水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放TFPI及表达TF的影响

目的：探讨水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放组织因子途径抑制物（TFPI）及表达组织因子（TF）的影响。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）随机分为5组,分别给予不同处理,培养12 h后,取上清液测定 TFPI活性,取细胞冻融液测定TF活性。结果凝血酶可促进血管内皮细胞表达TF,较空白对照组明显增高（P〈0.01）,水蛭各剂量组与凝血酶刺激组比较血管内皮细胞表达TF明显降低（P〈0.01）。与空白对照组比较,凝血酶刺激组可抑制血管内皮细胞释放 TFPI（P〈0.01）,水蛭各剂量组与凝血酶刺激组比较能明显促进血管内皮细胞释放 TFPI（P〈0.01）。结论水蛭提取液能抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达TF,并对抗凝血酶抑制VEC释放TFPI,其作用机制可能与水蛭抗凝、抗血栓形成以及对心脑血管疾病的治疗作用有关。     

全蝎纯化液对内毒素休克大鼠TF、TFPI及TNF的影响

目的 探讨全蝎纯化液(PLIS)对内毒素休克大鼠的保护作用.方法 将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、PLIS大剂量组、PLIS中剂量组、PLIS小剂量组,每组10只.静脉注射脂多糖(LPS),复制大鼠休克模型.PLIS各剂量组于注射PLIS后15 min注射LPS,空白组注射等量生理盐水.监测LPS注射前及注射后60 min、90 min、180 min大鼠平均动脉压(MAP).LPS注射3 h后颈总动脉取血,测定血浆组织因子(TF)、肿瘤坏死因子(TNF)、组织因子途径抑制物(TFPI)含量.结果 全蝎各剂量组在注入LPS后,MAP下降不明显,TF、TNF含量显著降低(P＜0.01),TFPI含量差异无统计学意义(P＞0.05),但TFPI/TF比值各剂量组明显高于模型组(P＜0.01).结论 PLIS可能通过抑制TF和TNF升高,而对大鼠内毒素休克有保护作用.     

全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的观察不同浓度全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞(VEC)释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性的影响。方法以凝血酶和不同剂量的全蝎纯化液同时作用于培养的人脐静脉内皮细胞(VEC-340),12h后收集细胞液测定t-PA和PAI活性。结果与空白组比较,凝血酶组t-PA活性降低,PAI活性增高,差异有统计学意义(P0.01),与凝血酶组比较,全蝎大剂量、中剂量、小剂量组t-PA活性均增高,PAI活性降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论凝血酶对VEC-340细胞具有损伤作用,可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。全蝎纯化液可促进血管内皮细胞释放t-PA,抑制PAI分泌,对纤溶平衡具有调节作用。提示这可能与全蝎纯化液增加血管内皮细胞抗血栓能力有关。     

川芎嗪抑制凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的机制

目的 以前的研究已证实川芎嗪对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞株表达组织因子具有抑制效应.本实验进一步探讨一氧化氮及核因子KB途径在其中所发挥的作用机制.方法 人脐静脉内皮细胞细胞培养采用RPMI-1640完全培养基;一期凝固法测总促凝活性;组织因子mRNA采用逆转录聚合酶链式反应方法检测;免疫组织化学染色用于研究核因子KB的移位.结果 一氧化氮合酶途径阻断剂硝基左旋精氨酸甲基乙酯单独和人脐静脉内皮细胞细胞孵育时对细胞表达组织因子mRNA和总促凝活性没有明显的影响(P>0.05);硝基左旋精氨酸甲基乙酯、川芎嗪和凝血酶三者共同孵育时,川芎嗪抑制凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞细胞组织因子表达的作用被取消(P<0.05).免疫组织化学染色显示人脐静脉内皮细胞细胞经凝血酶处理45 min后,细胞核内棕黄色着色明显,但人脐静脉内皮细胞细胞经川芎嗪处理15 min后,再加入凝血酶作用45 min,核内棕黄色着色则明显减少.结论 一氧化氮途径参与了川芎嗪抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达组织因子的作用;川芎嗪能够通过影响核因子KB的活化来抑制组织因子的表达.     

