Purification and Characterization of Polyphenol Oxidase from Hemşin Apple (Malus communis L.)

The polyphenol oxidase (PPO) enzyme was purified and characterized from Hem?in Apple (Malus communis L.), which was organically grown in Hem?in, in the Rize province of Turkey. Enzyme (PPO) activation was determined with catechol substrate. Apples were homogenized with homogenate buffer (pH 8.5). This process was followed by precipitation with (20–80%) saturated solid (NH₄)₂SO₄ and dialysis. Finally, purification with DE52-Cellulose ion-exchange and Sephadex G-25 columns was performed. Experiments were performed at an optimum pH (5.5) and optimum temperature (30–40°C). The kinetic and thermal parameters Km (3.40 mM), Vmax (333.3 EU/mL.min), Ea (3.57 kcal), ?H (2.968 kcal/mol), Q₁₀ (1.33), k_cat (24.57 min^?1) and V₀ (7.2x10³ mM^?1.min^?1) were assessed. Additionally, the effects of Mg²⁺, Pb ²⁺, Fe²⁺, Fe³⁺, Cd²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Co²⁺, Al³⁺, Mn²⁺ and Na⁺ on enzyme activity was recorded, and the IC₅₀ values, K_? values and inhibition types were determined.     

杨桃多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

杨桃多酚氧化酶粗酶液经过DEAE-Toyopearl650M离子交换柱层析,Butyl-Toyopearl650M疏水柱层析后,被纯化了21.6倍,回收率为45.2%。该酶能迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,而对邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Km值为7.92mmol/L,其最适pH为8.0,pH稳定性范围在pH4.0-11.0,最适温度为60℃,热稳定性相对较高,在≥90℃加热30min后仍残留约9%的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸,其次是NaHSO3和盐酸-L-半胱氨酸,Cu2+、Zn2+、Ca2+等金属离子对该酶也有一定的抑制作用。     

番石榴多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

番石榴PPO的粗提取液经过80%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M、CM-Sephadex C-50离子交换柱层析分离后,被纯化了约126倍,回收率为16.13%。该酶迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,而对对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Km值为4.6 mmol/L,其最适pH为7.5,pH稳定性范围在pH4.0~11.0,最适温度为50℃,热稳定性相对较高,在≥90℃加热10 min后仍残留约15%的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸和NaHSO3,其次是植酸、盐酸-L-半胱氨酸、柠檬酸,Ca2+、Mg2+等金属离子对该PPO也有较强的抑制作用。     

Purification and Characterization of Polyphenol Oxidase from Akko XIII Loquat (Eriobotrya japonica cv Akko XIII)

Akko XIII is an important loquat variety grown in Turkey. As with many fruits and vegetables, enzymatic browning catalyzed by polyphenol oxidase (PPO) also occurs in loquats. PPO from Akko XIII loquat was extracted and purified through (NH₄)₂SO₄ precipitation, dialysis and ion exchange chromatography. The enzyme showed several peaks with PPO activity on DEAE-Toyopearl 650 M column, of which only two (isoenzyme A and isoenzyme B) were characterized. Assay of activity of the isoenzymes between pH 3.04 and 7.80 using catechol as substrate showed two activity peaks, one at acidic pH and the other at neutral pH. pH optima of isoenzyme A and B were found to be at 7.4 and 4.98, respectively. The Km values of isoenzyme A and B using catechol as substrate were found to be 152.3 mM and 5.4 mM, respectively. They both displayed maximal activity at 30^oC. The two isoenzymes displayed different heat resistance and sensitivity towards various inhibitors.     

香菜叶多酚氧化酶的分离纯化与部分酶学性质研究

新鲜香菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的多酚氧化酶。该酶比活力达到5 622.95 U/mg,酶活回收率为3.90%,纯化倍数为126.08;全酶分子质量为111.10 kD,亚基分子质量为55.60 kD;最适温度为37 ℃,最适pH值为6.5;在25～45 ℃及pH 6.0～7.0范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为4.04×10－2 mol/L;甲醇、乙醇、异丙醇、氯仿及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2＋、Hg2＋、Ba2＋对其有抑制作用,Co2＋、Pb2＋对其具有一定的激活作用。     

