桑叶总生物碱中1-脱氧野尻霉素的测定及方法学考察

[目的]为提取纯化后的桑叶总生物碱供试品中的1-脱氧野尻霉素建立测定方法及对方法学进行考察。[方法]1-脱氧野尻霉素供试品的含量测定采用柱前衍生化高效液相色谱法。[结果]制桑叶总生物碱供试品3份,经测定,供试品中1-脱氧野尻霉素的含量分别为7.99%,8.64%,7.09%。[结论]检测方法简单、快速、准确。     

高效液相色谱-串联四极杆质谱法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素

目的:建立高效液相色谱-串联四级杆质谱联用测定桑叶中1-脱氧野尻霉素含量的方法.方法:以乙腈0.1%甲酸水溶液(12:88,v/v)为流动相,SHIMADZU HRC-NH2柱分离,采用大气压化学电离源(APCI),164.1/146.1,164.1/110.2两对离子,多反应监测(MRM).结果:1-脱氧野尻霉素保留时间为2.87 min,标准曲线在482～2 410μg/L范围内线性关系良好(r=0.9993),平均加样回收率为95.8%,最低检测限为53.6μg/L.结论:该方法选择性强、灵敏度高,可为桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量测定提供参考.     

桑树各药用部位1-脱氧野尻霉素的含量考察

目的:考察桑树资源不同产地、不同树龄、不同采收时间及不同药用部位药材中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量。方法:以芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)衍生-HPLC法测定DNJ含量。色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(150 mm×6.0 mm,5μm);以乙腈-0.1%冰醋酸(40∶60)为流动相,流速:1.0 mL/min;紫外检测波长:254 nm,柱温30℃。结果:建立了桑树资源中DNJ的定量分析方法,桑树各药用部位中均含有DNJ,但含量差异较大。结论:影响桑树DNJ含量的因素较多,与产地、树龄、采收时间及药用部位等密切相关,其中不同部位间含量差异很大,以桑枝皮及桑根皮中含量最高。     

HPLC法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素

据《中国药典》记载，桑科植物桑Morus alba L．的叶、白皮、树枝均可入药，其中桑叶性甘、苦、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效。但是，自从20世纪70年代Yoshiaki等首次从桑白皮和桑枝中分离出1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，DNJ）后，桑叶的药效被进一步发掘，     

RP-HPLC法测定桑叶中N-甲基-1-脱氧野尻霉素

桑叶是桑科植物桑Morus alba L．的干燥叶，性寒，味甘、苦，归肺、肝经。桑叶始载于《神农本草经》。《本草纲目》记载：“桑叶乃手足阳明之药，汁煎代茗，能止消渴，明目长发”。桑叶中的多糖、生物碱、黄酮、氨基酸等有不同程度的降糖作用，其中生物碱为主要降糖活性成分。Asano等从桑叶中分离出6种氮杂糖类生物碱，并确定其结构；Kimura等观察了以上6种生物碱对链脲佐菌素引起的糖尿病小鼠的降糖作用。     

新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素定性及定量分析

目的:建立新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的TLC定性鉴别及HPLC定量分析方法。方法:以正丁醇-冰醋酸-水(4.5∶1.2∶1.2)为展开剂,在高效硅胶G薄层色谱板上展开,氯-联甲苯胺为显色剂。采用YMC-pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.1%醋酸水溶液(B)为流动相,等度洗脱(65%A,35%B),检测波长为263 nm,流速为1.0 m L·min-1。结果:新疆药桑叶中的DNJ在白光下检视,出现明显斑点,Rf值为0.41。DNJ的平均回收率为99.5%(RSD=1.3%),测得不同产地药桑叶中DNJ的含量为0.79~3.42 mg·g-1。结论:建立的方法简便、可行、灵敏、专属性强,重复性好,可用于新疆药桑叶的质量控制。     

桑叶总生物碱中1-脱氧野尻霉素在大鼠体内的药物动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中1-脱氧野尻霉素(DNT)含量的柱前衍生-高效液相色谱荧光法,初步研究桑叶总生物碱中DNJ在大鼠体内的药动学过程。方法大鼠灌胃桑叶总生物碱(给药剂量按DNJ计约为80 mg·kg-1)后不同时间点采集血样,采用柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定,色谱条件为HiQSiL C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%醋酸水溶液(40∶60,V/V)为流动相,荧光检测器激发波长254 nm,发射波长322 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温25℃。DNJ血药浓度-时间数据用药动学软件3P97处理。结果 DNJ血浆浓度在1.4～22.4 mg·L-1线性关系良好,血浆中1-脱氧野尻霉素定量下限为1.4 mg·L-1。日内、日间精密度(RSD)分别为3.7%～5.8%和4.6%～6.0%,方法回收率为97.6%～101.5%,提取回收率为76.3%～81.6%。DNJ在大鼠体内的血药浓度-时间过程符合二房室模型,Ka=(4.85±0.95)h-1,AUC=(19.22±1.37)mg·h·L-1,Cmax=(12.98±1.92)mg·L-1,Tmax=(0.50±0.00)h。结论该法准确可靠,专属性强,适用于DNJ在大鼠体内的血药浓度测定及药代动力学研究。     

