NT-3基因转染对庆大霉素耳毒性的拮抗作用

目的探讨NT-3基因转染对豚鼠庆大霉素耳中毒的保护作用。方法采用阳离子脂质体介导的方法,将携带外源性基因NT-3的重组质粒pIRES2-EGFP-NT-3与阳离子脂质体复合物10μl注入豚鼠左侧耳蜗(设为Ⅰ组),术后3d开始给予庆大霉素肌肉注射(120mg/kg),连续注射14d,分别于停药后1d、2w进行ABR及DPOAE测试,随即处死动物,耳蜗取材,观察耳蜗毛细胞受损情况,并在透射电镜下观察耳蜗传入神经超微结构改变。实验同时设空载体组(Ⅱ组)及正常对照组(Ⅲ组)。结果庆大霉素停药1d时,与正常对照组相比,空载体组DPOAE幅值显著下降(P<0.05),停药2w时,DPOAE幅值下降更显著,尤其在1、1.4及6kHz处幅值下降明显(P<0.05);NT-3转染组在停药1d时,仅高频DPOAE幅值下降(P<0.05),停药2w时,DPOAE幅值下降减缓(P>0.05);各实验组ABR阈值与DPOAE幅值改变相似;荧光显微镜下见庆大霉素停药1d时,NT-3转染组第一排外毛细胞出现部分缺失,庆大霉素停药2w时,第一排外毛细胞缺失加重,并出现少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失;空载体组在庆大霉素停药1d时,即出现第一排外毛细胞严重缺失,少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失,停药2w时外毛细胞缺失进一步加重;透射电镜下见庆大霉素停药1d时,空载体对照组Ⅰ型及Ⅱ型神经纤维轴索内微管排列出现紊乱,少量崩解,髓鞘板层结构尚可,Ⅰ、Ⅱ型神经元细胞胞体内偶可见少量髓鞘样结构,停药2w时,传入神经退行性改变明显加重,神经纤维崩解,神经元出现大量空泡化。而NT-3转染组在损伤的早期,传入性神经从末梢到神经元仅出现轻微的改变,在庆大霉素停药2w时,神经退行性改变略加重,但仍显著轻于对照组。结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染可减轻庆大霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞、传入神经及螺旋神经节细胞的毒性作用。     

神经营养因子3基因转染对庆大霉素性耳聋保护作用的实验研究

目的 :探讨阳离子脂质体介导的神经营养因子 3(NT3)基因转染对豚鼠庆大霉素性耳聋的保护作用。方法 :将携带外源性基因NT3的重组真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3与阳离子脂质体复合物注入豚鼠耳蜗 ,术后给予庆大霉素肌肉注射 (12 0mg/kg) 14d ,分别于停药后 1d、2周进行听性脑干反应 (ABR)及畸变产物耳声发射 (DPOAE)测听并观察转染基因在耳蜗的表达和分布及耳蜗毛细胞受损情况。结果 :NT3组DP gram幅值降低较对照组明显减轻 ,ABR阈值升高亦无对照组显著 (P <0 .0 5 )。耳蜗基底膜FITC phalloidin染色见NT3组耳蜗毛细胞的缺失较对照组明显减轻。结论 :阳离子脂质体介导的NT3基因转染对豚鼠庆大霉素性耳聋具有一定程度的保护作用。     

白藜芦醇拮抗庆大霉素耳毒性的实验研究

目的观察白黎芦醇（resveratrol,Res）对抗庆大霉素耳毒性的作用.方法将豚鼠随机分为庆大霉素（gentamicin, GM）组、白藜芦醇剂量I＋GM组 （ResI ）、白黎芦醇剂量II＋GM组（ResII）、白黎芦醇剂量III＋GM组（ResIII）及对照组.采用听性脑干反应（ABR）、耳蜗铺片及透射电镜技术,观察用药前后各组动物听阈及耳蜗毛细胞形态学改变,并检测血清丙二醛、超氧化物岐化酶含量、肾功能以及庆大霉素血药浓度.结果 ResIII组血液中丙二醛较GM组明显减少（P〈0.05）,GM＋Res各组超氧化物歧化酶活性均明显高于GM组（P〈0.05）,同时GM组1、8 kHz ABR 4 周平均阈移与ResIII剂量组间差异显著（P〈0.05）.形态学改变与听力变化一致.Res对庆大霉素血药浓度没有影响.结论大剂量Res能有效减轻GM的耳毒性作用,且不影响庆大霉素的抗菌作用.     

