电镜样品取材实验带教的体会

电镜技术是现代医学超微结构研究的重要手段，取材的好坏关系到整个实验的成败。为研究生开设取材实验课，目的是让学员明确其重要性，掌握取材的要领。     

透射电镜样品取材及固定为主的研究生教学和指导

正电镜技术课程是重要的选修课~([1]),常安排在研究生刚入学,但学生缺乏科研经历,对将来课题内容及实验中能用何种电镜技术尚不知。此时教学重点是常规电镜技术,其中"取材、固定"是重中之重。因为在观察细胞超微结构的电镜技术中,取材、固定最为关键,将影响到结果科学性及图像美观。研究生课程教学中,若未介绍实验设计或个性化指导特殊样品取材、固定,学生常因多种原因使电镜样品取材、固定不佳,以致无法补救。本文着重探讨如何上好"取     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

避免电镜超薄切片污染的探讨

在生物学和医学的研究中 ,观察细胞超微结构的变化具有重要意义 ,目前电镜已成为临床病理诊断 ,形态学研究的必要工具。要获得清晰的电镜图像 ,电镜样品制备是重要环节 ,理想的超薄切片应具备以下几点要求 :①细胞超微结构保存良好 ,没有明显的人工假象。②反差好且分辨力高。③切片平展均匀 ,无污染、刀痕、震颤、皱褶等。样品制作过程中最容易影响切片 ,提高工作效率 ,我们必须重视一些易忽略的环节 ,保证制样工作顺利进行。切片污染可出现在样品制作的全过程及电镜观察时 ,分析如下 :1　制备包埋块过程中的污染及注意事项①取材的污染 :…     

硝酸镧块染法显示肠粘膜屏障通透性的电镜技术

硝酸镧块染法显示肠粘膜屏障通透性的电镜技术史颖辉，李学荣，胡大海，谷法有，陈壁，刘健（西安第四军医大学电镜室，西京医院烧伤科．西安７１００３２）我们将镧示踪法用于肠粘膜屏障的研究．取得了良好的效果，现介绍如下．１材料和方法１．１动物及模型用纯系ＳＤ大...     

电镜在诊断病理中应用：2183例分析

将解放军总医院病理科电镜室开始应用于病理诊断从１９８４年至１９９１年中每年的活检例数，电镜检查总例数，活检电诊断例数进行统计分析，８年中总活检为９２２６４例，总电镜检查数是６８１４例，活检诊断电镜数２１８３例，占活检总数的２．３７％。２１８３例中前５位的标本是神经组织，消化道，肺，软组织和泌尿生殖道。从已经总结出来的光镜诊断与电镜诊断比较结果看，２３３例中电镜更正诊断１１７例，占５０．２％，我们认     

医学研究生电镜取材实验课教学探讨

正在进行电镜科研样品及医院电镜外检标本观察时,常发现最终得不到理想的电镜超微结构图片,究其原因大都是电镜样品取材时出了问题,送检者没有经过规范的电镜取材培训,操作不当,最终导致电镜观察结果不理想甚至失败。电镜下观察的形态结构主要是亚细胞水平的超微结构(纳米级),一些在光镜下看起来似乎完好无损的显微形态结构(微米级),在电镜下其超微结构却发生了明显的变化。因此,电镜样品     

生物医学电子显微学的教学与实践

生物医学电子显微学是电镜技术与生物医学相结合的边缘学科，是应用电镜观察研究细胞亚显微结构及其变化，揭示细胞结构与功能的科学技术，对建立现代医学完整形态学知识结构体系及分子生物学的研究至关重要。为生物医学专业研究生开设《生物医学电子显微学》课程，旨在使学员系统地学习超微结构知识，掌握超微结构的研究方法和实用意义，扩大科研思路，为课题设计和研究打下良好的基础。我室在多年教学实践中，经过积极探索，对教学内容、教学方法进行了系统的改革，几年的教学实践证明，这一改革取得了明显的效果。     

