运动性低血色素大鼠小肠铁吸收蛋白DMT1和FPN1表达的变化

目的:研究运动性低血色素大鼠小肠铁吸收蛋白二价金属离子转运体1(divalent metal transporter1,DMT1)和膜铁转运蛋白1(ferroportin1,FPN1)表达的变化,探讨运动性低血色素的发生机制。方法:12只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(CG)和实验组(EG)。实验组进行5周跑台训练,建立运动性低血色素模型。5周递增负荷跑台运动后,检测两组大鼠血常规和血清铁,采用Western Blot检测小肠上皮细胞DMT1和FPN1表达。结果:(1)实验组Hb显著低于对照组(P<0.01),运动性低血色素造模成功。(2)实验组大鼠小肠上皮细胞DMT1表达比对照组显著降低(P<0.05),FPN1表达比对照组显著下降(P<0.01)。(3)实验组血清铁和转铁蛋白饱合度显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:长时间大强度运动会减少机体肠铁吸收,降低机体运铁能力,是引发运动性低血色素的原因之一。     

游泳训练对大鼠腓肠肌铁代谢相关蛋白表达的影响

目的:研究游泳训练后大鼠腓肠肌二价金属离子转运体1(divalent metal transporter 1, DMT1)、转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)及膜铁转运蛋白1(ferroportin1, FPN1)表达的变化,探究运动对腓肠肌铁代谢的影响机制.方法:40只雌性SD大鼠随机分为对照组和游泳训练组,分别于游泳训练5周及10周后取材,测定血清铁状态、腓肠肌非血红素铁含量,采用Western Blot方法检测腓肠肌铁代谢相关蛋白表达的变化.结果:(1)游泳训练5周及10周组大鼠血清铁、Hb及RBC均较对照组显著升高,游泳运动10周组大鼠腓肠肌非血红素铁含量显著增加(P<0.01);(2)游泳训练组大鼠腓肠肌DMT1(IRE)和TfR表达增加,FPN1表达减少(P<0.05),而DMT1(non-IRE)表达无明显变化.结论: 游泳训练可以增加腓肠肌非血红素铁含量,促进机体铁动员.这可能与腓肠肌细胞膜上向胞内转运铁的TfR和DMT1(IRE)蛋白表达增加,而向胞外转运铁的FPN1表达下降有关.     

不同强度游泳运动对大鼠贮存铁及十二指肠铁吸收相关蛋白表达的影响

目的:观察不同强度游泳训练后大鼠机体贮存铁及十二指肠铁吸收相关蛋白的变化,探讨不同强度运动对机体内铁贮存及铁吸收的影响机制。方法:60只雌性SD大鼠随机分为对照组(controlgroup,CG),适度运动组(moderatelyexercisedgroup,MG)和过度运动组(strenuouslyexercisedgroup,SG),每组20只,分别于运动5周和10周后取材。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清铁蛋白(serumferritin,SF)含量;测定肝脏和骨髓非血红素铁含量;采用WesternBlot法检测十二指肠上皮细胞二价金属离子转运体1(divalentmetaltransporter1,DMT1)和膜铁转运蛋白1(ferroportin1,FP1)的变化。结果:(1)运动10周后,MG组大鼠SF和Hb显著高于SG组和CG组(P<0.05),而SG组大鼠SF显著低于CG组(P<0.05);MG组和SG组大鼠骨髓非血红素铁含量均显著低于CG组(P<0.01)。(2)MG组十二指肠上皮细胞DMT1(IRE)和FP1表达均显著高于CG组(P<0.05),而SG组DMT1和FP1表达与CG组和MG组相比均无显著差异。结论:适度运动可增加十二指肠铁转运蛋白表达,促进肠铁吸收,使血清铁增多、贮存铁重新分布,满足运动中机体对铁的需求;而过度运动使贮存铁大量消耗,从而易引发非贫血性铁缺乏。     

