基于NF-κB信号通路探讨中医药治疗脓毒症的研究进展

脓毒症（sepsis）是重症医学科常见的急危重症,具有高发病率和高病死率的特点。目前,临床上针对脓毒症的治疗用药多以西药为主,长期使用存在抗生素耐药、激素不良反应和费用高昂等问题。因此,探寻新型、高效、安全、廉价的药物和治疗模式是现阶段研究的重点方向。中医药凭借其“整体观念、辨证论治、一人一方”的独特优势,在脓毒症的预防和治疗中积累了相当丰富的临床经验。近年来,中医药与脓毒症核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的研究较多。该文通过筛选相关临床研究与文献,从脓毒症的病因病机,辨证论治,发病机制,NF-κB信号通路和中医药对脓毒症的干预等方面进行系统归纳整理,研究发现一些单味中药及其提取物、中药复方和中药注射液可以通过调控NF-κB信号通路的激活,调节巨噬细胞的免疫功能,有效抑制NF-κB介导的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1（IL-1）,IL-6等炎症因子及其蛋白的表达,显著减轻全身炎症反应和各脏器损伤,改善预后。但囿于客观条件的限制,部分研究也存在促炎-抗炎平衡机制模糊、药代动力学不明及药物安全性评价较低等问题,有待进一步研究与探索,以期为中医药治疗脓毒症提供新的理论基础和诊疗思路。     

基于SIRT1/NF-κB信号通路探讨有氧运动结合生慧汤对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响＊

目的 研究4周的跑台运动结合生慧汤对睡眠剥夺大鼠SIRT1/NF-κB信号通路及相关炎症因子的调节作用，探讨其改善睡眠剥夺大鼠学习记忆可能的作用机制。方法 将48只睡眠剥夺模型大鼠随机均分为空白对照组（CON组）、有氧运动组（EX组）、完全睡眠剥夺组（TSD组）、完全睡眠剥夺 + 有氧运动组（TSD + EX组）、完全睡眠剥夺 + 生慧汤 + 有氧运动组（TSD + SHT + EX组）、完全睡眠剥夺+生慧汤组（TSD + SHT组）。EX组、TSD + EX组进行4周的跑台运动、TSD + SHT + EX组同时给与4周的跑台运动及生慧汤之后，采用多平台水环境法建立大鼠完全睡眠剥夺模型，TSD组、TSD + EX组、TSD + SHT组、TSD + SHT + EX组进行72 h的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆，采用Western blot（免疫印迹试验）检测大鼠海马中SIRT1、IκBα（NF-κB的抑制蛋白）、AC-NF-κB p65（乙酰化NF-κB p65）蛋白表达水平，采用实时荧光定量PCR技术和ELISA（酶联免疫吸附剂测定）分别检测海马和血清中TNF-α（肿瘤坏死因子-α）、IL-6（白细胞介素-6）、IL-1β（白细胞介素-1β）mRNA表达水平，采用HE染色（苏木精-伊红染色法）观察大鼠海马的神经元形态。结果 与CON组比较，TSD组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程显著增加，初次抵达平台时间显著延长，目标象限停留时间显著减少；SIRT1、IκBα表达显著降低、AC-NF-κB p65表达显著升高；海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平显著升高。与TSD组比较，TSD + EX组、TSD + SHT组、TSD + SHT + EX组大鼠平台潜伏期和游泳总路程显著减少，初次抵达平台时间缩短，目标象限停留时间增加；SIRT1、IκBα表达升高、AC-NF-κB p65表达降低；海马及血清中TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平显著降低；TSD + SHT + EX组、TSD + EX组、TSD + SHT组海马神经元细胞排列较规则，数量增加，细胞核饱满。结论 4周的有氧运动结合生慧汤可抑制神经元损伤，改善睡眠剥夺引起的大鼠学习记忆能力，其机制可能与SIRT1/NF-κB信号通路中的关键蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子表达有关。     

