荧光染色法测定生物制品中DNA残留量的研究

目的：对荧光染色法测定生物制品中的 DNA残留量进行初步的研究和分析,确定该方法用于 DNA质量控制的可行性。方法依据《中国药典》2010年版三部附录ⅨB《外源性DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果该方法的线性、重复性、回收率均能满足生物制品中DNA残留量检测的要求,如果用作生物制品行业适用的检测方法,应制备统一的DNA标准品。结论该方法具有简便、快速、可定量分析等优点,可基本满足生物制品行业对DNA残留量质量控制的要求。     

乙型肝炎及丙型肝炎DNA疫苗研究进展

ＤＮＡ疫苗是目前疫苗研究的热点之一，已经构建的乙型及丙型肝炎病毒ＤＮＡ疫苗主要以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）包膜蛋白及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗为主，且大多可诱导高水平特异性体液及细胞免疫应答，ＨＢＶ及ＨＣＶＤＮＡ疫苗的高效，简便，价廉，安全，多价等优点，将有助于其推广应用，在乙型和丙型肝炎及其并发症的防治中起重要作用。     

荧光定量PCR法测定重组人干扰素α2b原液中宿主DNA的残留

目的建立重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量测定的方法并进行验证,用于对该产品的质量控制。方法通过wako DNA提取试剂盒提取干扰素原液中的宿主残留DNA,再利用SYBRGreen染料法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量分析。对建立的方法进行引物特异性以及结果准确性和精密性的验证,同时对企业提供的3批干扰素原液中的残留DNA测定。结果该方法检测假单胞菌基因组DNA的最低准确定量浓度可达12 fg/μL,DNA含量在12 fg/μL~120 ng/μL范围内线性良好,标准曲线的相关系数r=0.998;wako DNA提取试剂盒提取不同量的加标样品回收率均在50%~200%范围内;该方法检测3批干扰素原液的DNA残留量均低于标准限度,符合《中国药典》三部2010年版和2015年版中关于假单胞菌产重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量的要求。结论 wako DNA提取试剂盒能解决干扰素原液中样品前处理的技术难点,与定量PCR法结合能够简便、快速、准确地对干扰素原液中残留的DNA定量测定。     

酵母型重组乙型肝炎疫苗成人免疫效果观察

乙型肝炎（乙肝）是严重影响人们身体健康的传染病。为了控制乙肝的流行,目前己广泛使用乙肝疫苗进行免疫,以预防乙肝的发生和流行。乙型肝炎疫苗是预防和控制乙型肝炎病毒感染和流行的最有效措施,自1995年重组酵母乙型肝炎疫苗在我国批量生产使用至今,在阻断乙型肝炎病毒母婴传播、防止儿童乙型肝炎病毒感染方面已取得显著效果,但其免疫效果受多种因素的影响。为了了解重组乙肝疫苗接种后的免疫应答情况,郑州市疾病控制中心对郑州市健康人群进行了全程足量接种和血清检测,结果如下：     

酵母重组乙型肝炎疫苗的主要不良反应

自九十年代初以来，酵母重组乙型肝炎疫苗的使用越来越广泛，在此疫苗问世后的十年间，接种乙型肝炎疫苗的成人和婴幼儿偶尔发生严重不良反应，本文对以前发表的资料进行了综合，结果表明，不良反应表现为速发型反应（过敏反应和荨麻疹）和迟发型反应（皮肤，风湿性，脉管性（系统性红斑狼疮和肾小球肾炎），血液学，眼科和神经系统反应）。本文还对致病机理进行了讨论。     

酵母重组乙型肝炎疫苗的主要不良反应

自九十年代初以来,酵母重组乙型肝炎疫苗的使用越来越广泛。在此疫苗问世后的十年间,接种乙型肝炎疫苗的成人和婴幼儿偶尔发生严重不良反应。本文对以前发表的资料进行了综合。结果表明,不良反应表现为速发型反应(过敏反应和荨麻疹)和迟发型反应(皮肤、风湿性、脉管性(系统性红斑狼疮和肾小球肾炎)、血液学、眼科和神经系统反应]。本文还对致病机理进行了讨论。     

HBV DNA疫苗治疗慢性乙型肝炎的实验研究进展

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重危害人们生命和健康的疾病之一,目前对此尚我特效药物,HBV DNA疫苗的出现为慢性HBV感染的治疗提供了新的途径,本文综述了最近几年治疗性HBV DNA疫苗的实验动物研究中的一些进展。     

新型乙型肝炎疫苗

联合疫苗是简化婴儿乙型肝炎疫苗接种的重要步骤,目前正在进行临床评估。为减少注射次数,正在对大剂量疫苗两剂免疫程序进行评价,包裹于可降解的生物多聚体微粒的疫苗（缓释疫苗）单剂接种已在动物中作了检测。目前正在研究增强现有疫苗的免疫原性。一种方法是研制含HBsAg完整前S1和前S2区或这些区中免疫原性表位以及小表面蛋白的重组疫苗;几种疫苗已在进行临床试验。今后的研究包括在细菌（如沙门菌）中表达HBsAg表位用于口服接种或制备乙型肝炎DNA疫苗。     