阳离子树脂种类及用量对桑叶中1-脱氧野尻霉素纯化效果

目的:确定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)纯化的最佳树脂种类和用量。方法:采用LSI-010型(H型)、001×7(H型)、001×7(Na型)3种阳离子交换树脂纯化桑叶DNJ,并考察等量阳离子交换树脂对不同量桑叶DNJ纯化效果。结果:3种阳离子树脂对桑叶DNJ纯化效果差异较大,等量阳离子树脂对不同上样量的桑叶DNJ纯化效果不同。结论:001×7(Na型)阳离子交换树脂对桑叶DNJ纯化效果最好,阳离子树脂用量与药材量最佳比例为1∶1。     

家蚕及其副产物中1-脱氧野尻霉素含量变化研究

目的:研究不同生长期家蚕及其副产物中1-脱氧野尻霉素的含量变化.方法:采用HPLC法,色谱柱:HiQSiL C18(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-0.1%醋酸(55∶ 45,V/V);流速:1.0 mL/min;柱温25℃;荧光检测器激发波长254 nm,发射波长322 nm.结果:不同生长期家蚕及其副产物中1-脱氧野尻霉素的含量有较大差异,且呈一定规律性变化.结论:初步揭示了1-脱氧野尻霉素在家蚕体内的代谢规律.     

高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量

目的:建立桑叶药材中1脱氧野尻霉素(DNJ)的高效液相色谱荧光检测法的含量测定方法。并对不同生长季节和生长环境桑叶药材的DNJ含量进行测定。方法:桑叶经0.05mol·L^-1盐酸提取,在pH8.5的硼酸盐缓冲液条件下,用芴甲氧酰氯(FMOC Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相色谱荧光检测器测定。液相条件为HiQSiLC₁₈分析柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈0.1%醋酸(55∶45),流速1.0mL·min^-1,柱温25℃,荧光检测器激发波长254nm,发射波长322nm。结果:DNJ与其他组分分离效果较好,线性范围为0.567～34μg·mL^-1(r=0.9998),加样回收率为97.2%。结论:桑叶中DNJ含量与环境因素、温度及生长季节有关,该方法可作为桑叶药材的质量控制方法。     

响应面分析法优化桑叶中1-脱氧野尻霉素的稀酸乙醇浸提工艺

目的： 优化桑叶中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）的稀酸乙醇浸提工艺。 方法： 采用HPLC-ELSD测定1-DNJ含量,流动相乙腈-水（90：10）,ELSD漂移管温度40 ℃,载气流速3.5×10⁵ Pa。以1-DNJ提取率为指标,在单因素试验基础上,通过响应面分析法考察浸提时间、乙醇体积分数及pH对桑叶中1-DNJ提取工艺的影响,利用Design Expert 7.1.6分析软件对试验数据进行分析。 结果： 最佳工艺参数为乙醇体积分数66.53%,pH 6.66,浸提时间2.73 h;1-DNJ实际提取率0.194 6%,与理论量最优值0.1%相差较小。 结论： 建立的二次多项数学模型准确可靠,优选的提取工艺稳定可行,为桑叶资源的开发利用提供参考。     

HPLC-MS-MS分析桑叶总生物碱组成及含量

目的： 采用HPLC-MS-MS法,对桑叶总生物碱部位中的各生物碱成分进行分析和鉴别,采用柱前衍生化HPLC-UV测定生物碱部位中总生物碱的含量。 方法： 采用HiQSiL C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以9-氯甲酸芴甲酯（FMOC-Cl）为柱前衍生化试剂,流动相乙腈-0.1%醋酸（50：50）,流速0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,电喷雾离子源（ESI）,正离子检测模式,以1-脱氧野尻霉素（DNJ）为对照,外标法计算桑叶总生物碱含量。 结果： 鉴定了6个生物碱类成分分别为DNJ,fagomine,3-epi-fagomine,DAB,calystegine B₂和2-O-β-Glc-DAB;测定3批供试品中总生物碱含量均达到75%以上。 结论： 该法简便、准确、灵敏,可用于桑叶总生物碱及其制剂的定性定量分析。     

桑叶生物碱类成分研究概况

桑叶是我国的传统中药之一。现已分离出的8种生物碱单体,其中已知1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)具有高效的糖苷酶抑制作用,fagomine能够促进胰岛素分泌和降低胰岛素抵抗,同时,桑叶总生物碱还具有抑制糖原分解的活性。本文主要对其单体结构、生物活性、提取纯化工艺和检测方法的研究进行归纳讨论,对近几年的桑叶生物碱研究现状进行综述。通过研究桑叶生物碱的化学结构和性质,并且总结分析其含量检测的各种方法和原理及适用范围,从而为生物碱检测方法的进一步改进提供参考。另外,桑叶生物碱在结构上以吡咯烷型生物碱、去甲莨菪烷型生物碱、亚氨型生物碱为主,分子中均具有2~5个羟基的多羟基生物碱,某些羟基与葡萄糖、半乳糖形成α,β糖苷。但是,目前桑叶生物碱的含量测定方法主要集中在对其中1-脱氧野尻霉素的研究上,对于总生物碱含量的测定方法研究相对较少。因此,在1-DNJ含量测定的方法基础上,建立合适的桑叶总生物碱含量测定方法很有必要,也为充分开发桑叶药用价值提供了铺垫。     