蹄叶橐吾萃取物通过NF-κB通路降低细胞炎症反应＊

目的 探究蹄叶橐吾提取物（ethanolic extract of ligularia fischeri，EEOLF）的抗炎作用机制，为蹄叶橐吾（Ligularia fischeri, LF）的临床应用提供理论依据。方法 采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作用于RAW264.7细胞建立体外细胞炎症模型。实验分6组，即空白对照组、EEOLF组、LPS组、LPS + 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）组、LPS + EEOLF组、LPS + EEOLF + PDTC组。Western blot法检测药物作用于RAW264.7细胞后，细胞核内因子κB p65（nuclear factor-κB，NF-κB）的表达水平和磷酸化水平。ELISA法测定药物作用于RAW264.7细胞后IL-1β及TNF-α的释放量。结果 与空白组对照比较，LPS能显著增加细胞核内NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平（P < 0.001）；与LPS组比较，EEOLF能显著下调LPS诱导增加的NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平（P < 0.001）。与空白组比较，LPS能显著增加炎症因子L-1β及TNF-α的分泌（P < 0.001）；与LPS组比较，蹄叶橐吾提取物（ethanolic extract of ligularia fischeri，EEOLF）能显著降低LPS诱导增加的L-1β及TNF-α的分泌（P < 0.001）。在NF-κB抑制剂PDTC作用下，LPS诱导的细胞炎症反应减弱，并且在PDTC存在下，EEOLF能更加明显降低LPS所诱导的细胞炎症反应。结论 EEOLF通过作用于NF-κB通路抑制炎性因子的分泌，从而达到抗炎作用。     

基于NF-κB信号通路探讨苓桂术甘汤对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎保护作用

目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg^-1）、苓桂术甘汤高、中、低剂量组（9.36、4.68、2.34 g·kg^-1）,每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS（50 μg/只）构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比（W/D）;苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类（中性粒细胞、巨噬细胞）与数量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）炎症通路中NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重（P<0.01）。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻（P<0.01）。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调（P<0.01）,巨噬细胞数量明显减少（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

中药单体通过NF-κB信号通路防治动脉粥样硬化研究进展

心血管疾病是当今世界上最主要的死因。动脉粥样硬化（AS）是一种动脉管壁增厚或功能退变的慢性炎症性疾病,病变后期斑块破裂发生血栓,进而引起组织或器官缺血,故也是导致各类心血管疾病发生的病理基础。核转录因子-κB（NF-κB）作为炎症反应中重要的核转录因子,被激活后可介导炎症因子的转录,能诱发AS发病或是加重病情。血管内皮细胞在炎症因子等刺激下相关机制被激活,NF-κB介导内皮细胞内相关调控基因,分泌黏附分子、趋化因子和凝血因子,促进单核细胞等选择性聚集,上调黏附分子的表达,使黏附分子黏附于细胞内皮并向内膜迁移,促进细胞外基质的降解,形成不稳定斑块等。近年来,中医药在防治AS上取得了一定成效,发现了许多中药可以抗AS,可作用于人体的多个靶点,在不同环节上影响AS发生和发展。该文章主要介绍了NF-κB通路及其与AS的关系,黄酮类、萜类和生物碱类等不同类型的75个中药单体成分在基于NF-κB通路抗AS中的研究现状,发现中药单体主要通过调节NF-κB通路起到调控胆固醇平衡、抑制炎症反应、减少细胞增殖、抑制细胞间黏附和抑制泡沫细胞形成等作用,以期为防治AS的研究提供参考。     

基于NF-κB信号通路天然产物治疗特应性皮炎的研究进展

特应性皮炎是由内外多因素共同作用的慢性、复发性、炎症性、瘙痒性皮肤病，位居全球皮肤疾病负担首位。由于传统治疗和生物制剂的不良反应及高成本问题，天然产物的开发备受关注。核转录因子-κB（NF-κB）信号通路是抗炎和免疫调节的重要途径，故基于NF-κB信号通路系统，总结了黄酮类、生物碱、酚类、萜类、香豆素类、糖苷类、蒽醌类等天然产物的药理学作用与分子机制，以期为天然产物的开发提供一定指导。目前众多基础研究显示出天然产物具有较高的安全性和有效性，并通过口服或外用的给药方式及与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核转录因子E₂相关因子2（Nrf2）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）/晚期糖基化终产物受体（RAGE）、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3（NLRP3）等信号通路相互串扰的复杂药理学网络途径，发挥抗炎、抗过敏、抗氧化应激等作用，最终逆转特应性皮炎的病理改变。但值得注意的是，天然产物的临床应用转化尚相对不足，仍需更多更为严谨的临床试验加以验证。现有的基础试验及临床证据证明天然产物可能基于NF-κB信号通路发挥改善特应性皮炎的作用，这对评价天然活性物质的潜在机制提供依据，也为药物的开发提供了更多潜在候选者。     