长时间大强度运动对大鼠骨骼肌BMP6 mRNA表达及铁贮存的影响

目的:研究长时间大强度运动对骨骼肌BMP6表达的影响,进一步阐明运动性低血色素的发生机制。方法:12只雄性Wistar大鼠体重(250±10)g,随机分为对照组和运动组,其中,对照组不运动,常规饲养;运动组进行4周、6 d/w、坡度为0、速度为30 m/min的递增负荷跑台训练。前2周每天训练1次,时间从1 min开始,后2周每天训练2次,每次递增2 min,最后1次训练时间达到71min。4周末取材。血细胞自动分析仪测定大鼠血红蛋白(Hb)等血常规;RT-PCR检测大鼠骨骼肌BMP6 mRNA和肝脏Hepcidin mRNA表达;原子分光光度计法测血清铁和骨髓铁含量。结果:(1)运动组Hb低于对照组(P<0.05);(2)运动组骨骼肌BMP6 mRNA表达高于对照组(P<0.05);两组肝Hepcidin mRNA表达无明显差异;(3)运动组骨髓铁贮存和血清铁均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:长时间大强度运动可引起大鼠骨骼肌BMP6表达增强,机体贮存铁和运载铁能力均降低,导致Hb合成减少,这可能是引发运动性低血色素的重要原因之一。     

运动对大鼠腓肠肌一氧化氮含量和铁转运蛋白表达的影响

目的观察游泳运动后大鼠腓肠肌一氧化氮(NO)含量及铁转运相关蛋白表达的变化,探讨运动对骨骼肌铁代谢的调节机制。方法20只雌性SD大鼠随机分为对照组和运动组(每天游泳1.5小时,6次/周),每组10只。实验10周后分别采用试剂盒测定两组大鼠腓肠肌和血清一氧化氮合酶(NOS)活性及NO含量,免疫组织化学方法测定腓肠肌二价金属离子转运体1(DMT1)、膜铁转运蛋白1(FP1)和转铁蛋白受体1(TfR1)的表达,分析其平均光密度变化。结果(1)运动组大鼠血清和腓肠肌NO含量和NOS活性均显著高于对照组(P<0.05);(2)运动组大鼠腓肠肌DMT1(IRE)和TfR1表达较对照组显著增加,FP1表达显著减少(P<0.05),而DMT1(non-IRE)表达无明显变化。结果提示运动可能通过增加NOS活性刺激NO合成增加,进而调节腓肠肌铁转运蛋白的表达,提高腓肠肌摄铁能力,以满足运动中机体对铁的需求。     

结蛋白和波形蛋白在运动性肌肉损伤和再生过程中表达及意义的实验研究

采用重复跑跳运动模型,利用图像分析的方法对结蛋白和波形蛋白表达进行量化,并结合肌肉组织病理、超微结构的变化,对运动性肌肉损伤和再生的病理过程进行综合分析.实验中发现肌肉损伤和再生的病理周期约为3-4周,这种周期特点与肌肉本身性质有关.在重复跑跳运动中,肌肉组织出现明显的适应性改变,但是这种适应性变化有一定限度.提示我们在训练过程中应该注意合理调整训练量和训练周期,防止肌肉损伤加重,促进肌肉再生,加速肌肉的功能恢复.     

高迁移率族蛋白1在大鼠动脉粥样硬化斑块中表达的研究

目的 观察动脉粥样硬化大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB-1）的蛋白及基因表达变化,以揭示与炎症相关的动脉粥样硬化发病机制.方法 免疫组织化学染色法观察大鼠主动脉血管动脉粥样硬化斑块内HMGB-1的蛋白表达情况,RT-PCR法检测大鼠主动脉血管HMGB-1的基因表达变化.结果 正常血管壁内存在HMGB-1表达,位于血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的细胞核内 动脉粥样硬化斑块内HMGB-1分布不均匀,炎症细胞浸润区和坏死区周边基质内表达明显增高,炎症细胞浸润区内以单核-巨噬细胞胞核、胞浆和间质内表达为主,后者成条带状分布于坏死区边缘.动脉粥样硬化斑块内HMGB-1水平均明显升高,与正常血管壁比较差异有显著性（P〈0.01）.结论 动脉粥样硬化大鼠主动脉血管HMGB-1的蛋白及基因表达均明显增强.     