镉对大鼠输精管损伤及锌保护的超微结构与葡萄糖—6—磷酸酶细胞 …

目的 研究小剂量氯化镉对大鼠输精管近、远段的影响及锌的保护作用。方法 用１％氯化镉（２ｍｇ／ｋｇ体重）腹腔注射雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠后４ｈ到６０ｄ及镉、锌联合注射后３ｄ、１５ｄ取材。采用电镜观察和葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６－Ｐａｓｅ）电镜细胞化学定量研究。结果 镉注射４ｈ后，输精管主细胞出现超微结构改变，３￣７ｄ改变最明显，１５ｄ有所减轻，６０ｄ后基本恢复正常。主细胞的主要改变为线粒体肿胀，内质网扩     

内皮素－1免疫金标电镜技术应用的体会

内皮素－１免疫金标电镜技术应用的体会张桂香，陆江阳，李玲，杨建法（北京解放军３０４医院病理科电镜室，北京１０００３７）将胶体金作为一种特异的标记方法，近年来应用越来越广泛，它不仅可用于透射电镜也可用于扫描电镜及其它生物大分子定位、定性、形态发生、抗原...     

冰冻切片进行免疫电镜的新尝试

利用冰冻切片制作电镜标本，由于冰晶的大量出现无法进行超微结构的识别．故很少有人涉足。在免疫电镜及酶细胞电镜等研究中．需要定位后进行电镜标本制作，为了避免冰晶的出现．只能使用非常烦琐的振动切片机切片。若进行系统的光镜、电镜观察，就更加困难。为此我们经过反复实验，不断探索．成功地使用冰冻切片进行脑组织免疫电镜的标本制作．改变了传统的冰冻切片不能制作电镜标本的观念．并取得了极为理想的效果。     

胚胎干细胞C3B鼠视网膜下腔移植分化研究

目的：探讨胚胎干细胞在具有正常视网膜结构的C3B鼠视网膜下腔中的诱导分化情况。 方法:胚胎干细胞传1代后进行拟胚体培养。拟胚体消化成单细胞后联合视黄酸注入C3B鼠视网膜下腔，注射后1周、3周、2月处死小鼠取材进行病理切片、电镜检查和免疫组化检测。 结果:1周时，可见到注射部位视网膜层水肿增厚。3周和2个月时，3只移植眼内出现畸胎瘤，占所有移植眼的25%，其余眼球注射部位仅见瘢痕组织或眼球萎缩。电镜发现增殖的细胞核异型性明显，具肿瘤细胞特征。免疫组化显示：畸胎瘤部分区域MAP-2强阳性反应；可见团状或集落状细胞GFAP强阳性反应；个别细胞Nestin阳性反应。 结论:胚胎干细胞移植入具有正常视网膜结构的C3B鼠视网膜下腔，未能出现ESC向视网膜组织分化或嵌入视网膜组织，相当部分的鼠眼出现了畸胎瘤，其临床安全性和致瘤性是非常值得关注的问题。     

亚铁氰化钾对糖原的特殊固定作用

亚铁氰化钾对糖原的特殊固定作用１宋小明１乐美兆１徐俊杰２孙绍山固定是电镜样品制作过程中的关键步骤之一。理想的固定剂应能迅速地、完整地保存细胞超微结构的细节以及能稳定细胞的各种结构成分，使之在处理过程中不致被溶解和丢失。目前国内电镜室最常用的方法为戊二...     

地鼠气管上皮损伤后粘液分泌细胞的修复作用

用改造后的静脉留置针将地鼠气管腹侧面约１／４的粘膜刮除，取材前１ｈ腹腔内注入Ｂｒｄｕ气管标本经ＨＥ、ＰＡＳ，抗Ｂｒｄｕ免疫染色，光、电镜观察。损伤后６ｈ开始，边缘部上皮细胞增殖并向损伤面内爬行，胞浆呈ＰＡＳ阳性，核呈Ｂｒｄｕ阳性，２４ｈ覆盖损伤面。电镜下这些细胞表面无纤毛或仅有少量微绒毛，浆内有大小不等散在的粘液分泌颗粒和较多的粗面内质网。３６ｈ开始，损伤面由３一５层表皮样化生细胞构成，核周出现张力丝状物围绕，部分胞浆内仍有少量粘液颗粒。从７２ｈ开始，细胞出现短而细的纤毛或出现较多的粘液分泌空泡。２ｗ后恢复正常气管上皮结构。这表明气管上皮中的粘液分泌细胞不是终末细胞，具有很强的ＤＮＡ合成和增殖能力，是损伤后参与修复的主要细胞之一。     