不同采收期桑叶药材的质量比较

目的：研究桑叶的最佳采收期。方法：采用HPLC分析不同时期采收的桑叶药材中芦丁及绿原酸的含量。结果：10月下旬桑叶中芦丁及绿原酸含量相对较高。结论：桑叶最佳采收期应为10月下旬经初霜后，这符合桑叶药用须经霜的传统要求。     

反相高效液相色谱法测定桑枝中1-脱氧野尻霉素的含量

 目的建立测定桑枝中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法。方法采用9-芴基氯甲酸甲酯标记、配有荧光检测器的反相高效液相色谱法,色谱柱为DIAMONSIC C₁₈柱(4.60mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸(1∶1),流速为1.0mL·min^-1,柱温为室温,检测波长为激发光254nm与发射光322nm,正交法考察反应温度、缓冲液pH值、反应时间3个因素对DNJ衍生化的影响。结果DNJ在3.6～36mg·L^-1内具有良好的线性关系(r=0.9999,n=5),检测限为0.08mg·L^-1(S/N=3),平均回收率为99.2%,RSD=3.5%(n=5),在30℃,pH7下反应50min,为DNJ衍生化的理想条件。桑枝富含DNJ,其含量在桑品种、生长季节和老嫩程度间存在显著差异。结论方法准确灵敏、快速简便,可用于桑枝及其制品中DNJ含量的大数量样本测定。DNJ在桑枝中具有一定的累积作用。     

高效液相色谱法测定金糖宁胶囊中1-脱氧野尻霉素的含量

目的:建立反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定金糖宁胶囊中1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)的含量。方法:样品经处理过的D001-CC型阳离子交换树脂上用氨水洗脱收集后,用2 g·L-1的芴甲氧羰酰氯(FMOC-C1)柱前衍生化,再采用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定。ODS-C18色谱柱(4.0 mm×250 mm,5μm),流动相乙睛-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长263 nm,柱温25℃。结果:1-脱氧野尻霉素在0.84~8.4μg线性关系良好(r=1.000 0),精密度RSD0.3%,重复性RSD 0.6%,衍生化后的样品溶液在24 h内稳定,平均回收率109.6%,RSD 0.4%。结论:该方法稳定可靠,重复性好,精密度高,可用于金糖宁胶囊中1-脱氧野尻霉素的含量测定。     

HPLC测定桑叶及其炮制品中绿原酸含量

目的：建立桑叶及其炮制品中绿原酸的含量测定方法,考察桑叶炮制前后绿原酸的含量变化。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为AgilentXDB-C18,流动相为甲醇-0.01mol·L^-1磷酸二氢钾（19∶81）,pH=3.58,检测波长为328nm,流速为1.0mL·min^-1,柱温为35℃。结果：绿原酸进样量在0.25～3.0μg呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.0%,RSD=3.32%（n=5）。桑叶药材与生品中绿原酸含量显著高于蜜炙品,不同地区药材绿原酸含量高低依次为河北〉安徽〉浙江〉江苏〉湖南。结论：本方法简单、准确,能有效用于桑叶及其炮制品的质量控制。     

毛细管电泳法测定桑叶中的有效成分

目的建立测定桑叶中的有效成分槲皮素(Quercetin)、紫槲皮甙(Rutoside)、绿原酸(Chlorogenic acid)的一种简便方法.方法在熔硅毛细管(58.2 cm×75 μm i.d.,有效长度50.6 cm)柱上,以0.01 mol/L磷酸盐与0.02 mol/L硼砂混合缓冲液(pH=8.60)作电解质,电压为20 kV,温度30℃,真空进样5 s,于254 nm处紫外检测.结果分离完全的色谱峰,有良好的线性关系,R=0.998.结论方法高效、快速.     

荷叶中生物碱提取及纯化工艺研究

目的:优选荷叶总生物碱的提取纯化工艺。方法:荷叶药材经过冷浸、浓缩、索氏提取、萃取、碱析,分离荷叶总生物碱,并以酸性染料比色法测定荷叶总生物碱含量。结果:荷叶用含0.1%盐酸的70%乙醇浸泡提取36 h,提取3次后中和、浓缩,再以乙酸乙酯为溶媒索氏提取3 h,再以pH 1的酸水及乙酸乙酯先后进行萃取,所得乙酸乙酯萃取液用40%氢氧化钠溶液碱析,所制荷叶总生物碱质量分数达到90%以上。结论:此提取纯化工艺操作简便,方法可行,重复性好,为荷叶总生物碱的开发利用提供了实验依据。