基于TNF/NF-κB信号通路探讨枳实薤白桂枝汤减轻心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制

目的 从肿瘤坏死因子/核转录因子-κB（TNF/NF-κB）信号通路探讨枳实薤白桂枝汤（ZXGT）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌梗死（MI）的影响。方法 将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组（4 mg·kg^-1）、ZXGT组（24.4 g·kg^-1）、ZXGT+抑制剂组（ZXGT,24.4 g·kg^-1;TNF-α受体抑制剂R7050,5 mg·kg^-1）、抑制剂组（R7050,5 mg·kg^-1）,每组8只;各组大鼠预防性灌胃给药7 d,且ZXGT+抑制剂组、抑制剂组在第6、第7天给予腹腔注射抑制剂R7050 5 mg·kg^-1,除空白组外其余各组腹腔注射ISO,连续2 d,诱导大鼠MI模型;于实验第7天注射ISO 30 min后麻醉大鼠,检测心电图（ECG）观察ST段抬高值;采用小动物超声心动图检测大鼠心脏整体轴向应变（GLS）和心脏同步性;腹主动脉取血测定血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）水平及炎症因子TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理变化;免疫组化（IHC）法检测心脏组织TNF-α、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心脏组织肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）、肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）、转化生长因子激酶1（TAK1）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、p-IκBα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠ECG ST段显著抬高（P<0.01）,超声心动图中GLS增大及同步性显著降低（P<0.01）,病理组织学显示心肌大面积坏死,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平显著升高（P<0.01）,心肌组织中的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,培哚普利组、ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组大鼠的ECG ST段抬高值明显降低（P<0.05,P<0.01）,GLS和心脏同步性改善（P<0.05,P<0.01）,心肌坏死面积减小,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平均下调（P<0.01）,且ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组均下调模型大鼠升高的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平和上调IκBα的表达水平（P<0.05,P<0.01）;与ZXGT组比较,ZXGT+抑制剂组和抑制剂组差异无统计学意义。结论 ZXGT能保护ISO诱导的大鼠MI损伤,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TNF/NF-κB信号通路有关。     

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg~(-1)),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg~(-1)),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P 0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P 0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P 0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P 0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P 0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。     

基于NF-κB信号通路的中药治疗脓毒症研究进展

脓毒症是由感染、手术、创伤等引起的全身炎症反应综合征(SIRS),死亡率高、治疗费用高、医疗资源消耗大,给医疗行业甚至是国家经济都带来了很大的负担,因此,找到治疗脓毒症的有效措施刻不容缓。目前针对脓毒症的发病机制,使用了一定的药物治疗,抗生素、糖皮质激素、血管活性药物等,但其治疗效果并不理想,副作用多,预后效果差,临床死亡率依然居高不下。中医讲究整体观念,辨证论治,对于脓毒症的治疗具有功效独特、副作用相对较小等优势,吸引了无数来自世界各地有志于解决脓毒症的科研及临床工作者们的目光。近年来,一些中药复方、中成药、单味中药及活性成分越来越多的作为新型药物用于预防、治疗脓毒症,并且得到了广泛的认可,在一定程度上降低了脓毒症患者的死亡率、炎性指标等,对于脓毒症的治疗起到了重要的作用。本文就核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在脓毒症中的作用及以NF-κB信号通路相关蛋白为作用靶点的中药治疗脓毒症的研究进展进行综述。     