水杨酸钠中耳灌注对庆大霉素耳毒性的防护作用

目的 观察水杨酸钠经中耳局部灌注给药对庆大霉素耳毒性的防护作用。方法 24只健康杂色豚鼠均接受圆窗置管术，然后随机分成3组：Ⅰ组为生理盐水对照组；Ⅱ组为庆大霉素组，腹腔注射庆大霉素，经听泡灌注生理盐水；Ⅲ组为庆大霉素加水杨酸钠组，腹腔注射庆大霉素，经听泡灌注水杨酸钠。观察各组给药前后听性脑干反应阈的变化和给药后4周毛细胞损失情况。结果 听泡置管术后ABR反应阈无明显改变；给药后2周和4周，庆大霉素组ABR反应阈较庆大霉素加水杨酸组显著增高（P〈0．01），对照组ABR反应阈无显著变化。耳蜗铺片、毛细胞计数显示庆大霉素组外毛细胞严重缺失，以底回最明显，庆大霉素加水杨酸钠组外毛细胞损失较庆大霉素组轻（P〈0．05）。对照组无明显外毛细胞缺失。结论 水杨酸钠经中耳局部给药途径可减轻庆大霉素所致听功能损害和毛细胞缺失，可在一定程度上有效预防庆大霉素的耳毒性。     

FK506拮抗庆大霉素耳毒性的实验观察

目的 初步探讨FK506拮抗庆大霉素耳毒性的效果。方法 通过分别检测庆大霉素损伤组与庆大霉素加不同剂量FK506（1mg、2mg）保护组实验动物听性脑干反应(ABR)阈值的变化,并结合耳蜗铺片琥珀酸脱氢酶（SDH)染色方法观察动物耳蜗形态学变化,观察FK506拮抗庆大霉素耳毒性的作用。结果 实验动物的听觉生理检查显示FK506能够拮抗庆大霉素耳毒性,FK506保护组动物听阈明显低于庆大霉素损伤组(P<0.01),随剂量增加,保护作用越明显;同时形态结果显示FK506保护组外毛细胞缺失明显少于庆大霉素损伤组(P<0.01)。结论 FK506对庆大霉素引起的耳毒性有拮抗作用。     

聚DL-天冬氨酸对庆大霉素耳毒性拮抗作用的实验研究

目的　研究聚ＤＬ天冬氨酸（ｐｏｌｙ ＤＬａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ,ＰＡＡ） 对Ｆ３４４ 大鼠庆大霉素（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ,ＧＭ） 耳毒性的拮抗作用。方法　选用健康Ｆ３４４ 大鼠５０ 只,随机分４ 组：Ⅰ为ＧＭ、Ⅱ为ＰＡＡ＋ ＧＭ、Ⅲ为ＰＡＡ、Ⅳ为生理盐水对照组;通过观测４ 组大鼠不同时期、不同频率听性脑干反应（ａｕｄｉｔｏｒｙ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｒｅｓｐｏｎｓ,ＡＢＲ）阈值的改变;计数耳蜗毛细胞死亡率,以观察ＰＡＡ对Ｆ３４４ 大鼠ＧＭ 耳蜗毒性的拮抗作用;用双向扩散血清培养基检测法观察ＰＡＡ 对ＧＭ 抗菌活性的影响。结果　Ⅰ组短纯音１０ ｋＨｚ、８ ｋＨｚ ＡＢＲ阈值与其他３ 组差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１） ,给药１８ ｄ 耳蜗毛细胞死亡率与其他３ 组间差异也有显著性（ Ｐ＜０ ．０１）。结论　ＰＡＡ对庆大霉素的耳毒性具有拮抗作用,且不减低其抗菌活性。     