食管癌中18F-氟脱氧葡萄糖摄取和葡萄糖转运蛋白1表达的相关性研究

食管癌的发生和发展涉及多个基因、分子水平的异常,是多个因素参与、共同作用的结果.18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)PET检测肿瘤细胞糖摄取在肿瘤诊断、分期、疗效评价、预后判断等方面的应用越来越广泛,而葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)在食管癌肿瘤细胞葡萄糖摄取和细胞增殖过程中起重要作用.     

食管癌中18F-氟脱氧葡萄糖摄取和葡萄糖转运蛋白1表达的相关性研究

食管癌的发生和发展涉及多个基因、分子水平的异常,是多个因素参与、共同作用的结果.18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)PET检测肿瘤细胞糖摄取在肿瘤诊断、分期、疗效评价、预后判断等方面的应用越来越广泛,而葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)在食管癌肿瘤细胞葡萄糖摄取和细胞增殖过程中起重要作用.     

食管癌中18F-氟脱氧葡萄糖摄取和葡萄糖转运蛋白1表达的相关性研究

食管癌的发生和发展涉及多个基因、分子水平的异常,是多个因素参与、共同作用的结果.18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)PET检测肿瘤细胞糖摄取在肿瘤诊断、分期、疗效评价、预后判断等方面的应用越来越广泛,而葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)在食管癌肿瘤细胞葡萄糖摄取和细胞增殖过程中起重要作用.     

耐力训练过程中大鼠心肌组织心钠素、脑钠素基因的表达

本研究采用定量反转录聚合酶链式反应技术,观察大鼠在11周中等强度耐力训练过程中心肌心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)基因表达的变化.结果显示,大鼠心室BNP mRNA表达在训练第24天、第3天和第77天均较对照组显著增强(P＜0.01),心房BNP mRNA表达无显著变化.大鼠训练第38天,心室ANP mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),其余各时相较对照组变化不明显,训练第3天心房ANP mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),其余各时相较对照组变化不明显.结论:在耐力训练过程中,心肌BNP基因表达与ANP不一致,心室BNP基因表达变化与心肌肥大的发展过程一致,提示BNP在运动性心肌肥大发展过程中起着一定的作用.     

六味地黄汤抗大鼠运动性疲劳实验研究

目的:观察滋阴清热补肾代表方六味地黄汤抗大鼠运动性疲劳的作用。方法:将48只SD大鼠随机分为对照组、单纯运动组、小剂量中药+运动组、大剂量中药+运动组。各运动组大鼠进行6周递增负荷游泳训练,两服药组分别以4g/kg·d和8g/kg·d剂量六味地黄汤灌胃。实验6周末处死大鼠,分别测定肝糖原、肌糖原和心肌、骨骼肌、肝脏SOD和MDA含量,取血浆测定皮质醇和睾酮含量。结果:各运动组大鼠肝糖原含量均较对照组低,但服药组大鼠肝糖原含量比单纯运动组明显增加,有显著性差异;两服药组大鼠肝脏、骨骼肌SOD活性高于单纯运动组,而MDA值低于单纯运动组;单纯运动组大鼠出现运动性血睾酮降低,而两服药组大鼠血睾酮水平与对照组相比无明显差异。结论:六味地黄汤可以提高运动大鼠肝糖原含量,改善自由基代谢,纠正降低的血睾酮水平,具有抗运动性疲劳的作用。     