莲藕多酚氧化酶的纯化方法研究

研究了莲藕多酚氧化酶(PPO)的提取纯化。结果表明：莲藕多酚氧化酶采用30% 硫酸铵盐析除杂、80%硫酸铵沉淀、DEAE Sephadex A-50 柱层析、Sephadex G-75 柱层析四步进行分离纯化,所得纯化物经SDS-PAGE检验为均一单带,其分子量约为21kD,其纯化倍数和产率分别为103 倍和0.38%。     

白萝卜多酚氧化酶的酶学特性研究

白萝卜作为我国第二大蔬菜。其贮运和加工过程中的褐变多以酶促褐变为主,全面系统地了解白萝卜多酚氧化酶（PPO）的酶学特性,并研究其抑制手段,对提升白萝卜及其制品的品质和商品价值有着重要的意义。本文以新鲜白萝卜为原材料,采用丙酮洗涤、0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液匀浆法从中提取PPO,考察了pH、温度对酶活的影响,分析了其温度稳定性、底物浓度对PPO活性的影响,探讨了过程的反应动力学,并对多种酶抑制剂对PPO活性的影响进行了比较,为控制加工过程中白萝卜的酶促褐变提供了理论依据。试验结果表明：以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH 值为6.0,最适反应温度为40 ℃,Km和Vmax值分别为53.8 mmol/L和588 U/min。90 ℃热处理2.5 min或85 ℃热处理3.5 min可基本完全钝化其活性,Vc、异Vc和L-cys对PPO酶活的抑制较为明显。     

桑叶多酚氧化酶分离及活性研究

采用分光光度法和扫描电子显微镜对桑叶多酚氧化酶(PPO)的结构、活性以及不同抑制剂的抑制效果进行研究。结果表明:桑叶多酚氧化酶为纤维状蛋白;其最适pH值为7.0,最适温度为40℃;在相同抑制剂浓度下,总体抑制效果为:抗坏血酸>亚硫酸氢钠>柠檬酸>氯化镁>氯化钠。     

芋头多酚氧化酶的分离纯化与酶学特性

以鲜芋头为原料,通过提取、30％～80％饱和度硫酸铵沉淀、透析、超滤,以及柱层析等步骤对芋头多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)进行逐级分离纯化,并探讨其酶学特性及抑制剂对其作用规律.结果 表明:经DEAE-Sepharose、Superdex G-75色谱柱纯化后,得到了电泳纯PPO,比活力为2...     

小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究

为了减少多酚氧化酶(PPO)对产品所带来的负面影响,对从苏北红麦中提取的PPO粗提物进行分离纯化。经硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析,最终得到电泳纯化后只有一条条带的PPO,并对该纯化后的PPO进行酶学性质研究。试验结果为:纯化后PPO总酶活回收率为7.03%,纯化倍数22.35,比酶活为373.44 U/mg,电泳分析表明其相对分子质量约为30 000。测得其最适反应p H为6.5,最适反应温度为37℃;金属离子影响的研究表明,K~+、Na~+对其活性基本无影响,Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)略有激活作用,Zn~(2+)、Cu2+激活作用较强;小麦PPO对邻苯二酚的K_m值为6.90 mmol/L,对焦性没食子酸(三酚类)、邻苯二酚(二酚类)底物亲和性较强,对单酚类(苯酚、愈创木酚)、二酚类(对苯二酚、间苯二酚)底物亲和性很低。     

苹果多酚对多酚氧化酶氧化特性的影响

本文以富士苹果中含量较多的绿原酸、儿茶素、表儿茶素和根皮苷为苹果多酚氧化酶（PPO）作用底物,以磷酸盐缓冲液为苹果汁酶促褐变模拟体系,通过连续测定酶促褐变模拟体系吸光度A420值的变化趋势,研究不同苹果多酚底物对PPO酶促催化特性的影响,并确定多酚氧化酶对该4种底物较适作用条件。结果表明,苹果多酚底物对PPO反应特性影响较大;PPO酶促氧化绿原酸、儿茶素、表儿茶素和根皮苷4种多酚底物适宜的pH分别为5.0、4.0、4.5、4.5;适宜的温度分别为55、70、60、50 ℃;PPO作用适宜的底物浓度分别为5、0.5、2、10 mM;适当提高酶活可促进酶促褐变反应,且该4种底物对多酚氧化酶的亲和力大小为：儿茶素>表儿茶素>绿原酸>根皮苷。该研究为苹果汁褐变控制提供理论依据。     