聚DL—天冬氨酸对庆大霉素耳毒性拮抗作用的实验研究

目的 研究聚ＤＬ－天冬氨酸（ＰＡＡ）对Ｆ－３４４大鼠庆大霉素（ＧＭ）耳毒性的拮抗作用。方法 选用健康Ｆ－３４４大鼠５０只,随机分４组：Ｉ为ＧＭ、Ⅱ为ＰＡＡ＋ＧＭ、Ⅲ为ＰＡＡ、Ⅳ为生理盐水对照组;通过观测４组大鼠不同时期、不同频率听性脑干反应（ＡＢＲ）阈值的改变;计数耳蜗毛细胞死亡率,以观察ＰＡＡ对Ｆ－３４４大鼠ＧＭ耳蜗毒性的拮抗作用;用双向扩散血清培养基检测法观察ＰＡＡ对ＧＭ抗菌活性的影响。结果     

脑活素拮抗豚鼠庆大霉素耳毒性机理的研究

目的探讨脑活素拮抗豚鼠庆大霉素耳毒性作用机理。方法取听力正常豚鼠60只,随机分为4组,每组15只A组(脑活素组),肌肉注射脑活素360mg·kg-1·d-1;B组(庆大霉素组),肌肉注射庆大霉素120mg·kg-1·d-1;C组(庆大霉素 脑活素组),肌肉注射庆大霉素 脑活素,剂量同上;D组(生理盐水组),肌肉注射等量生理盐水。各组均连续用药10d再饲养一周,第17d处死,取左侧听泡,进行琥珀酸脱氢酶化学组织染色观察其活性;取右侧听泡行石蜡包埋切片,在光镜下进行螺旋神经节细胞计数,免疫组织化学SP法检测脑源性神经生长因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)在耳蜗中的表达。结果庆大霉素 脑活素组螺旋神经节细胞退行性病变数目明显低于庆大霉素组,神经纤维变性明显较少,琥珀酸脱氢酶活性明显增高,BDNF在耳蜗中呈阳性表达。结论脑活素对庆大霉素所致耳毒性有明显保护作用,其机理在于脑活素能拮抗庆大霉素对毛细胞有氧代谢的抑制,与BDNF对螺旋神经元的营养修复作用有关。     

丹参对庆大霉素耳蜗毒性的防护作用

目的 探讨丹参对庆大霉素耳蜗毒性的防护作用。方法 择蒙古沙鼠３０只,随机分为３组：（１）庆大霉素组（ＧＭ组）;（２）庆大霉素＋丹参保护组（ＧＤ组）;（３）对照组（ＮＳ组）,每组１０只。ＧＭ组和ＧＤ组臂部肌肉注射庆大霉素１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ,ＧＤ组同时注射丹参１ｇ／ｋｇ／ｄ,对照组注射生理盐水１ｍｌ／ｄ,连续用药１４ｄ后观察耳蜗的形态和功能,结果 ＧＭ组耳蜗功能和结构损害严重,ＧＤ组耳蜗功能和结构损     

5-磷酸二酯酶抑制剂对庆大霉素所致豚鼠耳毒性影响的研究

目的 探讨5-磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂对庆大霉素所致豚鼠耳毒性的听功能及耳蜗形态学的影响.方法 采用随机数字表法将36只豚鼠分为空白对照组、庆大霉素组和PDE5抑制剂组,每组各12只;其中空白对照组未给予特殊处理,庆大霉素组和PDE5抑制剂组给予连续腹腔注射庆大霉素120 mg·kg-1·d-13周后,庆大霉素组继...     