血清中IL-7、PGLYRP-1、SOST的表达水平对类风湿性关节炎的诊断价值

目的 探讨血清中白介素7（interleukin 7,IL-7）、肽聚糖识别蛋白1（peptidoglycan recognition protein 1,PGLYRP-1）、硬骨素（sclerostin,SOST）的表达水平对类风湿性关节炎的诊断价值。方法 纳入2019年5月至2021年5月达州市中心医院收治的类风湿性关节炎患者82例为类风湿组、非类风湿性关节炎患者82例为非类风湿组、健康体检者82例为对照组。检测3组受试人员血清中IL-7, PGLYRP-1, SOST的表达量;用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）的曲线下面积（area under curve,AUC）评估IL-7, PGLYRP-1, SOST检测在类风湿性关节炎中的诊断意义。结果 类风湿组患者血清中的IL-7和SOST均低于非类风湿组和对照组（P<0.05）,类风湿组患者血清中的PGLYRP-1高于非类风湿组患者和对照组（P<0.05）。IL-7、PGLYRP-1、SOST单向诊断类风湿性组患者与非类风湿组患者的灵敏度分别为90%、86%、98%,特异度分别为72%、89%、61%。血清中IL-7, PGLYRP-1, SOST联合对类风湿性关节炎的诊断的的灵敏度为91.46%,特异度为75.61%,准确度为80.89%。此外,非条件logistic逐步回归分析结果显示血清中IL-7, PGLYRP-1, SOST的表达水平均是患类风湿关节炎的重要危险因素。结论 血清中IL-7、 PGLYRP-1、SOST的表达水平可作为诊断类风湿性关节炎的潜在指标。     

KIM-1及NGAL在苯酚烧伤致大鼠早期肾损伤中的表达水平及意义

目的 观察肾损伤分子-1（KIM-1）及中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）在苯酚烧伤致大鼠早期肾损伤中的表达水平,并分析其临床意义。方法 将48只SD大鼠随机分为对照组6只、实验组42只,对照组大鼠仅做背部脱毛处理,实验组大鼠建立苯酚烧伤模型,分别于烧伤后15、45 min以及2、4、8、16、32 h观察肾脏组织病理变化,并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测KIM-1、NGAL水平,肌氨酸氧化酶法检测血肌酐（Scr）水平,分析KIM-1、NGAL与肾损伤的相关性及其对肾损伤的诊断价值。结果 苯酚烧伤大鼠创面呈浅红色至棕红色、质地稍韧,且伴有全身抽搐及肉眼血尿等表现;苏木精-伊红（HE）染色结果显示,烧伤32 h内大鼠肾脏组织逐渐出现肾小管空泡样变性、蛋白质管型、肾小管扩张、肾小管坏死等病理改变;烧伤后32 h内大鼠血清KIM-1、NGAL水平均呈先升高后降低的趋势,其中KIM-1水平于烧伤后15 min开始升高,8 h到达高峰;NGAL水平于烧伤后2 h开始升高,16 h到达高峰;而Scr水平升高不明显;血清KIM-1、NGAL水平与早期肾损伤具有显著相关性（r=0.664、0.730,P均＜0.001）,两者联合检测对诊断早期肾损伤具有显著优势。结论 血清KIM-1及NGAL水平与苯酚烧伤致大鼠早期肾损伤程度密切相关,对诊断苯酚烧伤致大鼠早期肾损伤具有较高的临床应用价值。     

金属硫蛋白1M在非小细胞肺癌中的表达及其与患者预后的关系

目的 研究金属硫蛋白1M(metallothionein 1M,MT1M)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与肿瘤侵袭、迁移及预后的关系。方法 购得144对NSCLC组织和对应癌旁组织的组织芯片,采用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中MT1M的表达,分析其与NSCLC患者临床病理参数及预后之间的关系;并在体外细胞Transwell功能实验中分析MT1M对NSCLC细胞侵袭和迁移的作用。结果 MT1M在NSCLC组织中的表达明显低于癌旁组织(χ2=143.23,P<0.01),并且NSCLC组织中MT1M的表达与淋巴结转移及TNM分期相关(χ2分别为18.66、12.73,P均<0.01),MT1M抑制NSCLC细胞的侵袭和迁移。结论 MT1M在NSCLC组织中异常低表达,其异常低表达可能与NSCLC患者肿瘤转移相关,并且提示NSCLC患者预后不良。     

