgG抗体,再用其包被酶标反应板,以人血清(人IgG)作抗原,用酶标记羊抗人IgG抗体结合抗原及催化底物显色反应.结果:该双抗体夹心法,底物显色反应清楚肉眼即可作出判定,非特异干扰极小.结论:我们设计的酶联免疫吸附实验-双抗体夹心法原理清晰、便于理解和掌握、教学成本较低、结果易于观察、便于教学大量使用.     

人小肠三叶因子的克隆及酶联免疫吸附检测

人小肠三叶因子的cDNA,克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,hITF以GST-hITF融合蛋白的形式表达,融合蛋白占细菌总蛋白的15%左右。经过Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和Sephacry1 S 100分子筛层析纯化了hITF。SDS-PAGE和氨基酸分析证明得到了hITF纯品。以天然hITF为抗原免疫青紫蓝兔制备了抗血清,用纯化的IgG建立了hITF的酶联免疫吸附检测(ELISA)方法,给出了标准工作曲线。应用于纯化过程中样品峰的确立。     

植物钙调素酶联免疫吸附测定（ELISA）酶标一抗竞争法

本实验采用酶标一抗竞争 ELISA 法,完成了以植物 CaM 抗体定量植物 CaM 的方法。本法虽然在测定前需制备标记一抗。但在测定中省去标记二抗,因此快速简便。     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2(ChIL-2)单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统.此系统对鸡白细胞介素-2的检测灵敏度为50 pg/mL.两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应.以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞,培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出.在促有丝分裂剂中, 植物血凝素(PHA)导致ChIL-2的产生量最高; 在病毒方面,传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌.本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具.     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2（ChIL-2）单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统．此系统对鸡白细胞介素乏的检测灵敏度为50pg／mL．两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应．以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞，培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出．在促有丝分裂剂中，植物血凝素（PHA）导致ChIL-2的产生量最高；在病毒方面，传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌．本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具．     

酶联免疫吸附分析实验在食品分析教学中的实施

该文通过对酶联免疫吸附分析(ELISA)实验在食品分析教学中实施情况进行探讨.介绍了该实验的基本原理以及实施过程,并以在食品安全检测领域中较常用的竞争ELISA为例,论述了用ELISA检测食品中有害小分子化学物质的实验步骤.为有关院校开展ELISA实验提供指导和借鉴.     

酶联免疫吸附分析(ELISA)检测抗ss-DNA自身抗体

本实验用小牛胸腺单股DNA(ss-DNA),通过酶联免疫吸附分析(ELISA)测定了可疑全身性红斑狼疮(SLE)及相关患者血清标本21个,其中7个病人血清与ss-DNA反应阳性,存在抗ss-DNA自身抗体。这7个病人血清在SLISA检测O.D值比健康人对照血清的O.D值高出1.5倍以上。方法简便、准确,重复性好,对SLE病人暴发前检测具有参考价值。