阳离子脂质体介导NT-3基因转染豚鼠耳蜗的实验研究

目的 探讨阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响。方法 克隆人NT-3 cDNA基因，构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组质粒pIPES2-EGFP-NT3。采用脂质体介导的方法，将重组质粒转染豚鼠耳蜗，分别于术后1天、2周、4周观察转染基因在耳蜗及脑干等部位的表达和分布情况。同时进行耳声发射及ABR测试，了解基因转染对豚鼠耳蜗听功能的影响。结果 成功克隆人NT-3 cDNA基因并构建重组质粒pIRES2-EGFP-NT3。重组质粒转染豚鼠耳蜗后，荧光显微镜下观察发现耳蜗螺旋神经节、神经纤维、Corti器、血管纹等均可见绿色荧光，但4周时荧光蛋白的表达强度较1天时明显减弱。而CY3标记的NT-3免疫荧光染色结果基本与EGFP的表达情况一致。此外，对侧耳蜗及第四脑室脉络膜处亦可见较强的绿色荧光。耳蜗基底膜铺片见内外毛细胞结构完整。转染前后豚鼠耳声发射及ABR阈值均无明显改变。结论 阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能无明显影响；外源性NT-3能够在较长时间内持续表达。     

褪黑素在豚鼠耳蜗内的抗氧化作用研究

目的 通过检测豚鼠耳蜗中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量研究褪黑素(melatonin,MLT)在豚鼠耳蜗内的抗氧化作用.方法 雄性杂色豚鼠40只,随机分为4组,每组10只.第2组肌肉注射庆大霉素,且肌肉注射褪黑素.第1组只注射褪黑素,注射褪黑素的时间与剂量与第2组相同.第3组注射庆大霉素,且肌肉注射与褪黑素同等剂量的生理盐水,注射时间与第2组相同.第4组单纯注射庆大霉素.第2、3、4组每天都注射庆大霉素,连续10天.所有动物均于注射庆大霉素前及注射庆大霉素后立即检测听性脑干反应(ABR)阈,庆大霉素注射结束后,测完ABR立即断头处死,取出豚鼠双侧耳蜗,并测定其活性氧含量.结果 注射庆大霉素前,4组实验动物的ABR阈值无显著性差异,本实验的庆大霉素注射剂量可以使听阈提高.注射褪黑素能使ABR阈值降低.注射庆大霉素可以引起耳蜗内活性氧含量增加,注射褪黑素能使耳蜗内活性氧含量降低.结论 褪黑素可以抵抗豚鼠耳蜗中增多的活性氧.     

模拟速尿试验的听力学效应及耳蜗图像分析

通过手术破坏豚鼠（ｎ＝４０）内淋巴囊，造成膜迷路积水模型，模拟不同剂量的速尿试验，发现等效剂量及其２、８倍量速尿试验均能显著降低积水耳的听性脑干（ＡＢＲ）反应阈，其中２倍量降低幅度最大，平均２０．６±５．６ｄＢｎＨＬ。而４０倍量速尿试验无此作用。耳蜗切片的图像分析显示，速尿对积水耳蜗有明显的脱水作用，但与ＡＢＲ反应阈之间无显著线性关系。     

Intraotic Administration of Gentamicin: A New Method to Study Ototoxicity in the Crista Ampullaris of the Bullfrog

A new method of local gentamicin administration was tested in the bullfrog inner ear to achieve ototoxic-induced hair cell destruction. Gelfoam pledgets soaked with known amounts of gentamicin were inserted into the perilymphatic cisterna of the bullfrog through a ventral surgical approach. A dose of 1.20 mg gentamicin, consistent with a perilymphatic concentration of 65 μg/ml, resulted in the desired ototoxic-induced hair cell damage, that is, complete hair cell destruction with minimal disruption of other components of the sensory epithelium. This study demonstrates that this is a useful and simple method to investigate the process of vestibular ototoxicity and hair cell regeneration, including aspects of hair cell destruction and repair.     