舌质超微结构与微循环

本文创新一项活检方法,用于透射电镜下舌乳头组织细胞及毛细血管内皮细胞的研究。从尸体过渡到活体取材。其方法简便,无剧烈疼痛,24小时创面消失。样品制备后,超薄切片,双重染色,电镜观察。共做健康人10例,白血病患者14例。     

大鼠下丘脑室旁核的神经支配

本文应用ＨＲＰ追踪、免疫细胞化学与电镜方法研究了大鼠下丘脑室旁核的神经支配。结果显示，中缝背核向室旁核投射的神经元中，部分为５－ＨＴ免疫反应阳性；被盖背外侧核的部分５－ＨＴ神经元也发出纤维投射至室旁核。将ＣＢ－ＨＲＰ注入第三脑室后，电镜下发现室旁核内ＥＶＫ免疫反应阳性树突接受ＨＲＰ反应阳性轴突形成突触，ＨＲＰ免疫反应阳性的树突与阴性轴突的传入形成突触，提示室旁核内ＥＮＫ神经元受触液神经元的突触调控，同时触液神经元又受到其他神经元的突触调控。     

研究生解剖学实验教学中尸体资源的综合利用

医学院校的研究生教育是为国家培养复合型高级医学人才。人体解剖学是一门极具实践性的学科,对人体构造的认识大多来自于尸体解剖的观察和临床实践。医学院校招生人数增多,用于解剖学教学的尸体短缺已成为制约医学院校人体解剖学教学的瓶颈,如何解决实验操作尸体标本不足及综合利用的问题,值得我们探讨。本文结合我教研室的教学实践,就研究生解剖学实验教学中如何综合利用尸体资源,提高尸体资源利用率,培养研究生的综合素质,走节约化教学之路,谈点我们的体会。通过师生的共同努力,不仅大大提高了研究生解剖学实验教学质量,尸体得到充分利用,而且节约了教学成本。     

LR White 包埋剂在电镜诊断中的应用

ＬＲＷｈｉｔｅ包埋剂是芳香族交联性丙烯酸，具有很高的亲水性，以往仅用于电镜免疫组化。在实践中发现ＬＲＷｈｉｔｅ具有较好的稳定性，脱水要求不高，聚合时间短，切片容易，染色时间短等特点。为了缩短电镜诊断时间，因此我们对ＬＲＷｈｉｔｅ作为电镜诊断包埋剂的可...     

肾组织电镜包埋后银染色技术

银染色是肾脏组织学诊断的重要特殊染色技术,已广泛应用于肾脏疾病光镜水平鉴别诊断,然而电镜肾组织银染色技术的报道甚少,尤其是包埋后银染色技术国内还未见记载。我们参照国外的方法,开展电镜包埋后银染色技术获得满意结果。1 材料和方法1.1 取材人肾活检组织切成1mm~3大小,3.75%戊二醛4℃固定,0.1mol·L~(-1)pH7.4磷酸缓冲液漂洗3次,2%锇酸与3%亚     

超薄切片技术的质量控制

超薄切片技术作为病理学诊断和组织学研究的一个重要技术 ,已广泛应用于临床病理诊断、教学和科研工作。一位出色的电镜技术工作者不仅要熟悉透射电镜样品制备的原理 ,还要熟练掌握该技术 ,能制备出一张优质的超薄切片 ,以便日常工作的顺利开展。近年来电镜用于活检和疑难病诊断也逐渐增加 ,由于电镜样品制备费用比较昂贵 ,因此有必要对超薄切片的质量进一步要求。1　标本的取材和固定如何获得 1张超微结构保存完整的超薄切片 ,固定是极为重要的过程。为了使离体组织如同活组织一样 ,这就要求生命的全过程 (包括酶促反应 )立刻停止 ,细胞及…