胎盘早剥产妇母血及脐血TF、TFPI水平检测及意义

目的检测胎盘早剥产妇母血及脐血中组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）水平,探讨其对凝血功能的影响及临床意义。方法选择40例胎盘早剥产妇（观察组）及40例正常足月妊娠产妇（对照组）,采用ELISA法检测两组母血及脐血中TF、TFPI水平。结果观察组母血及脐血中TF水平均高于对照组,TFPI水平均低于对照组,P均〈0.05。结论TF和TFPI是体内重要的凝血和抗凝血因子,在胎盘早剥凝血过程中有重要意义。     

僵蚕抗凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的研究

目的研究僵蚕抗凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的影响。方法将不同浓度的僵蚕注射液（600μg/mL,300μg/mL,150μg/mL）加入凝血酶诱导的血管内皮细胞中,培养12h后收集细胞液,观察不同浓度的僵蚕注射液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放作用的影响。结果僵蚕大、中、小剂量组较凝血酶组均能明显增加组织型纤溶酶原激活物（t-PA）活性,分别为（0.460±0.010）U/mL,（0.457±0.019）U/mL,（0.366±0.014）U/mL（P〈0.01）;同时也可降低纤溶酶原活化素抑制物（PAI）活性,降低血管性假血友病因子（vWF）含量,与凝血酶组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论僵蚕注射液可以明显抑制凝血酶诱导的内皮细胞释放作用,此作用与僵蚕的抗凝作用有关。     

急性冠脉综合征患者冠脉介入术前后血浆TF和TFPI的变化及临床意义

血栓形成是急性冠状动脉综合征(ACS)以及冠脉介入术后再狭窄发生的主要病理生理基础[1,2].组织因子(TF)是凝血过程中主要的启动因子,其与凝血因子VⅡ(FVⅡ)形成TF-FVⅡa复合物后,即可启动下游凝血瀑布反应[3].组织因子途径抑制物(TFPI)则可反馈性抑制TF-FVⅡa复合物,并有活化凝血因子Ⅹ(FⅩa)的作用,从而对凝血的始动环节进行负性调节[4].因此,TF/TFPI平衡的破坏是冠脉内血栓形成的关键.本研究通过比较急性心肌梗死(AMI)和不稳定型心绞痛(UAP)患者在冠脉介入术前后血浆中TF和TFPI水平变化,探讨血浆TF和TFPI对ACS诊断和预后的临床价值.     

外源性硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导组织因子和组织因子途径抑制物表达的影响

目的研究外源性硫化氢对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别以不同浓度NaHS(25、50、100及200μmol/L)和50 mg/L ox-LDL共孵育,RT-PCR和ELISA分别检测TF和TFPI mRNA表达和蛋白含量。结果用50mg/L ox-LDL孵育HUVEC 24 h后,TF mRNA表达上调8倍,蛋白含量增加7倍(P<0.01);而TFPI mRNA表达降低73%,蛋白含量减少65%(P<0.01)。用25、50、100及200μmol/L NaHS预孵育HUVEC 1 h,再与ox-LDL共同孵育,与ox-LDL组相比,加入不同浓度NaHS组TF mRNA分别降低12%、31%、63%和80%(P<0.05),蛋白含量分别降低13%、30%、62%和77%;TFPI mRNA表达分别升高0.6、1.2、2.0和2.6倍,蛋白含量分别升高0.3、0.7、1.1和1.6倍。结论 NaHS能抑制ox-LDL对内皮细胞TF表达的诱导作用,减轻ox-LDL对内皮细胞TFPI表达的抑制作用。     

尼古丁对血管内血栓形成的影响

目的 研究不同条件尼古丁介导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物-2(TFPI -2)的影响.方法 选用第4代～6代HUVECs,接种于24孔培养板中,随机分为5组.实验组分别于培养液中加入不同体积的尼古丁,使其终浓度分别为0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L及100μmol/L;对照组以相同体积的PBS液代替尼古丁同步培养,孵育12 h后收集各组细胞的上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析(ELISA)法测定各组上清液中TFPI -2的含量.结果 10 μmol/L、100 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);0.1 μmol/L、1 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05); 100 μmol/L尼古丁组较10 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 尼古丁可以损伤血管内皮细胞,引起TFPI -2蛋白表达降低,影响其凝血功能,从而增加血栓的发生几率.     