畸变产物耳声发射在豚鼠庆大霉素中毒性耳聋早期监测中的作用

目的 研究畸变产物耳声发射（DPOAE）在豚鼠庆大霉素（gentamycin,GM）中毒性耳聋早期监测中的作用.方法经畸变产物耳声发射检测及耳廓反射正常的豚鼠16只（31耳）随机分成两组.GM组8只（16耳）每天肌肉注射GM100 mg/kg,连续10天;对照组8只（15耳）肌肉注射等量0.9%生理盐水10天.每组在肌肉注射前、注射第3、7天测试DPOAE,对1、2,4、6 kHz的DPOAE幅值进行比较分析.结果①对照组豚鼠在肌肉注射0.9%生理盐水的第3、7、10天与注射前比较,DPOAE引出率为100%,1、2,4、6 kHz的幅值差异无统计学意义（P＞0.05）.②GM组在肌肉注射庆大霉素第3天DPOAE的幅值与注射前及对照组比较,4、6 kHz处幅值差异有统计学意义（P＜0.05）;肌肉注射庆大霉素第7天,2,4、6 kHz处幅值差异有统计学意义（P＜0.05）.结论肌肉注射庆大霉素第3天即可发现豚鼠DPOAE 4 kHz以上的高频听力损害,第7天发现4 kHz以下的低频听力损害.     

链霉素耳中毒豚鼠耳蜗iNOS与AChE的表达及其相关性的实验研究

目的探讨链霉素（streptomycin,SM）耳中毒过程中豚鼠耳蜗诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）与乙酰胆碱酯酶（acetylcholine esterase,AChE）的表达及二者之间的相关性。方法16只豚鼠随机分为正常对照组和SM组,每组8只,分别每日腹腔注射生理盐水2.5ml/kg和SM150mg/kg,连续10日。应用免疫组织化学染色及图像分析技术检测耳蜗iNOS和AChE的表达并进行灰度值分析,结合听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）测试监测耳毒性损伤的发生。结果用药10d后,SM组ABR阈值明显高于正常对照组,两组差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫组化结果表明,SM组iNOS及AChE在柯蒂器、血管纹、螺旋神经节、神经纤维的表达显著高于正常对照组,且二者表达呈正相关。结论SM耳中毒时ABR阈值升高,iNOS及AChE表达增强,而且具有一定的相关性。     

稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内人神经营养素-3基因重组腺病毒的表达与观察

目的观察含有人神经营养素-3(human neurotrophin-3,hNT-3)的重组腺病毒(Ad-NT3)在稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内的表达。方法30只听力正常豚鼠暴露于稳态强噪声(130 dB SPL×5 h),3天后经鼓阶外淋巴腔内导入目的基因,24只注射Ad-NT3,6只注射人工外淋巴液作为对照。分别于基因导入后第11、28、56天取材,用免疫组织化学染色方法观察Ad-NT3在耳蜗内的转染。结果基因导入后第11天可见Ad-NT3在耳蜗内成功转染,耳蜗各回均有表达,表达强度在各回基本相等;第28天仍可见Ad-NT3在耳蜗内表达,蜗轴区表达最强,但较第11天表达减弱;56天时未见表达。结论NT-3重组腺病毒能在稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内实现高效表达,表达可以持续相当长时间。     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化

目的探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor gene,BDNF)基因转染的骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSC)在受损耳蜗内的生存和分化情况。方法将转染了BDNF基因并在体外诱导分化的BMSC(BDNF-BMSC)标记后,通过鼓阶注射植入阿米卡星致聋的豚鼠耳蜗内(BDNF-BMSC组,18只),并设注射未诱导分化的BMSC的豚鼠为对照组(BMSC组,18只)。在注射后1、2、4w取耳蜗组织石蜡切片,HE染色和荧光染色观察注射细胞的分布;神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protien,GFAP)抗体免疫组化染色观察注射细胞在耳蜗内的分化。结果 BDNF-BMSC和BMSC在耳蜗内均能成活并分布到一定的区域,鼓阶和前庭阶较多,中阶和蜗轴较少。NSE和GFAP免疫化学可见BDNF-BMSC部分细胞阳性染色,而BMSC阳性细胞较少。BDNF-BMSC在1、2w时平均光密度(AOD)值较高,在4w时显著下降(P<0.05);在各时间点,BDNF-BMSC组AOD值均显著高于BMSC组(P<0.01)。结论诱导分化前后的BMSC耳蜗移植后均能成活并分布到一定的区域,在耳蜗内BDNF-BMSC分化能力明显强于BMSC,但随时间延长分化能力下降。