用乙型肝炎疫苗免疫治疗慢性乙型肝炎

在高度流行区,与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染有关的慢性肝病和肝细胞癌是最严重的人类健康问题.目前控制慢性肝炎的治疗方法如α干扰素(IFN-α)及lamivudine的疗效并不令人满意.疫苗接种将成为低成本、高效益的治疗方法.选择性HBV包膜或核壳疫苗在T、B细胞应答缺陷的HBV携带者中是否具有诱导或扩大T、B细胞应答的免疫原性,目前正在动物模型及临床试验中进行研究.     

新型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的免疫原性研究

目的 观察新型乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原中蛋白（MHBs)核酸疫苗的免疫原性。方法 以新型人体应用载体质粒pSW3891构建MHBs核酸疫苗（pSW3891/MHBs/adr)，对照组和实验组Balb/c小鼠分别基因枪法免疫对照载体质粒（pSW3891)和MHBs核酸疫苗，采用酶联免疫吸附试验检测抗HBs,LDH释放测定法检测小鼠特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性。结果 MHBs核酸疫苗可在体外高效表达，免疫小鼠后可产生高滴度抗HBs，血清阳性终点滴度达1：97200,小鼠脾细胞HBs特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性达78.81%。结论 新型MHBs核酸疫苗在Balb/c小鼠实验中表现出良好的体液和细胞免疫原性。     

大学生乙肝免疫应答及其影响因素的研究

乙肝疫苗免疫接种是预防控制乙肝最有效的手段之一,但免疫后仍有5%～10%的患者不能产生足够的表面抗体而成为乙肝易感者[1]。本研究对宜昌市在校大学生进行调查,旨在探讨一般人群接种乙型肝炎疫苗后的免疫应答情况和相关影响因素。     

国产重组酵母乙肝疫苗对成人的免疫效果

目的:了解国产重组酵母乙肝疫苗(YDV)5μg和10μg对成人的安全性和免疫学效果.方法:199例研究对象随机分为2组,分别接受YDV 5μg和10μg,每人每月肌内注射1次,共3次(全程免疫)后1个月,进行免疫效果观察.检测血清乙肝表面抗体阳转率和乙肝表面抗体平均几何滴度(GMT),并观察2组的不良反应.结果:研究对象中未发现中、重度的局部和全身不良反应.接种5μg和10μg疫苗组的乙肝表面抗体阳转率分别为89.25%及98.11%;乙肝表面抗体GMT分别为18.88及54.47mIU·mL-1,2组的GMT差异有显著性(P＜0.05).结论:YDV成人免疫是安全的,10μg YDV抗乙肝表面抗体的GMT明显高于5μg YDV.     

门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光法检测

目的建立门冬胰岛素外源性DNA残留量的荧光检测方法,用于门冬胰岛素的质量控制。方法参照《中国药典》三部附录及相关资料方法,对门冬胰岛素外源性DNA残留的荧光检测法进行研究,确定检测方法的最适条件,并对方法的线性、加样回收率、精密度、耐用性、重复性等方面进行方法学验证。结果建立了门冬胰岛素原料药中外源性DNA残留量的荧光检测方法,并进行了方法学验证。结论该方法操作简便、准确快捷,且无需标准宿主DNA,可用于门冬胰岛素质量标准中外源性DNA残留量的检测方法。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其与血清标志物的关系探讨

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ- PCR)方法定量检测血清中乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV)的数量及探讨其与 HBV标志物 (HBV M)表现模式的关系 ,以指导临床。方法　共 2 4 4份临床血清标本 ,HBV DNA定量采用荧光定量 PCR分析系统 ,HBV M采用 EL ISA法。结果　经 FQ- PCR检测 ,99例 HBs Ag(+) / HBe Ag(+) / HBc Ab(+)的标本 ,其血清标本 HBV DNA亦全部阳性 ,平均 HBV DNA拷贝数为 1.82× 10 7copies/ ml;96例 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本 ,其 HBV DNA检出率为 6 6 .7% (6 4例 ) ,平均拷贝数为 1.82× 10 4 copies/ m l;11例 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本其 HBV DNA检出率为 6 3.6 % (7例 ) ,平均拷贝数为 7.94× 10 4 copies/ ml。结论　血清 HBV DNA水平与 HBV M表现模式有关 ,HBs Ag (+) / HBe Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 HBV DHA值显著高于 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本和 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 ,提示 HBs Ag与 HBe Ag的存在影响 HBV DNA水平。 FQ- PCR能实现准确定量 ,可以检测 HBV的真实感染和复制情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义     

Heat-inactivated HBsAg as a vaccine against hepatitis B

Hepatitis B (HB) vaccine was prepared as follows: hepatitis B surface antigen (HBsAg) was purified from pooled plasma positive for HBsAg (subtype adw2), boiled for 90 s at 101°C and adsorbed to aluminum hydroxide; subsequently, 1 ml doses, containing 0.15 μg HBsAg, were filled off and pasteurized for 10 h at 65°C. Potency studies of the vaccine were done in rabbits, and tests for safety were carried out in three non-immune chimpanzees and four human volunteers. Neither hepatitis (B) nor autoimmune phenomena were observed in any of the vaccinated chimpanzees or humans, whereas all rabbits and chimpanzees and three of the four humans formed anti-HBs antibody.     