PPO酶促诱发因素对苹果多酚非酶褐变的影响

为探究苹果多酚氧化酶(PPO)酶促诱发因素对苹果多酚参与的非酶褐变的影响,以绿原酸和根皮苷为底物,以磷酸缓冲液为苹果汁模拟体系,通过控制PPO酶促诱发条件,进行酶促诱发反应,然后钝化酶,模拟体系于60℃进行非酶聚合反应,每隔24 h用色差计测定L*值、a*值、b*值和ΔE*值。结果表明,酶促诱发因素对绿原酸和根皮苷参与的非酶褐变的影响存在较大差异。p H在3.5~6.0,含有绿原酸和根皮苷的模拟体系,其褐变程度随酶促诱发p H升高而增大;酶促诱发温度20~60℃,诱发体系温度对绿原酸参与的非酶褐变影响不显著,而根皮苷在40℃时褐变程度较大;酶促诱发时间分别为40 min和30 min时绿原酸和根皮苷参与的非酶褐变程度较大;酶活14.25~171 U,酶活的增大加速两种多酚参与的非酶褐变。结果同时表明,根皮苷非酶褐变与果汁后浑浊有关,且较高的p H、温度、PPO酶活以及较长的酶促诱发时间加速果汁后浑浊形成。     

苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

丝瓜多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质

从丝瓜中分离纯化出多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）,并对其部分酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级盐析、透析、DEAE-Cellulose DE-52离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化丝瓜PPO。纯化所得酶的比活力为957.9 U/mg,纯化倍数为28.3,酶活力回收率为18.5%;十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）检测结果显示该酶蛋白呈单一条带,为单亚基蛋白,其分子质量约为67.8 kD,且无同工酶;该酶最适pH6.0,最适温度30 ℃,以左旋多巴（L-dopa）为底物,其米氏常数（Km）为1.32 mmol/L,最大反应速率（Vmax）为0.22 OD475 nm/min。     

佛手瓜多酚氧化酶酶学特性研究

以佛手瓜中的多酚氧化酶为研究对象,对其酶学特性的研究表明：佛手瓜果实多酚氧化酶的最适pH 值为7.5,最适温度为30℃,底物浓度与酶活性呈正相关;该酶迅速催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,但对邻苯二酚、对苯二酚和间苯二酚的催化活性较低。抗坏血酸、柠檬酸、四硼酸钠、MgCl2 和EDTA-2Na 对佛手瓜多酚氧化酶的抑制作用依次减弱,抗坏血酸、柠檬酸对佛手瓜多酚氧化酶的抑制作用随着浓度的升高而加强。     

高灌蓝越橘多酚氧化酶的提取和纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法、硫酸铵分级沉淀法及苯基琼脂糖疏水性层析法对高灌蓝越橘多酚氧化酶进行提取和纯化。在提取和纯化中，用加入不同的酚吸收剂和抑制剂并比较酶活性的高低来确认最佳方法。结果表明在粗提中加入酚吸收剂、增溶剂和抑制剂提取效果较好，苯基琼脂糖疏水性层析法对此类酶纯化效果较佳并为后来的辅酶的分离提供了较高的纯化倍数。     

Polyphenol Oxidase from Bean Sprouts (Glycine max L.)

ABSTRACT: Polyphenol oxidase (PPO) was purified and characterized from bean sprouts by ammonium sulfate precipitation, DEAE‐Toyopearl 650M, CM‐Toyopearl 650M, SuperQ‐Toyopearl 650S and QAE‐Toyopearl 550C column chromatographies. Substrate staining of the crude extract on electrophoresis showed the presence of 2 isozymic forms of this enzyme. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be about 54 kDa. The optimum pH was 9.0 and optimum temperature 40 °C. Heat inactivation occurred about 30 °C. PPO showed activity to catechol, pyrogallol and dopamine. These compounds such as ascorbic acid, L‐cysteine, 2‐mercaptoethanol, and glutathione used was the effective inhibitor. Enzyme activity was maintained for 7 d at 4 °C but suddenly decreased after 8 d.