骨关节炎和类风湿性关节炎滑膜中IL-1受体拮抗剂三种同工型的表达及其生物学意义

白介素 1受体拮抗剂 (IL - 1Ra)以三种同工型的形式存在 ,即 17kDa的分泌型IL - 1Ra(sIL - 1Ra)、18kDa的细胞内IL - 1Ra(icIL - 1RaI)及 16kDa的细胞内IL - 1Ra(icIL - 1RaII)。本实验采用免疫组化和反转录PCR的方法 ,观察了IL - 1Ra的三种同工型在 3例骨关节炎 (OA)和 3例类风湿性关节炎 (RA)患者关节滑膜中的表达和分布情况。免疫组化结果显示OA和RA的滑膜中IL - 1Ra高度表达 ,主要集中在滑膜的衬里层细胞、炎症浸润细胞以及血管内皮细胞中 ;RT -PCR结果提示OA滑膜的三个标本中均只存在 16kDa的icIL - 1RaII型 ,而RA的三个滑膜标本中有两个存在IL - 1Ra的三种同工型 ,还有一个标本只存在 18kDa的icIL - 1RaI型。因此 ,OA和RA的滑膜中均高度表达IL -1Ra,但存在的形式和发挥作用的方式可能有所不同 ,推测与这两种疾病的发病机制有关。     

含人血红素氧化酶-1重组11P型腺病毒的构建及体外表达

目的构建含人血红素氧化酶-1重组11P型腺病毒,并使之转染人BJ细胞,测定其转染效率及目的蛋白表达情况。方法PCR目的基因序列,克隆成穿梭载体后转化大肠杆菌,扩增提取质粒,鉴定正确后与骨架载体重组,鉴定重组质粒正确并无野毒后在293细胞中扩增,CsCl密度梯度离心法纯化腺病毒。按不同梯度MOI值感染成纤维细胞,根据绿色荧光强度检测其转染效率。1周后用免疫组化方法检测目的蛋白HO-1表达情况。结果对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含人血红素氧化酶-1(HO-1)的11P型重组腺病毒构建成功,纯化后病毒滴度达到1.0×1010pfu/ml。通过免疫组化检测可在成纤维细胞中观察到胞浆内有棕褐色目的蛋白阳性颗粒表达。结论可以成功构建含人血红素氧化酶-1(HO-1)的11P型重组腺病毒并表达目的蛋白。     

高住低练对大鼠肝组织低氧诱导因子-1α蛋白表达的影响

目的:探讨不同持续时间低氧后运动训练(高住低练)对大鼠肝组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只:安静对照组不训练,不进行低氧暴露;两低氧暴露组和两高住低练组每天分别进行8小时或12小时低氧暴露(氧浓度12.6%,相当于海拔4000m);同时,训练对照组和两高住低练组每天均以25m/min的速度进行跑台训练1h,每周5天,共4周。采用免疫组织化学的方法检测各组大鼠肝组织HIF-1α的蛋白表达,并采用计算机显微图像分析系统进行HIF-1α定位及阳性表达定量分析。结果:与安静对照组相比,不论是单纯低氧暴露组、单纯训练组或者高住低练组HIF-1α蛋白表达均显著增加(P<0.05);12小时低氧暴露组HIF-1α蛋白表达灰度值比8小时稍增高,无统计学意义(P>0.05),而阳性物质表达面积和PI显著增加(P<0.05);与训练对照组比较,8小时和12小时高住低练组HIF-1α蛋白表达增加,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);8小时高住低练组HIF-1α蛋白表达比8小时低氧暴露组显著增加(P<0.05),12小时高住低练组HIF-1α蛋白表达比12小时低氧暴露组显著增加(P<0.05,P<0.01);与8小时高住低练组相比,12小时高住低练组HIF-1α蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论:(1)不论单纯低氧暴露、单纯训练或者高住低练均能促进肝组织HIF-1α蛋白表达增加;(2)高住低练过程中肝组织HIF-1α蛋白表达高于单纯低氧暴露或单纯训练方式,不同持续时间低氧后运动对大鼠肝组织HIF-1α蛋白表达的影响不同。