基因乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白阻断乙型肝炎母婴传播的研究

目的：探索阻断母婴乙肝病毒垂直传播的最佳免疫方案。方法：对本研究的所有乙肝病毒标记物阳性的孕妇于妊娠晚期每月肌注乙肝高价免疫球蛋白200IU,共3次,所有新生儿按预先设计方案给予不同的主动加被动免疫。结果：本研究的乙肝病毒母婴垂直传播阻断率显著高于以往文献报道的阻断率。但乙肝疫苗皮内注射组与肌肉注射组之间的HbsAg阳性率、HbsAb阳性率及抗体滴度差异无统计学意义。结论：孕妇妊娠晚期乙肝高价免疫球蛋白被动免疫,继之所生婴儿基因乙肝疫苗5μg/次（0、1、6方案）加大剂量乙肝高价免疫球蛋白200IU／次（0、1／2、1方案）联合免疫方案可明显提高乙肝病毒母婴垂直传播阻断率。     

大学生接种不同剂量乙肝疫苗后免疫效果观察

目的观察评价重组酵母乙肝疫苗(YDV)接种后的安全性和免疫学效果。方法对某大学两组采用不同免疫剂量的新生(Ⅰ组:0.5μg×3和Ⅱ组:10μg×3),均按0、1、6个月程序作乙肝免疫注射,于第一针免疫注射后第12个月的HBsAb阳性率情况作统计分析。结果两组HBsAb阳转率分别是:Ⅰ组76.33%(329/431),Ⅱ组91.07%(367/403)。χ2=32.74,P<0.01,两组对比有显著性差异。两组在免疫注射后,局部和全身均未见不良反应。结论YDV对成人具有良好的免疫原性和安全性。采用较大剂量YDV对成人的免疫效果优于低剂量组。     

A review of multiple approaches towards an improved hepatitis B vaccine

Background: Hepatitis B is a DNA virus that can cause liver inflammation, cirrhosis, and cancer in chronically infected and symptomatic carriers. Antiviral treatments are usually limited in their effectiveness in treating the disease states. Vaccination against hepatitis B in pediatric and adolescent populations has proven to be a generally effective means for preventing diseases that could be potentially caused by this virus. Some 5 – 10% of the vaccinees do not develop protective immunity against the virus. Therefore, a significant amount of effort has been made in many research laboratories across the world to increase the potency of the vaccine by various innovative means, e.g., increasing the immunogenicity of the antigen or through introduction of novel adjuvants that elicit strong humoral and cell-mediated immune responses. Objectives/methods: The objective of this review is to highlight publications of significant developments that have been made over the past decade and efforts that are continuing towards producing an improved vaccine. A number of patents that protect novel hepatitis B vaccine formulations, including those claiming novel hepatitis B core antigen formulations and combinations of a vaccine with small molecule therapeutics, are discussed. Conclusion: There have been promising developments in the area of new adjuvants and delivery systems. The practical need for reducing the total number of childhood vaccinations has driven development of, and patent filings on, multivalent and combination vaccine formulations in which the hepatitis B vaccine is included as one component. Efforts and some advances have also been made in the critical area of therapeutic application of the vaccine. The existence of a large population of already infected patients and the inadequacy of most of the current antiviral drugs against hepatitis B diseases have also inspired efforts to produce a vaccine that would be efficacious in clearing an exiting infection.     

重组(酵母)乙型肝炎疫苗免疫效果观察

目的 观察重组(酵母)乙型肝炎(乙肝)疫苗在新生儿接种后的免疫效果,探究乙肝疫苗再免的需求.方法 对上海市黄浦区1997年出生并接种合格乙肝疫苗的儿童,在免疫后1、3、5、7年采血随访观察,检测HBsAg、抗-HBs和抗-HBc,并开展急性肝炎流行病学监测.  结果 7年问,免疫人群HBsAg阳性率在1.5%上下波动,平均为1.47%(95%可信区间为0.61%～2.33%),与免疫前同一地区乙肝流行病学调查本底资料比较,乙肝疫苗保护效果为84.03%(95%可信区间78.92%～89.60%).1997年接受乙肝疫苗免疫人群中,无急性乙肝发病.  结论 新生儿重组乙肝疫苗免疫后效果良好,目前无需考虑再免.