甘草附子汤调控NF-κB信号通路抑制胶原诱导型关节炎小鼠骨质破坏的作用

目的 探讨甘草附子汤（GCFZ）抑制胶原诱导型关节炎（CIA）小鼠模型骨质破坏的作用机制。方法 将30只雄性DBa/1J小鼠随机分为5组,分别为正常组、CIA组、甘草附子汤低剂量组（GCFZ-L,2.4 g·kg^-1）、甘草附子汤高剂量组（GCFZ-H,4.8 g·kg^-1）和甲氨蝶呤组（MTX,1 mg·kg^-1）,每组6只,二次免疫法诱导CIA模型;观察记录各组小鼠关节炎指数,苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠踝关节组织病理学变化;番红-固绿染色检测小鼠踝关节软骨破坏情况;显微计算机断层扫描（Micro-CT）扫描检测小鼠踝关节骨质破坏的情况;免疫组化法观察踝关节核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（IKKα/β）、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）的表达情况。结果 与正常组比较,CIA组关节肿胀明显,关节炎指数评分显著升高（P<0.01）;与CIA组比较,GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组均能显著抑制关节肿胀,并且明显降低关节炎指数评分（P<0.05,P<0.01）。HE染色和番红-固绿染色显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组）能明显抑制滑膜的侵袭,并且关节软骨破坏明显减轻。Micro-CT扫描分析显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）骨破坏评分显著降低（P<0.01）。免疫组化结果显示,与正常组比较,CIA组NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均显著升高（P<0.01）;而与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均明显降低（P<0.05,P<0.01）;而GCFZ-L组仅NF-κB p65积分吸光度显著降低（P<0.01）。结论 甘草附子汤可能通过调控NF-κB信号通路来抑制CIA小鼠的骨质破坏。     

地黄饮子含药血清通过PPARγ/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应＊

目的 研究中药地黄饮子抑制脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞炎症反应的作用机制。方法 使用1 mg·L^-1的LPS诱导小鼠小胶质细胞系（BV2）构建细胞炎症模型，实验分组为空白组、模型组、地黄饮子组（14.5 g·kg^-1）、米诺环素组（150 mg·kg^-1）。地黄饮子组和米诺环素组予以10%的含药血清干预，空白组和模型组给予同等浓度的空白血清。明场下观察细胞形态的变化，实时荧光定量PCR检测促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平，Western blot检测PPARγ蛋白表达和NF-κB p65活化水平，细胞免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果 与空白组比较，模型组促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平均显著升高（P < 0.01）；PPARγ蛋白水平明显降低，NF-κB磷酸化水平明显增高，差异均有统计学意义（P <0.01），LPS刺激使BV2细胞核内NF-κB含量明细增多；给予地黄饮子或米诺环素含药血清干预后，与模型组比较，炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的 mRNA 水平均显著降低（P < 0.05），PPARγ蛋白水平明显升高（P < 0.05），NF-κB磷酸化水平和入核含量明显减少（P < 0.05）。结论 地黄饮子可能通过调控PPARγ/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应。     

基于NF-κB信号通路的糖尿病病理机制及中医药干预研究进展

随着人民生活水平的提高，糖尿病的发展形势日益严峻。糖尿病是一种慢性炎症性疾病，患者体内伴随着核转录因子-κB（NF-κB）的表达异常。NF-κB存在于多种组织细胞中，参与调节与免疫功能和炎症有关的多种基因，在机体受到外界刺激的情况下可被多种因子激活，从而使机体产生炎症等反应。以往对于NF-κB的研究更多的是在癌症领域，尚未对相关信号通路治疗糖尿病的病理机制及中医药治疗进展做系统阐述。查阅国内外相关文献资料发现，在糖尿病发生发展过程中，NF-κB并不是孤立的，而与炎症、氧化应激、能量代谢相关信号分子均有关联并参与介导炎症、胰岛β细胞凋亡、胰岛素信号传导等生理功能。因此阻断NF-κB信号通路的传导有利于治疗糖尿病。目前西医的治疗手段主要包括口服降糖药和注射胰岛素，但不良反应较明显，中医药在治疗糖尿病方面具有靶点多、作用广、疗效优等特点，具有补气活血、理气化痰、清热解毒、滋阴润燥功效的中药及复方可以通过抗炎等作用有效干预NF-κB信号通路在体内的异常表达。该文总结NF-κB信号通路及其与糖尿病的关联关系，并就近5年来中医药干预NF-κB信号通路治疗糖尿病的现代研究进展进行综述，以期为基于NF-κB信号通路探讨糖尿病新的病理机制奠定实验室基础，为糖尿病防治及相关中药新药研发提供新的作用靶点与研究方向。     