Comparative Effects of Unfractionated Heparin and Low Molecular Weight Heparin on Vascular Endothelial Cell Tissue Factor Pathway Inhibitor Release: A Model for Assessing Intrinsic Thromboresistance

Objectives: The purpose of our study was to characterize tissue factor pathway inhibitor (TFPI) release from human vascular endothelial cells following daily exposure to varying concentrations of unfractionated heparin (UFH) and low molecular weight heparin (LMWH). Background: A rebound increase in ischemic/thrombotic events, including myocardial infarction and cardiovascular death, has been observed after the abrupt cessation of UFH. In a single center pilot study of patients with acute coronary syndromes (ACS) we reported that thrombin generation was evident within one (1) hour of UFH cessation, increased progressively over the subsequent 24 hours, correlated directly with factor VII activity and inversely with TFPI (concentration and activity). Methods: Human umbilical vein endothelial cells were grown to confluence and incubated with varying concentrations of UFH or dalteparin, a low molecular weight haparin, for up to 144 hours. Daily samples of the cells supernatant were obtained and assayed for TFPI. Cellular reserve and responsiveness to recombinant endothelial cell growth factor (rEGF) stimulation were determined at 168 hours. Results: In low concentrations (0.5 U/mL) UFH caused a progressive rise in TFPI concentration with a peak level of 6.36 ± 0.5 ng/10⁵ cells at 24 hours. By 72 hours of daily exposure, the levels declined to below control values and TFPI release following rEGF stimulation was reduced by approximately 60% compared to control (1.93 ± 0.42 vs 4.3 ± 0.78 ng/10⁵ cells; p = 0.001). Initial endothelial cell release and rate of decline were more robust with high concentrations of UFH (5.0 U/ml). TFPI levels were above control values at each sampling time point up to 120 hours and cellular responsiveness to stimulation was preserved with dalteparin (compared to UFH) (p < 0.001). Conclusions: Thrombin generation and clinical events that occur during treatment with UFH and following its abrupt cessation may represent an acquired state of transiently impaired thromboresistance to the tissue factor-VIIa complex. The differing effects of UFH and LMWH on vascular endothelial cell TFPI synthesis, release and reserve with prolonged administration require further investigation.     

缺氧及外源一氧化氮对肺动脉内皮细胞 PDGF-A 链和-B 链基因表达的影响

目的观察肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）旁分泌及其调节在缺氧性肺动脉高压中所起的作用。方法采用核酸分子杂交技术，分析缺氧时小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）表达ＰＤＧＦ－Ａ链、－Ｂ链ｍＲＮＡ的变化及外源一氧化氮（ＮＯ）对其表达的调节作用。结果缺氧（２．５％Ｏ２和０％Ｏ２）早期（１．５，３ｈ）能非常显著地增加肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ａ，ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．００１，ｖｓ常氧组）；缺氧６～４８ｈ与常氧组相比ＰＤＧＦ－Ａ链无明显差别，ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ表达增加（Ｐ＜０．０５）。外源ＮＯ能非常显著地降低常氧肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ａ链（Ｐ＜０．０１）和常氧ＰＤＧＦ－Ｂ链（Ｐ＜０．００１）ｍＲＮＡ的表达水平，而不能明显地抑制缺氧ＰＤＧＦ－Ａ，－Ｂ链的表达。结论缺氧可能一方面通过刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ基因表达加强，一方面减弱ＮＯ对ＰＤＧＦ基因表达的抑制作用，从而参与缺氧性肺动脉高压的肺血管收缩反应加强和肺血管结构改建的发生过程。     

血府逐瘀口服液对大鼠缺氧-再给氧损伤心脏微血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的 观察血府逐瘀口服液对心脏微血管内皮细胞缺氧／复氧损伤中黏附分子表达的影响。方法 通过心脏微血管内皮细胞体外培养技术，建立缺氧／复氧损伤模型，模拟心肌缺血再灌注损伤。用免疫细胞化学法和图像定量分析系统，观察心脏微血管内皮细胞的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达变化。结果大鼠心脏微血管内皮细胞缺氧4h后ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达较对照组升高，但无统计学意义（P〉0．05），再给氧6h、12h后ICAM-1和VCAM一1的表达较对照组明显增高（P〈0．01）。血府逐瘀口服液能显著降低ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达，这种作用随着剂量的增加而增强。结论 血府逐瘀口服液可通过降低心脏微血管内皮细胞的ICAM-1和VCAM-1表达，减少白细胞浸润，从而减轻缺血再灌注损伤中的炎性反应对心功能造成损害。