膈下逐瘀汤对EMT气滞血瘀型大鼠NF-κB信号通路及其下游因子的影响

目的 探讨膈下逐瘀汤对子宫内膜异位症（EMT）气滞血瘀型大鼠的治疗作用及其机制研究。方法 从60只SPF级雌性未孕健康SD大鼠中随机抽取6只作为空白组,其余采用复合因素法构建气滞血瘀型EMT大鼠模型。从造模成功的36只大鼠中随机抽取30只分为模型组、甲羟孕酮组（0.416 mg·kg^-1）及膈下逐瘀汤低、中、高剂量组（4.063、8.125、16.25 g·kg^-1）,每组6只,每天灌胃1次,连续4周。通过大鼠病理学变化、异位灶体积反映大鼠造模情况及膈下逐瘀汤对EMT大鼠的影响;取各组内膜组织进行苏木素-伊红（HE）染色,观察组织病理变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组血清上清液中白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）含量;免疫组化（IHC）检测各组大鼠组织中核转录因子-κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）蛋白表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NF-κB、MMP-9、VEGF、Bax mRNA表达。结果 治疗后,膈下逐瘀汤低、中、高剂量组和甲羟孕酮组异位灶体积明显缩小;镜下病理观察可见假手术组与空白组大鼠子宫内膜结构完整,腺体及间质细胞生长良好,腺上皮细胞排列紧密整齐,胞浆丰富呈高柱状;间质细胞分布均匀,血管丰富,呈梭形。与空白组、假手术组比较,模型组以柱状上皮和立方上皮为主,异位内膜上皮细胞呈短柱状,部分为假层状,细胞形态不完整,间质细胞和腺体的数量减少,部分腺体呈圆形,蜕膜发育不良。与空白组比较,模型组血清中IL-10含量明显降低（P<0.05）,IL-6含量明显升高（P<0.05）,模型组在位、异位内膜组织中NF-κB、VEGF、MMP-9蛋白表达明显升高（P<0.05）,Bax蛋白表达明显降低;与模型组比较,膈下逐瘀汤中、高剂量组血清中IL-10含量明显升高（P<0.05）,IL-6含量明显降低（P<0.05）,膈下逐瘀汤各剂量组大鼠在位、异位内膜组织NF-κB、VEGF、MMP-9蛋白表达明显降低（P<0.05）,Bax蛋白表达明显升高（P<0.05）。与模型组异位内膜比较,膈下逐瘀汤中、高剂量组异位内膜中NF-κB、MMP-9、VEGF mRNA表达明显降低（P<0.05）,Bax mRNA表达明显升高（P<0.05）。结论 膈下逐瘀汤具有抑制气滞血瘀型EMT大鼠异位内膜组织扩大及侵袭,其机制可能与干预NF-κB信号通路过度激活所介导的免疫抑制、改善炎症反应、阻断微血管新生功能有关。     

抵当汤调控NF-κB通路干预DM大鼠心肌炎症反应的机制

目的:探讨抵当汤及其蕴含的泻热化瘀通络法对因核转录因子-кB(NF-κB)通路激活而导致的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠心肌炎症反应的影响。方法:选取130只体重达到220~270 g清洁级SD健康雄性大鼠,分为正常组(10只)和造模组(120只),后者按55 mg·kg-1剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液建立DM模型。72 h后将造模成功的大鼠随机分为模型组,抵当汤高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg~(-1)·d~(-1)),吡咯啉烷二甲基硫脲组(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC组,0.15 g·kg~(-1)·d~(-1))以及抵当-吡咯啉烷二甲基硫脲组(DP组1.08 g·kg~(-1)·d~(-1)抵当汤+0.15 g·kg~(-1)·d~(-1)PDTC),均采用相应药物1次/d进行灌胃干预。8周后,麻醉状态下腹主动脉取血处死动物,迅速摘取大鼠心脏,置于液氮中储存备用。以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织匀浆中转录NF-κB p65蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织匀浆肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达,免疫荧光检测心肌组织细胞黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1),巨噬细胞趋化性蛋白-1(macrophage chemotaxis protein-1,MCP-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达均明显升高;且模型组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白。与模型组比较,各治疗组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达则明显降低;组间比较发现,DP组NF-κB p65蛋白表达与正常组最接近,抵当汤高剂量组TNF-α表达则较模型组降低更加显著;各治疗组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白不同程度减少,其中DP组被染成绿色的范围最少,与正常组最为接近。结论:泻热化瘀通络之抵当汤可通过抑制NF-κB通路的激活来减轻DM模型大鼠的心肌炎症反应。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的 探究益气通脉方（YQTM）通过调控核转录因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）信号通路对载脂蛋白E^-∕-敲除（ApoE^-∕-）小鼠肝脏炎症的影响。方法 将40只ApoE^-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组（阳性药组）、YQTM低、中、高剂量组（0.39、0.78、1.56 g·kg^-1）。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O（oil red O）染色、马松（Masson）染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠肝脏白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的表达水平;免疫组化法（IHC）观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白（IκB）、IκB激酶β（IKKβ）、磷酸化（p）-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1（Caspase-1）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡（P<0.01）,小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高（P<0.01）,肝脏中TG、TC水平升高（P<0.01）;肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解（P<0.05,P<0.01）。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）;肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织L-1β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 YQTM对ApoE^-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。     

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的 探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法 运用血清药理学方法,体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过氯化钴（CoCl₂）刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型,将细胞随机分为空白组、CoCl₂模型组（200 mmol·L^-1）、鳖甲煎丸低（0.55 g·kg^-1）、中（1.1 g·kg^-1）、高（2.2 g·kg^-1）和扶正祛瘀胶囊组（0.56 g·kg^-1扶正祛瘀胶囊）。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果 与空白组比较,CoCl₂刺激24 h后,RAW264.7细胞增殖受抑制明显（P<0.05）;与模型组比较,用相应含药血清处理24 h后,各用药组能促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）。与空白组比较,模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高（P<0.05）;与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平（P<0.05）。与空白组比较,模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显升高（P<0.05）,M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低（P<0.05）,CD163、IL-10蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组比较,模型组NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低（P<0.05）。与空白组比较,模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达;与模型组比较,鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论 鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化,减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤,从而延缓肝纤维化进展,其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。     

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1）,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）;p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）;IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）;肝脏质量显著升高（P<0.01）;小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01）,气盛衰度显著下降（P<0.01）。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05, P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）;四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01）,直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01）,小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05）,小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05,P<0.01）,气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。     

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L~(-1))和秋水仙碱组(0.2 mg·L~(-1)),除正常组外,其余各组均用400 mg·L~(-1)MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL-1β前体(Pro-IL-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0～32 mg·L~(-1)TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌水平显著升高(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,1～30 mg·L~(-1)TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达明显降低(P0.05,P0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL-1β分泌而发挥抗炎作用。     

双参通脉颗粒对心肌缺血再灌注大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:研究双参通脉颗粒(STG)对心肌缺血再灌注大鼠的作用及机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham),模型组(MIRI),西药合心爽组(DH),双参通脉颗粒低剂量组(STG-L),中剂量组(STG-M),高剂量组(STG-H)。连续灌胃2周后,结扎左冠状动脉前降支造模,检测左心功能及Na+-K+-ATP酶活性、酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α含量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌核转录因子-κB(NF-κB),IκB激酶α(IκBα),Iκκβ蛋白表达。光镜观察心肌组织结构。结果:与MIRI组比较,STG各剂量组,DH组的左心功能及Na+-K+-ATP酶活性改善显著(P0.05);血清IL-1β,IL-6及TNF-α水平明显降低(P0.05);心肌NF-κB蛋白表达显著降低(P0.05);IκBα和Iκκβ水平显著升高(P0.05)。结论:STG可能通过减少IL-1β,IL-6及TNF-α含量,抑制NF-κB蛋白表达,增加IκBα和Iκκβ蛋白表达抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤。